Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,813

ИЗОЛИРОВАНИЕ ОЛАНЗАПИНА ИЗ МОДЕЛЬНЫХ ПРОБ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ

Ремезова И.П. 1 Сварыч М.В. 1
1 Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО «Волгоградский медицинский университет» Минздрава РФ
Оланзапин – препарат группы атипичных нейролептиков, которые применяют при шизофрении и других заболеваниях нервной системы. Известны случаи отравления оланзапином со смертельным исходом. В связи с этим его определение во внутренних органах и биологических объектах является решающим в диагностике смертельных отравлений. Целью настоящего исследования явилось определение степени извлечения оланзапина из модельных проб печени и почек классическими методами, а также разработка оптимальной методики его изолирования. Степень извлечения оланзапина из модельных проб печени и почек определяли с использованием классических методов изолирования: Стаса-Отто, А.А. Васильевой, В.Ф. Крамаренко. Наибольшее количество оланзапина (из почек 57,98 – 58,71 % и из печени 60,73 – 61,68 %) изолируется методом А.А. Васильевой. Тем не менее, это количество не приближается к максимальному. Разработана оптимальная методика изолирования оланзапина из модельных проб печени и почек. В извлечении из раствора с рН=2 удается обнаружить 71,80- 73,05 % оланзапина, в то время как в извлечении из раствора с рН=12 – 82,94- 83,25 %.
изолирование
модельные пробы
оланзапин
1. Изолирование, обнаружение и количественное определение оланзапина в биологических объектах/ И.П. Ремезова, Д.С. Лазарян, А.В. Воронков и др.// Фундаментальные исследования. – 2015. - №2-24. – С.5416-5420.
2. Изучение влияния природы растворителя и рН на изолирование оланзапина из объектов небиологического происхождения/И.П. Ремезова, Д.С. Лазарян, А.Б. Саморядова и др.// Международный научно-исследовательский журнал.-2013.- №11-3 (18).- С. 58-59.
3. Обнаружение клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола с помощью метода тонкослойной хроматографии/ И.П. Ремезова, Д.С. Лазарян, Т.И. Максименко и др.// Научное обозрение.-2014.-№12, ч.1.- С. 207-210.
4. Разработка методик обнаружения некоторых атипичных нейролептиков для целей химико-токсикологического анализа/ И.П. Ремезова, Д.С. Лазарян, Т.И. Максименко и др.// Фармация и фармакология.-2014.-№6 (7).-С.54-59.
5. Olanzapine: сайт Toxnet-2014 [Электронный ресурс]. – URL: http://toxnet.nlm.nih.gov/cgi-bin/sis/search2/f?./temp/~DEapDv:1 (дата обращения 01.12.2014 г).

Группа препаратов атипичных нейролептиков в последнее время стали все больше применяться для лечения различных психических заболеваний. Одним из представителей этой группы является оланзапин, который по механизму фармакологического действия характеризуется взаимодействием с несколькими различными нейромедиаторными системами: дофаминовыми, серотониновыми, норадренергическими, холинергическими и гистаминовыми рецепторами. Препарат широко применяют при шизофрении и других заболеваниях.  Известны случаи отравления оланзапином со смертельным исходом. Клинические симптомы и патоморфологическая картина при отравлениях оланзапиномнехарактерны[5]. В связи с этим его определение во внутренних органах и биологических объектах является решающим в диагностике смертельных отравлений.

Целью настоящего исследования явилось определение степени извлечения оланзапина из модельных проб печени и почек классическими методами, а также разработка оптимальной методики его изолирования.

Материалы и методы исследования. Приготовление модельных проб печени и почек. К 10 г измельченных до размера 0,5×0,5×0,5 см3 печени и почек (по отдельности) добавляли раствор оланзапина в терапевтической, токсической и летальной концентрации. Таким образом, концентрация оланзапина во внутренних органах была  1,5; 4,0; 8,5  мкг. Внутренние органы оставляли на 24 часа при комнатной температуре. 

