Целью нашего исследования было обнаружение ассоциативных связей между продукцией общего IgE у больных пыльцевой аллергией (ПА) представителей русской этнической группы Астраханской области и антигенами HLA I класса.
Материал и методы. Распределение HLA-антигенов локусов А и В было изучено у 65 больных ПА. Контрольную группу составили 200 здоровых доноров-астраханцев русской национальности. Общая группа больных ПА была разделена на две подгруппы. В первую подгруппу вошли 42 человека, у которых общий уровень IgE превысил нормальное значение (100 МЕ/мл). Вторую подгруппу составили больные ПА (23 человека) с общим уровнем IgE менее 100 МЕ/мл. В качестве контрольных значений использовались результаты типирования 200 здоровых доноров-астраханцев русской национальности.
У всех пациентов было проведено аллергологическое обследование, которое включало: сбор подробного аллергологического анамнеза, кожное аллергологическое тестирование, определение общего IgE в сыворотке крови.
Кожное тестирование осуществлялось при помощи скарификационных кожных проб с водно-солевыми экстрактами аллергенов из пыльцы растений производства ФГУП НПО «Аллерген» (г. Ставрополь) в период ремиссии ПА вне сезона цветения аллергенных растений. В 1 мл водно-солевого экстракта каждого аллергена содержалось 10000 PNU. Диагностический набор включал 23 пыльцевых аллергена: лещина, ольха, дуб, береза, ясень, клен, тимофеевка, овсяница, ежа, рожь, мятлик, райграс, лисохвост, пырей, кукуруза, конопля, полевица, одуванчик, лебеда, амброзия, подсолнечник, полынь, циклахена. Кожное тестирование проводилось в период ремиссии заболевания вне сезона цветения растений.
У всех обследованных был определен общий уровень IgE в сыворотке крови методом одностадийного твердофазного иммуноферментного анализа (ИммуноФА-IgE, ЗАО «НВО Иммунотех», г. Москва). Общий уровень IgE считался повышенным при его значениях выше 100 МЕ/мл.
Серологическое типирование антигенов HLA локусов А и В осуществлялось путём исследования лимфоцитов периферической крови с помощью лимфоцитотоксической реакции. В основе лимфоцитотоксического теста лежит реагирование лимфоцитов периферической крови индивидуума, имеющих определенные антигены, с антителами соответствующей специфичности. Идентификацию антигенов HLA I класса проводили с использованием HLA-типирующих сывороток производства ЗАО «Межрегиональный центр иммуногенетики и гистотипирующих реагентов «Гисанс» (г. Санкт-Петербург, Россия).
Статистическую оценку значимости различий частот встречаемости антигенов и их гаплотипов проводили с использованием критерия χ2. Относительный риск (RR) вычисляли по формуле Haldane. При RR>1 определяли показатель этиологической фракции (EF). При RR<1 использовали показатель превентивной фракции (PF). Различия считали значимыми при р<0,05.
Результаты и обсуждение. На первом этапе исследования мы изучили HLA-профиль у больных ПА с уровнем общего IgE более 100 МЕ/мл (таблица 1). В состав исследуемой группы вошли 42 человека.
