Целью настоящего исследования явилось определение морфологических признаков ранних стадий ХБП, обусловленной мочекаменной болезнью.
Материалы и методы
Материалом для исследования служил биопсийный материал, полученный от 84-х больных, находившихся на стационарном лечении по поводу мочекаменной болезни в клинике НИИ «Фундаментальной и клинической уронефрологии» г. Саратова (мужчин - 58, женщин - 86). Полученный материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине, обезвоживался в ацетон-ксилоловой батарее и заливали в парафин. Срезы толщиной 3-5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином и пикрофуксиновой смесью по методу Ван-Гизон, трихромом по Массону для выявления степени развития склероза, а также для оценки признаков дезорганизации соединительной ткани использовали окраску ОКГ (оранжевый Ж, кислотный красный, водный голубой).
Описание морфологии проводили по определенному алгоритму изучения нефробиоптата. Оценивались размеры и количество склерозированных клубочков, степень атрофии и диаметр извитых канальцев, степень выраженности фиброза, клеточной инфильтрации в строме, состояние стенок артерий. При анализе полученных результатов использовали морфологическую классификацию, предложенную В.В.Ставской, С.И.Рябовым (1987г.) [4], подразделяющую степень тубулоинтерстициальных изменений (ТИИ) на незначительные, умеренные и выраженные, составляющие до 30 %, от 30 до 70 % и более 70 % повреждения тубулоинтерстициального аппарата почки соответственно. Для определения размеров объектов использовали окуляр-микрометр, сетку Автандилова (Г.Г.Автандилов, 1994), а также морфометрическую систему Bio Vision и автоматизированную систему подсчета морфологических изменений ARIOL (США).
Средний возраст больных составил 45,4±0,8 лет. Пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от стадии ХБП. Стадию ХБП определяли по уровню скорости клубочковой фильтрации (СКФ) согласно последним рекомендациям NKF-K/DOQI (2005г.). В 1-ю группу вошли 32 пациента (38,1 %), средний возраст которых составил 46,1 ±1,3 со СКФ 90-98 мл/мин., что согласно рекомендациям NKF-K/DOQI соответствует 1 стадии ХБП. Во 2-ю группу вошли 52 пациента в возрасте 45,9±0,9 лет (61,9 %), СКФ в данной группе составляла 62-85 мл/мин., что соответствует 2 стадии ХБП.
В качестве контроля использовали секционный материал, полученный во время проведения судебно-медицинской экспертизы лиц, умерших от заболеваний, не связанных с патологией почек.
Статистический анализ данных производили с использованием программы «Microsoft Excel» пакета «Microsoft Office 2007», а также программы «SPSS 13.0». Степень достоверности различий показателей в исследуемых группах наблюдений оценивали с использованием t-критерия Стьюдента, предварительно используя проверку нормальности распределения количественных показателей с помощью критерия Колмогорова-Смирнова, а также с помощью проверки гипотезы равенства генеральных дисперсий. По каждому признаку в сравниваемых группах определяли среднюю арифметическую величину (М), стандартное отклонение (σ) и ошибку среднего (m).
Результаты исследования и их обсуждение
При исследовании биоптатов почек больных 1 группы существенных различий по сравнению с группой контроля не обнаружено. Клубочки не изменены, клеточность их не увеличена, базальная мембрана не утолщена. Размеры длинной оси клубочка составили максимально от 350 мкм до 265 мкм (М= 294,5 мкм, σ=152,9), короткая ось - 180-337 мкм (М=271,25 мкм, σ =139,8). Склерозированные клубочки в виде «клубочков-рубчиков» были обнаружены в 2-х случаях наблюдения, и их количество достигало 4-х, что не превышало в данном случае 14 % от количества неповрежденных клубочков. Диаметр извитых канальцев значимых различий по сравнению с контрольной группой не имел, эпителиоциты в состоянии незначительной фокальной белковой дистрофии, апикальный край их не разрушен, размеры не отличались от размеров в группе контроля (табл.1). В интерстиции - незначительное количество лимфоцитов до 10 - 15 клеток в поле зрения. В интерстициальной зоне при окраске гематоксилином и эозином отмечалось появление нежно-волокнистой эозинофильной субстанции, окрашенной пикрофуксиновой смесью по методу Ван-Гизон в различные оттенки от светло-розового до красного (рис. 1). При окраске трихромом по Массону данные участки окрашены в различные оттенки зеленого цвета. Достоверные различия от контрольной группы были обнаружены при морфометрии сосудов: толщина стенок артерий в биоптатах больных 1-й группы составила от 24 до 225 мкм (М=56,5; σ=18,5; p<0,001), что в значительной степени превышало аналогичные показатели в группе контроля. Отмечалась выраженная гипертрофия мышечного слоя стенки артерий. При окраске ОКГ отмечалась дезорганизация сосудистой стенки в виде фибриноидного набухания, что проявлялось в виде появления участков в толще сосудистой стенки, окрашенных в красный цвет.