Метод Стаса-Отто: 10,0 г биоматериала измельчали и заливали абсолютным этанолом, подкисляли щавелевой кислотой до рН=2-3. Перемешивали и проверяли значение рН, настаивали при комнатной температуре в течение суток при периодическом перемешивании и проверяли значение рН. Жидкую фазу сливали, операцию повторяли 2-3 раза (в течение 2-3 суток), затем биоматериал помещали на фильтр и промывали спиртом; спиртовые вытяжки объединяли и упаривали на водяной бане при 40-50°С до густоты сиропа. Сиропообразную жидкость обрабатывали этанолом до прекращения выпадения осадка, жидкость фильтровали, снова упаривали до густоты сиропа и вновь осаждали белки. Остаток обрабатывали 20-25 мл воды, осадок отфильтровывали, проводили экстракцию хлороформа (2-3 порции), получали кислое хлороформное извлечение. Водную фазу подщелачивали 25% раствором NH4OH до рН=9-10, извлекали хлороформом (2-3) порции, получали щелочное хлороформное извлечение.

Метод А.А. Васильевой: 10,0 г биоматериала измельчали и заливали водой, подкисляли  щавелевой кислотой и настаивали при комнатной температуре в течение 1 часа, перемешивали, проверяли значение рН, вытяжку фильтровали, центрифугировали и экстрагировали хлороформом (трижды) - осторожно, во избежание эмульгирования с водой. Водную фазу подщелачивали 20% NaOH и трижды экстрагировали хлороформом.

Метод В.Ф. Крамаренко: 10,0 гбиоматериала измельчали и заливали 0,02М раствором H2SO4 до рН=2,5, настаивали 2 часа при периодическом перемешивании, проверяли рН, водный слой процеживали. Операцию проводили 2 раза. Водную вытяжку объединяли, центрифугировали, добавляли сульфат аммония до насыщения, центрифугировали, и извлекали эфиром 2-3 раза. К водной фазе прибавляли небольшими порциями раствор NaOH 20% до рН=9-10 и экстрагировали эфиром или хлороформом.

Обнаружение и количественное определение оланзапина проводили методом ВЭЖХ. Использовали следующие условия хроматографирования: хроматографическая колонка размером 2×75 мм, заполненная обращено-фазовым сорбентом «ProntoSil 120-5-C18 AQ»; подвижная фаза: элюент А  - 0,1% раствор кислоты трифторуксусной, элюент Б - ацетонитрил; скорость потока - 100 мкл/мин; время измерения 0,18 с; температура термостата колонки - комнатная, объем пробы 2 мкл, длина волны - 270 нм. Для выяснения характеристик удерживания оланзапина выполняли анализ в градиентном режиме от 10% элюента Б до 90% за 15 мин.

Полученные данные статистически обрабатывали с помощью пакета программ EL.

Результаты исследования и обсуждение. Нами были получены следующие данные при использовании метода Стаса-Отто, представленные в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Степень извлечения оланзапина из печени

Внесено, мкг

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

50,54; 49,23; 53,76;

48,44; 52,05; 51,19

=50,87%; SD=1,93;

Δ=2,02; ε=3,97 %

4,0

51,56; 50,34; 48,12;

49,65; 52,32; 50,65

=50,44%; SD=1,47;

Δ=1,55; ε=3,06%

8,5

47,45; 50,49; 48,78;

52,19; 49,98; 51,14

=50,01%; SD=1,69;

Δ=1,78; ε=3,55%

       Полученные данные свидетельствуют о том, что методом Стаса-Отто из печени изолируется 50,01- 50,87 % оланзапина. Относительная ошибка определения не превышает

± 4 %.

Таблица 2

Степень извлечения оланзапина из почек

Внесено, мкг

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

45,74; 49,52; 48,78;

48,44; 46,33; 48,61

=47,90 %; SD=1,50;

Δ=1,58; ε=3,30 %

4,0

49,26; 47,45; 48,58;

45,21; 46,06; 50,21

=47,78 %; SD=1,92;

Δ=2,01; ε=4,21%

8,5

48,45; 49,57; 50,50;

47,11; 45,74; 46,33

=47,95%; SD=1,88;

Δ=1,97; ε=4,10%

       Полученные данные свидетельствуют о том, что методом Стаса-Отто из почек изолируется 47,78 - 47,95 % оланзапина. Относительная ошибка определения не превышает ± 5 %.

Степень извлечения оланзапина при изолировании методом А.А.Васильевой из модельных проб внутренних органов представлена в таблицах 3 и 4.