Таблица 1 - Распределение антигенов HLA локусов А и В у больных поллинозом с общим уровнем IgE>100 МЕ/мл
|
Антиген HLA |
Больные П с уровнем общего IgE>100 МЕ/мл n=42 |
Контроль n=200 |
χ2 |
RR |
EF |
PF |
||||
|
n |
Частота антигена, % |
Частота гена |
n |
Частота антигена, % |
Частота гена |
|||||
|
A1 |
9 |
21,4 |
0,114 |
43 |
21,5 |
0,114 |
0,04 |
1,03 |
0,006 |
- |
|
A2 |
16 |
38 |
0,213 |
104 |
52 |
0,307 |
3,27 |
0,57 |
- |
0,274 |
|
A3 |
5 |
11,9 |
0,061 |
53 |
26,5 |
0,143 |
4,90 |
0,40 |
- |
0,154 |
|
A9 |
6 |
14,3 |
0,074 |
38 |
19 |
0,100 |
0,88 |
0,75 |
- |
0,046 |
|
A10 |
12 |
28,6 |
0,155 |
43 |
21,5 |
0,114 |
0,63 |
1,48 |
0,093 |
- |
|
A11 |
3 |
7,1 |
0,036 |
28 |
14 |
0,075 |
0,91 |
0,54 |
- |
0,059 |
|
A19 |
15 |
35,7 |
0,198 |
21 |
10,5 |
0,054 |
15,49 |
4,71 |
0,281 |
- |
|
A28 |
4 |
9,5 |
0,049 |
9 |
4,5 |
0,023 |
0,88 |
2,36 |
0,055 |
- |
|
Ax |
14 |
33,3 |
0,184 |
60 |
30 |
0,163 |
0,06 |
1,18 |
0,051 |
- |
|
B5 |
6 |
14,3 |
0,074 |
35 |
17,5 |
0,092 |
0,53 |
0,83 |
- |
0,029 |
|
B7 |
13 |
30,9 |
0,169 |
43 |
21,5 |
0,114 |
1,25 |
1,66 |
0,123 |
- |
|
B8 |
8 |
19 |
0,1 |
19 |
9,5 |
0,049 |
2,30 |
2,29 |
0,107 |
- |
|
B12 |
7 |
16,7 |
0,087 |
34 |
17 |
0,089 |
0,08 |
1,02 |
0,003 |
- |
|
B13 |
4 |
9,5 |
0,049 |
24 |
12 |
0,062 |
0,52 |
0,84 |
- |
0,018 |
|
B14 |
0 |
0 |
- |
11 |
5,5 |
0,028 |
3,85 |
0,19 |
0 |
0 |
|
B15 |
2 |
4,8 |
0,024 |
15 |
7,5 |
0,039 |
0,93 |
0,74 |
- |
0,017 |
|
B16 |
7 |
16,7 |
0,087 |
15 |
7,5 |
0,039 |
2,51 |
2,53 |
0,101 |
- |
|
B17 |
3 |
7,1 |
0,056 |
22 |
11 |
0,057 |
1,05 |
0,70 |
- |
0,03 |
|
B18 |
5 |
11,9 |
0,061 |
25 |
12,5 |
0,065 |
0,13 |
1,01 |
0,001 |
- |
|
B21 |
2 |
4,8 |
0,024 |
5 |
2,5 |
0,013 |
0,08 |
2,19 |
0,026 |
- |
|
B22 |
1 |
2,4 |
0,012 |
7 |
3,5 |
0,018 |
0,71 |
0,93 |
- |
0,002 |
|
B27 |
2 |
4,8 |
0,024 |
13 |
6,5 |
0,034 |
0,60 |
0,86 |
- |
0,008 |
|
B35 |
11 |
26,2 |
0,141 |
26 |
13 |
0,068 |
3,70 |
2,40 |
0,153 |
- |
|
B40 |
7 |
16,7 |
0,087 |
24 |
12 |
0,062 |
0,32 |
1,52 |
0,057 |
- |
|
Bx |
8 |
19 |
0,100 |
76 |
38 |
0,213 |
6,36 |
0,40 |
- |
0,238 |
Как видно из таблицы 1, по сравнению со здоровыми лицами у больных ПА с высоким уровнем общего IgE реже встречалась гомозиготность по локусу В (19% против 38%); гомозиготность по локусу А, напротив, типировалсь чаще (33,3% против 30%). Однако статистически значимые различия с положительным характером ассоциативной связи получены только для А19 (RR=4,71; EF=0,281; p< 0,001). Анализ показал, что высокий общий уровень IgE у больных ПА негативно ассоциирован с HLA-антигенами А3 (RR=0,40;1/RR=2,5; PF=0,154; p<0,05), В14 (RR=0,19; 1/RR= 5,26; p<0,05), а также с гомозиготностью по локусу В (RR=0,40; 1/RR= 2,5; PF=0,238; p<0,025).
Группа больных ПА с общим уровнем сывороточного IgE ниже 100 МЕ/мл состояла из 14 пациентов.
Сравнительный анализ показал, что у больных ПА с низким уровнем IgE-ответа статистически значимо реже, чем в здоровой популяции, встречается антиген В17 (RR=0,17; 1/RR=5,88; p<0,05) (таблица 2).
