Алкогольная интоксикация на сегодняшний день представляет собой глобальную проблему человечества, часто встречающуюся у людей, страдающих алкоголизмом, что сопровождается обострением ряда хронических заболеваний и способствует появлению острых состояний, опасных для жизни больного.Этанол – сильнейший токсин, он поражает все органы и системы человека. Заболевания печени при алкоголизме по степени своего разрушительного действия стоят на 2-м месте после болезней головного мозга. Выраженность их клинических проявлений определяется стадией. Чем дольше человек страдает алкозависимостью, тем более серьезные поражения имеются в гепатобилиарной системе организма. Разрушение печеночных клеток – гепатоцитов – становится причиной тяжелых осложнений, ведущих без лечения к летальному исходу.
При повреждении печени может происходить нарушение ее функциональных состояний, часто сопровождающееся развитием инвалидности, потерей трудоспособности и приводящее к сокращению продолжительности жизни больного. Гепатоз, обусловленный химической интоксикацией, нарушением со стороны иммунной системы, повреждением бактериальными, вирусными инфекциями, может привести к замещению соединительной тканью печеночной. При этом имеют место значительное увеличение размеров органа и изменение его функциональной активности, вызывающие необратимые изменения, проявляющиеся циррозом печени. Неблагоприятное действие окружающей среды: загрязнение воздуха, воды, воздействие ксенобиотиков, а также употребление некачественных пищевых продуктов, наличие вредных привычек: курение, токсикомания, злоупотребление крепкими спиртными напитками – увеличивают степень необратимости функциональных и биохимических осложнений со стороны печени.
Безусловно, в современном мире имеются определенные успехи в диагностике и лечении патологии печени различного генеза. Однако рост заболеваний печени сохраняется.
К настоящему времени актуальным является поиск препаратов биогенного происхождения, обладающих низкой токсичностью и гепатопротекторной активностью.
К классу тритерпеноидов относится глицирризиновая кислота, являющаяся основным компонентом препарата глицирам (аммонийной соли глицирризиновой кислоты) [1]. Биологические и фармакологические эффекты глицирризиновой кислоты заключаются в антивирусной [2], иммунотропной, противоаллергической, противовоспалительной, противоопухолевой [3], антимикробной, гиполипидемической, гепатопротекторной, противоязвенной активности [4]. Актуальность проведенных исследований по выявлению гепатопротекторного действия глицирама подтверждается в работах зарубежных ученых по изучению влияния аммонийной соли глицирризиновой кислоты на нормализацию патологических процессов различного генеза в гепатоцитах экспериментальных животных. По мнению ряда авторов, глицирризат аммония вызывает гепатопротективный эффект в гепатоцитах и может выступать в качестве потенциального средства при повреждениях печени [5, 6].
В данной экспериментальной работе была поставлена цель – изучить гепатопротекторное действие глицирама на некоторые метаболические процессы у крыс в условиях воспроизведения экспериментального токсического поражения печени, вызванного этанолом.
Новизна научной работы заключается в возможности расширения спектра фармакологической активности препарата глицирам. При назначении его больным следует учитывать наличие гепатопротекторного действия данного лекарственного средства.
Материалы и методы исследования
Гепатопротекторное действие глицирама (ЗАО «Фармцентр» ВИЛАР) изучалось на 24 белых крысах линии Wistar массой 180–200 г на начало эксперимента. Эксперимент проводился на животных, полученных из питомника Пятигорского медико-фармацевтического института, прошедших двухнедельное содержание в макролоновых клетках, на стандартном рационе питания вивария.
В условиях алкогольной интоксикации был использован следующий экспериментальный дизайнерский проект:
1-я группа – интактные животные;
2-я группа – контрольные животные, получавшие per os 40%-ный раствор этилового спирта в дозе 5 г/кг массы тела животного (2,5 мл/200 г массы животного) на протяжении 2 недель [7];
3-я группа – опытные животные, получавшие per os суспензию, приготовленную путем измельчения таблеток препарата глицирама в дозе 10 мг/кг в 1 мл физраствора (данная доза рассчитана исходя из средней терапевтической дозы глицирама для человека и с учетом межвидового коэффициента пересчета на животное) в течение 14 дней. Предварительно за 1 ч до введения препарата вводился per os 40%-ный раствор этилового спирта в дозе 5 г/кг на протяжении 2 недель;
4-ая-группа (группа сравнения) – опытные животные, получавшие per os суспензию, приготовленную путем измельчения таблеток препарата карсила в дозе 100 мг/кг в 1 мл физраствора в течение 14 дней; предварительно за 1 ч до введения препарата вводился per os 40%-ный раствор этилового спирта в дозе 5 г/кг на протяжении 2 недель.
На 15-й день крыс декапитировали. В качестве ингаляционного наркоза был использован диэтиловый эфир с целью проведения эвтаназии в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных 86/609 ЕЕС (решение этического комитета о проведении экспериментального исследования, протокол № 3 от 05.02.2021 г.).
Материалом биохимического исследования служили сыворотка крови и гомогенат печени. В сыворотке крови проводили определение следующих биохимических показателей: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы (колориметрический метод определения аминотрансфераз по Райтману–Френкелю), щелочной фосфатазы (по гидролизу бета-глицерофосфата (метод Бодански), общего билирубина (колориметрический диазометод (по Йендрашику–Клеггорну–Грофу), общего белка (метод Лоури), в гомогенате печени – триглицеридов (колориметрический метод по Gottfried и Roserberg в модификации Н.А. Сентебовой) и гликогена (колориметрический метод по реакции с фенолом в кислой среде после щелочного гидролиза гликогена).