Таблица 3

Степень извлечения оланзапина из печени

Внесено, мг

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

60,67; 61,65; 59,89;

62,43; 64,26; 57,55

=61,08%; SD=2,29;

Δ=2,41; ε=3,94%

4,0

58,96; 59,54; 65,44;

61,47; 60,89; 63,78

=61,68%; SD=2,50;

Δ=2,62; ε=4,25%

8,5

64,44; 61,38; 60,65;

60,83; 57,92; 59,16

=60,73%; SD=2,22;

Δ=2,33; ε=3,83%

       Полученные данные свидетельствуют о том, что методом А.А. Васильевой из печени изолируется  60,73 - 61,68 % оланзапина. Относительная ошибка определения не превышает ± 5%.

Таблица 4

Степень извлечения оланзапина из почек

Внесено, мг

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

55,15; 59,68; 57,43;

58,83; 60,72; 56,06

=57,98%; SD=2,15;

Δ=2,26; ε=3,89%

4,0

60,84; 56,54; 59,38;

56,15; 58,08; 57,75

=58,12%; SD=1,76;

Δ=1,85; ε=3,18%

8,5

59,52; 60,87; 55,94;

57,67; 58,05; 60,19

=58,71%; SD=1,83;

Δ=1,92; ε=3,27%

       Полученные данные свидетельствуют о том, что методом А.А. Васильевой из почек изолируется  57,98 - 58,71 % оланзапина. Относительная ошибка определения не превышает ± 4%.

Данные по определению оланзапина методом В.Ф. Крамаренко из модельных проб внутренних органов представлены в таблице 5 и 6.

Таблица 5

Степень извлечения оланзапина из печени

Внесено, мг

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

52,26; 50,45; 51,81;

49,35; 54,77; 55,38

=52,34%; SD=2,36;

Δ=2,48; ε=4,74%

4,0

50,26; 52,12; 49,88;

53,23; 55,67; 54,54

=52,62%; SD=2,31;

Δ=2,42; ε=4,61%

8,5

52,57; 49,43; 50,66;

55,34; 54,38; 53,52

=52,65%; SD=2,25;

Δ=2,36; ε=4,48%

Полученные данные свидетельствуют о том, что методом В.Ф. Крамаренко из печени изолируется 52,34 - 52,65 % оланзапина. Относительная ошибка определения не превышает ±5 %.

Таблица 6

Степень извлечения оланзапина из почек

Внесено, мг

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

10,0

47,68; 49,77; 50,43;

51,42; 53,79; 51,15

=50,71%; SD=2,02;

Δ=2,12; ε=4,17 %

25,0

49,54; 50,76; 52,12;

53,43; 54,18; 46,64

=51,11%; SD=2,77;

Δ=2,91; ε=5,69 %

400,0

46,46; 47,78; 49,53;

52,12; 55,59; 51,30

=50,46%; SD=3,28;

Δ=3,44; ε=6,82%

       Полученные данные свидетельствуют о том, что методом В.Ф. Крамаренко из почек изолируется 50,46 - 51,11 % оланзапина. Относительная ошибка определения не превышает ±7 %.

       Как следует из представленных данных, наибольшее количество оланзапина (из почек 57,98 - 58,71 % и из печени  60,73 - 61,68 %) изолируется методом А.А. Васильевой. Тем не менее, это количество не приближается к максимальному.

       Для разработки оптимальной методики изолирования оланзапина из модельных проб внутренних органов первоначально нами изучено влияние некоторых факторов на его экстракцию из растворов. Оптимальным органическим растворителем для экстракции оланзапина в максимальном количестве из водных растворов является хлороформ при pH=2 и 12. Натрия сульфат насыщенный - электролит, который обладает высаливающим действием для оланзапина (степень экстракции 93,26%)[1].

       Изолирование оланзапина из внутренних органов по разработанной методике. Навеску измельченного объекта заливали 40% раствором этанола (1:2), подкисляли 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты  до рН=2,  проводили настаивание 2 ч при периодическом взбалтывании. К водной фазе добавляли 5 мл диэтилового эфира, органический слой отбрасывали. К водной фазе прибавляли 1 мл раствора натрия сульфата насыщенного  и 3 мл хлороформа. Содержимое колбы взбалтывали в течении  5 минут и помещали в делительную воронку. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Растворители удаляли при комнатной температуре. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагента, растворяли в 5 мл 96% этанола и проводили количественное определение оланзапина методом ВЭЖХ.  Водную фазу подщелачивали 25% раствором аммиака до рН 12, прибавляли 1 мл раствора натрия сульфата насыщенного и 3 мл хлороформа. Содержимое колбы взбалтывали в течении  5 минут и помещали в делительную воронку. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Растворители удаляли при комнатной температуре. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагента, растворяли в 5 мл 96% этанола. Обнаружение и количественное определение оланзапина проводили методом ВЭЖХ [3].