Рис. 1. Нефробиоптат больного с 1 стадией ХБП. Нежно-волокнистый фиброз интерстиция. Окр.гематоксилином и эозином
Во 2 группе наблюдения клубочки видимых на оптическом уровне изменений не имели, клеточность не увеличена, базальная мембрана не утолщена. При морфометрическом исследовании статистически значимых отличий размеры длинной и короткой оси клубочка не имели (t<2). Отмечалось резкое увеличение размеров эпителиоцитов от 21 до 46 мкм (М=37,3 мкм), что превышало средние показатели в группе контроля в 1,5 раза (табл.1). Наряду с признаками резко выраженной белковой дистрофии были отмечены признаки очаговой атрофии эпителия канальцев, а также пролиферации эпителия извитых канальцев, что морфологически проявлялось в появлении многорядного эпителия (рис.2). В интерстиции преимущественно в корковом слое были обнаружены очаговые лимфогистиоцитарные инфильтраты, а также сетчатое разрастание соединительной ткани, подтвержденное при окраске пикрофуксиновой смесью по методу Ван-Гизон и трихромом по Массону (рис. 3).
Рис. 2. Нефробиоптат больного со 2 стадией ХБП. Гидропическая дистрофия и пролиферация эпителиоцитов. Окр.гематоксилином и эозином
Рис. 3. Нефробиоптат больного со 2 стадией ХБП. Очаговое сетчатое разрастание соединительной ткани. Окр.пикрофуксином по методу Ван-Гизон
Таблица 1. Сравнительная характеристика морфометрических показателей компонентов почек больных с 1 и 2 стадией ХБП
|
|
Группа контроля, М |
1 группа, М |
2 группа, М |
|
Длинная ось клубочка |
314,87* |
294,5 |
336,63 |
|
Короткая ось клубочка |
298* |
271,25 |
297,42 |
|
Диаметр канальцев |
109* |
102,6 |
79,21 |
|
Высота эпителиоцита |
25,35* |
25,18 |
37,3* |
|
Толщина стенки артерий |
33,52* |
56,5* |
58,7* |
|
Количество клеток в инфильтрате коркового вещества |
0* |
42 |
154,16* |
|
Количество клеток в инфильтратах мозгового вещества |
0* |
16,67 |
90* |
Примечание : *при р < 0,001
Выводы
Таким образом, при анализе полученных результатов нами установлены морфологические признаки ранних стадий ХБП. Для 1 стадии ХБП характерна выраженная белковая дистрофия эпителиоцитов, а также появление очаговых изменений интерстиция почки в виде нежно-волокнистого фиброза. Для 2 стадии ХБП характерно появление признаков очаговой атрофии эпителия канальцев и сетчатое разрастание соединительной ткани в интерстициальной зоне. Интересным является факт обнаружения во 2 стадии ХБП признаков пролиферативной активности эпителиоцитов, что, возможно, связано с активацией компенсаторно-приспособительных реакций, происходящих в данную стадию.
Рецензенты:
- Морозов Д.А., д.м.н., профессор, директор НИИ «Фундаментальной и клинической уронефрологии», г. Саратов.
- Бугоркова С.А., д.м.н., зав. лабораторией патоморфологии ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора, г. Саратов.