Таблица 2 - Распределение антигенов HLA локусов А и В у больных поллинозом с общим уровнем IgE<100 МЕ/мл
|
Антиген HLA |
Больные ПА с уровнем общего IgE<100 МЕ/мл n=23 |
Контроль n=200 |
χ2 |
RR |
EF |
PF |
||||
|
n |
Частота антигена, % |
Частота гена |
n |
Частота антигена, % |
Частота гена |
|||||
|
A1 |
3 |
13 |
0,067 |
43 |
21,5 |
0,114 |
1,49 |
0,62 |
- |
0,077 |
|
A2 |
11 |
47,8 |
0,278 |
104 |
52 |
0,307 |
0,36 |
0,85 |
- |
0,104 |
|
A3 |
6 |
26,1 |
0,14 |
53 |
26,5 |
0,143 |
0,09 |
1,02 |
0,006 |
- |
|
A9 |
7 |
30,4 |
0,166 |
38 |
19 |
0,100 |
1,04 |
1,92 |
0,146 |
- |
|
A10 |
7 |
30,4 |
0,166 |
43 |
21,5 |
0,114 |
0,50 |
1,65 |
0,119 |
- |
|
A11 |
4 |
17,4 |
0,091 |
28 |
14 |
0,075 |
0,02 |
1,40 |
0,049 |
- |
|
A19 |
3 |
13 |
0,077 |
21 |
10,5 |
0,054 |
0,00 |
1,43 |
0,039 |
- |
|
A28 |
0 |
0 |
0 |
9 |
4,5 |
0,023 |
2,55 |
0,43 |
0 |
0 |
|
Ax |
4 |
17,4 |
0,091 |
60 |
30 |
0,163 |
2,28 |
0,54 |
- |
0,138 |
|
B5 |
5 |
21,7 |
0,115 |
35 |
17,5 |
0,092 |
0,05 |
1,39 |
0,061 |
- |
|
B7 |
8 |
34,8 |
0,192 |
43 |
21,5 |
0,114 |
1,38 |
1,99 |
0,173 |
- |
|
B8 |
2 |
8,7 |
0,044 |
19 |
9,5 |
0,049 |
0,25 |
1,08 |
0,007 |
- |
|
B12 |
2 |
8,7 |
0,044 |
34 |
17 |
0,089 |
1,75 |
0,56 |
- |
0,064 |
|
B13 |
2 |
8,7 |
0,044 |
24 |
12 |
0,062 |
0,66 |
0,84 |
- |
0,017 |
|
B14 |
2 |
8,7 |
0,044 |
11 |
5,5 |
0,028 |
0,02 |
1,92 |
0,042 |
- |
|
B15 |
2 |
8,7 |
0,044 |
15 |
7,5 |
0,039 |
0,04 |
1,39 |
0,024 |
- |
|
B16 |
3 |
13 |
0,077 |
15 |
7,5 |
0,039 |
0,27 |
2,04 |
0,067 |
- |
|
B17 |
0 |
0 |
0 |
22 |
11 |
0,057 |
4,18 |
0,17 |
0 |
0 |
|
B18 |
3 |
13 |
0,077 |
25 |
12,5 |
0,065 |
0,07 |
1,18 |
0,019 |
- |
|
B21 |
0 |
0 |
0 |
5 |
2,5 |
0,013 |
2,28 |
0,76 |
0 |
0 |
|
B22 |
1 |
4,3 |
0,022 |
7 |
3,5 |
0,018 |
0,15 |
1,72 |
0,018 |
- |
|
B27 |
2 |
8,7 |
0,044 |
13 |
6,5 |
0,034 |
0,0 |
1,61 |
0,033 |
- |
|
B35 |
4 |
17,4 |
0,091 |
26 |
13 |
0,068 |
0,07 |
1,52 |
0,059 |
- |
|
B40 |
3 |
13 |
0,077 |
24 |
12 |
0,062 |
0,04 |
1,23 |
0,024 |
- |
|
Bx |
5 |
21,7 |
0,115 |
76 |
38 |
0,213 |
3,11 |
0,48 |
- |
0,204 |
После уточнения HLA-профилей больных с низким и высоким уровнями IgE-ответа мы провели сравнительный анализ распределения HLA-антигенов I класса в исследуемых группах (таблица 3).