       Полученные данные представлены в таблицах 7, 8.

Таблица 7

Степень извлечения оланзапина из печени

Внесено, мкг

Извлечение из раствора с рН=2

Извлечение из раствора с рН=12

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

79,28; 77,31;

80,26; 73,44;

76,58; 78,35

=77,54%; SD=2,40;

Δ=2,52; ε=3,25%

86,43; 89,90;

82,33; 87,65;

85,41; 88,54

=86,71%; SD=2,66;

Δ=2,79; ε=3,21 %

4,0

73,37; 79,23;

78,47; 81,02;

77,17; 75,14

=77,40%; SD=2,79;

Δ=2,93; ε=3,79%

83,57; 86,72;

89,62; 85,35;

87,28; 88,80

=86,89%; SD=2,22;

Δ=2,33; ε=2,68 %

8,5

80,54; 76,21;

79,42; 80,09;

74,31; 75,41

=77,66%; SD=2,67;

Δ=2,80; ε=3,61%

86,37; 90,05;

84,21; 87,36;

83,75; 88,19

=86,16%; SD=2,76;

Δ=2,90; ε=3,36 %

       В извлечении из раствора с рН=2 удается обнаружить 77,40-77,66 % оланзапина, в то время как в извлечении из раствора с рН=12 - 86,16 -86,89%.         

Таблица 8

Степень извлечения оланзапина из почек

Внесено, мкг

Извлечение из раствора с рН=2

Извлечение из раствора с рН=12

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

Степень извлечения, %

Метрологические характеристики

1,5

69,23; 74,38;

75,62; 70,77;

72,16; 71,49

=72,28%; SD=2,36;

Δ=2,47; ε=3,42%

82,44; 86,55;

81,06; 83,49;

80,83; 83,24

=82,94%; SD=2,08;

Δ=2,18; ε=2,63 %

4,0

68,35; 72,61;

71,00; 75,42;

73,19; 70,24

=71,80 %; SD=2,48;

Δ=2,60; ε=3,62%

85,48; 81,23;

82,65; 80,41;

84,57; 84,12

=83,08%; SD=1,99;

Δ=2,08; ε=2,51 %

8,5

70,11; 71,85;

72,42; 73,39;

74,58; 75,93

=73,05 %; SD=2,06;

Δ=2,16; ε=2,96%

80,26; 86,39;

84,43; 85,03;

81,18; 82,21

=83,25 %; SD=2,40;

Δ=2,51; ε=3,02 %

       Полученные данные коррелируют с результатами экстракции оланзапина из водных растворов.  В извлечении из раствора с рН=2 удается обнаружить 71,80- 73,05 % оланзапина, в то время как в извлечении из раствора с рН=12 - 82,94- 83,25 % [4].

       Разработанные методики количественного определения оланзапина из печени и почек с использованием ВЭЖХ валидированы по показателям: специфичность, линейность, прецезионность, правильность, предел количественного определения, степень извлечения и стабильность аналита. Так как степень извлечения оланзапина из раствора с рН=2 и из раствора с рН=12 более 50%, то нами рекомендуется использовать при направленном анализе извлечение как из раствора с рН=2, так и с рН=12. Оценку методики изолирования оланзапина из печени и почек проводили, используя результаты определения оланзапина в извлечении из раствора с рН=12 [3].

       Выводы:

1.Определена степень извлечения оланзапина из модельных проб печени и почек классическими методами.

2. Наибольшее количество оланзапина (из почек 57,98 - 58,71 % и из печени  60,73 - 61,68%) изолируется методом А.А. Васильевой.

3. Разработана оптимальная методика изолирования оланзапина из модельных проб печени и почек.

Рецензенты:

Коновалов Д.А., д.фарм.н., заместитель директора по науке, заведующий кафедрой фармакогнозии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО «Волгоградский медицинский университет» МинздраваРФ, г. Пятигорск;

Оганесян Э.Т., д.фарм.н., профессор, заведующий кафедрой органической химии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО «Волгоградский медицинский университет» МинздраваРФ, г. Пятигорск.


Библиографическая ссылка

Ремезова И.П., Сварыч М.В. ИЗОЛИРОВАНИЕ ОЛАНЗАПИНА ИЗ МОДЕЛЬНЫХ ПРОБ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 2-2.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=22974 (дата обращения: 25.02.2020).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074