В настоящее время в медицинской практике важное место занимают лекарственные средства растительного происхождения, так как они обладают широким спектром биологического действия в сочетании с низкой токсичностью, что позволяет использовать их для профилактики и лечения многих заболеваний. Для их разработки необходимо использовать технологии, позволяющие осуществлять рациональное использование природных ресурсов, а также создать и внедрить безотходные, экологически чистые технологии. Это требует совершенствования технологических процессов как уже существующих, так и вновь разрабатываемых фитопрепаратов. Значительным недостатком крупнотоннажного фитопроизводства является высокая себестоимость фитопрепаратов.
В отходах такого производства, как правило, накапливаются значительные количества биологически активных веществ, которые практически остаются невостребованными.
Изучение отходов фармацевтического производства позволяет: во-первых – рационально и полно использовать природные растительные ресурсы; во-вторых – открывает возможности использования промышленных отходов как дополнительных источников для получения биологически активных веществ и лекарственных препаратов; в-третьих – стимулировать создание безотходной или малоотходной технологии, которая является экономичной и природоохранной.
В этой связи значительный интерес представляют исследования по изучению качественного химического состава шрота плодов боярышника, остающегося в значительном количестве после получения настойки.
Объект исследования предоставлен Пятигорской фармацевтической фабрикой. После регенерации спирта его сушили и использовали для дальнейшего изучения.
Ранее в работах [3, 4, 7] были приведены итоги изучения химического состава гидрофильной фракции из шрота плодов боярышника, что позволило качественно и количественно охарактеризовать такие биологически активные соединения, как полисахариды, аминокислоты, макро- и микроэлементы, а также фенолокислоты и флавоноиды.
Цель настоящей работы – изучение химического состава липофильной фракции, полученной из шрота плодов боярышника.
Для экстракции липофильных биологически активных веществ обычно используют органические растворители: хлороформ, гексан, диэтиловый эфир и т.д. В качестве экстрагента нами был выбран хлороформ, так как по данным литературы в него переходят тритерпеновые кислоты.
Для этого, аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 10 г (точная масса) измельчённого сырья помещали в патрон из фильтровальной бумаги, переносили в аппарат Сокслета и экстрагировали хлороформом в течение 5-6 ч. Растворитель затем полностью удаляли и количественно рассчитывали выход жирорастворимой фракции в пересчете на абсолютно сухое сырьё [1]. Результаты количественного определения липидов в шроте плодов боярышника приведены в табл. 1.
Таблица 1. Содержание липофильной фракции в шроте плодов боярышника кроваво-красного (n=6)
| Серия измерений, % | Метрологические характеристики | |||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | Х, % | S² | Sх | ε,% | Δх |
| 1,52 | 1,49 | 1,53 | 1,51 | 1,54 | 1,51 | 1,52 | 0,018 | 0,0073 | 1,24 | 0,0188 |
Таким образом, содержание липофильной фракции в исследуемом сырье находится в пределах от 1,49 до 1,54%.
Для определения тритерпеноидов, каротиноидов и фосфолипидов отдельные порции сырья обрабатывали хлороформом, гептаном, а также смесью хлороформа и метанола [2]. Во фракции, полученной обработкой сырья гептаном, спектрофотометрически определяли содержание каротиноидов. С этой целью, 10 г (точная масса) измельчённого сырья помещали в коническую колбу с притёртой пробкой вместимостью 100 мл и приливали 50 мл гептана. Экстрагировали при перемешивании в течение 2 часов и фильтровали. 15 мл экстракта помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили объём до метки гептаном и определяли оптическую плотность раствора.
Во фракции, полученной обработкой сырья смесью хлороформа и метанола, определено содержание фосфолипидов. Для этого, 5 г (точная масса) сырья экстрагировали 25 мл смеси хлороформ - метанол (2:1) в колбе с притертой пробкой в течение 3 часов. Экстракт фильтровали. Экстракцию остатка повторяли дважды. К объединённым извлечениям добавляли 150 мл ацетона. Полученный осадок отделяли, сушили до постоянной массы и взвешивали.
Известно, что в свежих плодах боярышника содержатся тритерпеновые кислоты – урсоловая и олеаноловая, а также β-ситостерин [5, 6].
Доказательством присутствия этих соединений являются положительные реакции Либермана-Бурхарда, Сальковского и Чугаева.
Хроматографическое исследование хлороформного экстракта в системе бензол – ацетон (4:1) с последующей обработкой хроматограмм кислотой фосфорно-вольфрамовой позволило в присутствии достоверных образцов «свидетелей» идентифицировать урсоловую (Rf=0,60), олеаноловую (Rf=0,70) кислоты. В системе хлороформ – метанол (9:1) были получены аналогичные результаты. Отличие заключается только в значениях Rf.
Дополнительным доказательством наличия указанных тритерпеновых кислот является характерная полоса поглощения в УФ-спектре с максимумом при 310±5 нм в кислоте серной концентрированной. С этой целью высушенную хлороформную фракцию растворяли в кислоте серной 96%, термостатировали в течение 1 часа и анализировали на спектрофотометре СФ - 103.
Определение состава жирных кислот липофильной фракции осуществляли после предварительного метилирования методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «Цвет 500» с пламенно-ионизационным детектором. Компоненты идентифицировали по стандартным образцам (Sigma) метиловых эфиров жирных кислот и относительным временам удерживания. Количественное содержание компонентов определяли методом внутренней нормализации. Полученные результаты (таблица 2) показывают, что липофильная фракция содержит значительное количество моно- и полиненасыщенных жирных кислот с доминированием линолевой (41,3±2,3%) и олеиновой (34,2±1,8%) кислот.
Таблица 2. Жирно-кислотный состав липофильной фракции шрота плодов боярышника кроваво-красного
| Наименование жирной кислоты | Количественное содержание, % |
| Миристиновая | 0,2±0,01 |
| Пальмитиновая | 14,0±0,5 |
| Пальмитоолеиновая | 0,1±0,01 |
| Стеариновая | 4,2±0,2 |
| Олеиновая | 34,2±1,8 |
| Линолевая | 41,3±2,3 |
| Линоленовая | 0,1±0,01 |
Заключение
Химически изучена липофильная фракция, полученная из шрота плодов боярышника. Установлено наличие в ней урсоловой и олеаноловой кислот, каротиноидов, фосфолипидов, а также алифатических высших жирных кислот. Проведенные исследования свидетельствуют о том, что шрот плодов боярышника может быть использован в качестве дополнительного сырьевого источника получения биологически активных веществ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Евдокимова О.В., Самылина И.А., Нестерова О.В. // Фармация. – 1992. – Т. 41, № 3. – С. 60-61.
2. Евдокимова О.В., Самылина И.А., Нестерова О.В. // Фармация. – 1992. – Т. 41, № 6. – С. 70-72.
3. Зинченко Л.А. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2005. – Вып. 60. – С. 342-343.
4. Зинченко Л.А., Андреева О.А, Оганесян Э.Т. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2005. – Вып. 60. – С. 343-344.
5. Искендеров Г.Б., Исаев М.И. // Химия природ. соединений. – 1974. – № 1. – С. 103-104.
6. Касьян А.Н. // Некоторые вопросы фармации. – Киев, 1956. – С. 339-343.
7. Ляхова Н.С., Зинченко Л.А., Оганесян Э.Т., Ивашев М.Н. // Фармация и здоровье: материалы Междунар. науч.-практ. конф. 9-12 ноября 2005 г. – Пермь, 2005. – С. 191-192.