Таблица 3 - Сравнение распределения частот антигенов HLA локусов А и В у больных поллинозом в зависимости от общего уровня IgE
|
Антиген HLA |
Больные ПА с уровнем общего IgE>100 МЕ/мл n=42 |
Больные ПА с уровнем общего IgE<100 МЕ/мл n=23 |
χ2 |
RR |
EF |
PF |
||||
|
n |
Частота антигена, % |
Частота гена |
n |
Частота антигена, % |
Частота гена |
|||||
|
A1 |
9 |
21,4 |
0,114 |
3 |
13 |
0,067 |
0,24 |
1,36 |
0,085 |
- |
|
A2 |
16 |
38 |
0,213 |
11 |
47,8 |
0,278 |
1,05 |
0,68 |
- |
0,188 |
|
A3 |
5 |
11,9 |
0,061 |
6 |
26,1 |
0,140 |
3,24 |
0,39 |
- |
0,159 |
|
A9 |
6 |
14,3 |
0,074 |
7 |
30,4 |
0,166 |
3,54 |
0,39 |
- |
0,189 |
|
A10 |
12 |
28,6 |
0,155 |
7 |
30,4 |
0,166 |
0,20 |
0,90 |
- |
0,033 |
|
A11 |
3 |
7,1 |
0,036 |
4 |
17,4 |
0,091 |
2,87 |
0,38 |
- |
0,104 |
|
A19 |
15 |
35,7 |
0,198 |
3 |
13 |
0,077 |
2,77 |
3,30 |
0,249 |
- |
|
A28 |
4 |
9,5 |
0,049 |
0 |
0 |
0 |
0,97 |
5,49 |
0,078 |
- |
|
Ax |
14 |
33,3 |
0,184 |
4 |
17,4 |
0,091 |
1,17 |
2,20 |
0,189 |
- |
|
B5 |
6 |
14,3 |
0,074 |
5 |
21,7 |
0,115 |
1,24 |
0,60 |
- |
0,09 |
|
B7 |
13 |
30,9 |
0,169 |
8 |
34,8 |
0,192 |
0,35 |
0,83 |
- |
0,064 |
|
B8 |
8 |
19 |
0,100 |
2 |
8,7 |
0,044 |
0,56 |
2,12 |
0,101 |
- |
|
B12 |
7 |
16,7 |
0,087 |
2 |
8,7 |
0,044 |
0,26 |
1,82 |
0,075 |
- |
|
B13 |
4 |
9,5 |
0,049 |
2 |
8,7 |
0,044 |
0,11 |
1,01 |
0,0005 |
- |
|
B14 |
0 |
0 |
0 |
2 |
8,7 |
0,044 |
7,23 |
0,10 |
0 |
0 |
|
B15 |
2 |
4,8 |
0,024 |
2 |
8,7 |
0,044 |
1,37 |
0,53 |
- |
0,04 |
|
B16 |
7 |
16,7 |
0,087 |
3 |
13 |
0,077 |
0 |
1,24 |
0,032 |
- |
|
B17 |
3 |
7,1 |
0,056 |
0 |
0 |
0 |
0,48 |
4,16 |
0,054 |
- |
|
B18 |
5 |
11,9 |
0,061 |
3 |
13 |
0,077 |
0,28 |
0,86 |
- |
0,019 |
|
B21 |
2 |
4,8 |
0,024 |
0 |
0 |
0 |
0,10 |
2,90 |
0,031 |
- |
|
B22 |
1 |
2,4 |
0,012 |
1 |
4,3 |
0,022 |
1,42 |
0,54 |
- |
0,02 |
|
B27 |
2 |
4,8 |
0,024 |
2 |
8,7 |
0,044 |
1,37 |
0,53 |
- |
0,041 |
|
B35 |
11 |
26,2 |
0,141 |
4 |
17,4 |
0,091 |
0,25 |
1,58 |
0,096 |
- |
|
B40 |
7 |
16,7 |
0,087 |
3 |
13 |
0,077 |
0 |
1,24 |
0,032 |
- |
|
Bx |
8 |
19 |
0,100 |
5 |
21,7 |
0,115 |
0,34 |
0,83 |
- |
0,04 |
У больных ПА с высоким общим уровнем сывороточного IgE с чаще, чем в группе сравнения, встречались антигены А1, А19, А28, В8, В12, В13, В16, В17, В21, В32, В40, а также гомозиготное носительство антигенов локуса А. С меньшей частотой, чем в группе больных с уровнем общего IgE<100 МЕ/мл, типировались антигены А2, А3, А9, А10, А11, В5, В7, В14, В15, В18, В22, В27 и гомозиготность по локусу В. Однако статистически значимые различия установлены только для антигена В14, в случае его присутствии в генотипе больного ПА риск гиперпродукции общего IgE уменьшается в 10 раз (RR=0,10; 1/RR=10; p<0,01).
Сравнительное изучение частотных спектров двухлокусных гаплотипов HLA-А-В у больных ПА с высоким и низким уровнями общей IgE-продукции выявило некоторые зависимости (таблица 4).
Таблица 4 - Сравнение частот некоторых двухлокусных гаплотипов HLA-A-В у больных поллинозом в зависимости от общего уровня IgE
|
Гаплотипы А-В |
Больные ПА с уровнем общего IgE>100 МЕ/мл n=42 |
Больные ПА с уровнем общего IgE<100 МЕ/мл n=23 |
RR1 p1 |
ПА n=65 |
RR2 p2 |
RR3 p3 |
|
А2В7 |
11,9 |
13 |
0,86 p1>0,05 |
12,3 |
0,99 p2>0,05 |
1,15 p3>0,05 |
|
А2В8 |
2,4 |
13 |
0,21 p1<0,025 |
6,2 |
0,43 p2>0,05 |
2,33 p3>0,05 |
|
А2В35 |
11,9 |
8,7 |
1,26 p1>0,05 |
10,8 |
1,14 p2>0,05 |
0,91 p3>0,05 |
|
А2В40 |
7,1 |
8,7 |
0,76 p1>0,05 |
7,8 |
0,97 p2>0,05 |
1,28 p3>0,05 |
|
А2Вх |
7,1 |
13 |
0,52 p1>0,05 |
9,2 |
0,81 p2>0,05 |
1,56 p3>0,05 |
|
А9В7 |
2,4 |
13 |
0,21 p1<0,025 |
6,2 |
0,49 p2>0,05 |
2,33 p3>0,05 |
|
А10В18 |
7,1 |
4,3 |
1,33 p1>0,05 |
6,2 |
1,21 p2>0,05 |
0,91 p3>0,05 |
|
А10В35 |
9,5 |
8,7 |
1,00 p1>0,05 |
9,2 |
1,07 p2>0,05 |
1,06 p3>0,05 |
|
А19В7 |
11,9 |
0 |
6,89 p1>0,05 |
7,8 |
1,61 p2>0,05 |
0,23 p3>0,05 |
|
АхВ8 |
7,1 |
0 |
4,16 p1>0,05 |
4,6 |
1,58 p2>0,05 |
0,38 p3>0,05 |
|
АхВ12 |
7,1 |
4,3 |
1,33 p1>0,05 |
6,2 |
1,21 p2>0,05 |
0,91 p3>0,05 |
|
АхВх |
7,1 |
4,3 |
1,33 p1>0,05 |
6,2 |
1,21 p2>0,05 |
0,91 p3>0,05 |
RR1 - величина относительного риска общего уровня IgE>100 МЕ/мл;
RR2 - величина относительного риска общего уровня IgE>100 МЕ/мл у больных ПА;
RR3 - величина относительного риска общего уровня IgE<100МЕ/мл у больных ПА.
Как следует из представленных данных, гаплотипические сочетания А2-В7 и А10-В35 встречаются в сравниваемых группах, а также в общей группе больных ПА с приблизительно одинаковой частотой независимо от общего уровня продукции IgE. Величины относительного риска, равные 6,89 и 4,16, определены для гаплотипов А19-В7 и Ах-В8 соответственно, однако различия между группами оказались статистически незначимыми (p>0,05). Нами установлено, что у больных ПА низкий уровень общей продукции IgE маркируется гаплотипическими сочетаниями А2-В8 и А9-В7: показатели RR в обоих случаях равнялись 0,21 (1/RR=4,76; p<0,025).
Выводы. Таким образом, единственным HLA-маркером из числа продуктов HLA I класса, ассоциированным с высоким уровнем общей продукции IgE у больных ПА, является антиген А19. По сравнению с контрольной группой низкий уровень общей IgE продуктивности сопряжен с антигеном А3 и гомозиготностью по локусу В. Сравнительный анализ между группами больных ПА с низким и высоким уровнями IgE-ответа показал, что гипопродукция общего IgE ассоциирована с носительством антигена В14 и гаплотипических сочетаний А2-В8, А9-В7.
Согласно полученным нами данным, гены HLA I класса локусов А и В вовлечены в регуляцию продукции общего IgE у больных ПА.
Рецензенты:
- Эсаулова Т.А., д.м.н., профессор, зав. терапевтической службой Негосударственного учреждения здравоохранения «Медико-санитарная часть», г. Астрахань.
- Астахин А.В., д.м.н., профессор, заместитель главного врача по клинико-экспертной работе Государственного учреждения здравоохранения «Александро-Мариинская клиническая больница», г. Астрахань.
Работа получена 10.11.2011