Определение содержания биохимических показателей липидного, пигментного, белкового и углеводного обмена, а также активности индикаторных ферментов в сыворотке при экспериментальной модели патологии, вызванной этанолом, осуществлялось с использованием биохимических методов стандартными наборами [8].
Математический анализ проводили следующим образом: в исследованных группах проводилось вычисление среднего значения (М) и стандартной ошибки среднего значения (m), которые вместе со значением n представлены в таблицах. Различия между группами анализировали параметрическими или непараметрическими методами, в зависимости от типа распределения. В качестве параметрического критерия использовали критерий Стьюдента, в качестве непараметрического критерия – U-критерий Манна–Уитни. Для статистической обработки результатов применяли пакет программ «Stat Plus 2009».
Результаты исследования и их обсуждение
В эксперименте распределение изучаемых данных носило нормальный характер во всех группах. Проверка соответствия анализируемых данных нормальному распределению реализована в программе Stat Plus, в связи с чем применяли параметрический метод оценки достоверности результатов исследования с использованием t-критерия Стьюдента. При расчетах сравнивались попарно интактная группа и контрольная группа; контрольная группа и соответствующая опытная группа животных; опытная группа, получавшая глицирам, и опытная группа, получавшая карсил. Уровень статистической значимости считали достоверными при значении р от 0,001 до 0,05.
При введении этанола в группе контрольных животных имело место значительное увеличение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови на 120% по сравнению с интактными животными (p<0,001). Прием глицирама у опытных животных в условиях эксперимента привел к снижению активности аланинаминотрансферазы в крови на 28% (110±4,7 Ед/л против 152±9,4 Ед/л) по сравнению с контрольными животными (p<0,01)) (табл. 1).
Таблица 1
Влияние глицирама на биохимические показатели в сыворотке крови крыс в условиях токсического поражения этанолом
|
|
Группы животных |
|||
|
Группа 1 n=6 |
Группа 2 n=6 |
Группа 3 n=6 |
Группа 4 n=6 |
|
|
Аланинаминотрансфераза, Ед/л |
69±3,2 |
152±9,4 p1< 0,001 +120% |
110±4,7 p2<0,01 –28% p3<0,5 +9% |
101±5,3 p2<0,01 –34% |
|
Аспартатаминотрасфераза, Ед/л |
76±5,8 |
174±8,6 p1<0,001 +129% |
117±6,3 p2< 0,01 –33% p3< 0,5 +7% |
109±5,8 p2< 0,01–37% |
|
Щелочная фосфатаза, Ед/л |
108±9,2 |
191±7,5 p1<0,01 +76% |
154±7,9 p2<0,05 –19% p3<0,05 +23% |
125±8,3 p2<0,01 –35% |
|
Общий билирубин, мкмоль/л |
8,4±0,5 |
17,5±1,2 p1<0,001 +108% |
14,7±0,9 p2<0,5 –16% р3<0,5+9%
|
13,3±0,6 p2< 0,05 –24% |
|
Общий белок, г/л |
69,2±8,1 |
57,4±6,3 p1<0,5 –18% |
62,5±5,9 p2<0,5 +9% р3<0,5 +5% |
59,4±6,8 p2< 0,5 +10% |
n – количество животных в группе; р1– уровень статистической значимости по отношению к интактным животным; р2– уровень статистической значимости по отношению к группе контроля; р3– уровень статистической значимости по отношению к группе сравнения.
Под влиянием введения препарата карсила у животных также наблюдалось снижение активности аланинаминотрасферазы в сыворотке крови на 34% (101±5,3 Ед/л против 152±9,4 Ед/л в контроле, p<0,01). В контрольной группе животных при введении этанола отмечалось существенное увеличение активности аспартатаминотрасферазы в сыворотке крови на 129% (174±8,6 Ед/л против 76±5,8 Ед/л при сравнению с 1-й группой животных (p<0,001)). При алкогольном воздействии в 3-й группе опытных животных, получавших глицирам, имело место подавление активности аспартатаминотрансферазы на 33% (117±6,5 Ед/л против 174±8,6 Ед/л по сравнению со 2-й группой животных, p<0,01).
Под влиянием карсила – препарата сравнения – у крыс наблюдалось снижение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови на 37% по сравнению с контрольной группой крыс (p<0,001). Во 2-й группе животных отмечался значительный рост активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови – на 76% (p<0,001) по сравнению с 1-й группой крыс. В результате проведения эксперимента у животных 3-й группы, получавших глицирам, установлено снижение активности щелочной фосфатазы в крови на 19% (154±7,9 Ед/л против 191±7,5 Ед/л против контрольных животных, p<0,05). В 4-й группе животных, которым вводился карсил в тех же условиях опыта, выявлено существенное снижение активности указанного показателя – на 35% (p<0,01) по сравнению со 2-й группой. При этом в опытных группах животных достоверного различия активности ферментов крови аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы не было установлено при воздействии глицирама и препарата сравнения карсила. Под действием этанола у животных 2-й группы значительно увеличивалась концентрация общего билирубина в крови – на 108% (p<0,001) по сравнению с животными 1-й группы. Введение карсила опытной группе животных в тех же условиях опыта вызвало снижение содержания общего билирубина на 24% (13,3±0,6 мкмоль/л против 17,5±1,2 мкмоль/л) по сравнению с контролем (p<0,05). При приеме глицирама не наблюдалось статистически значимого снижения содержания общего билирубина по сравнению с контролем.
Введение этанола животным 2-й группы обусловило снижение концентрации общего белка в сыворотке крови на 18%. Статистически значимого различия не зафиксировано. В опытных группах животных не прослеживалось изменения уровня общего белка в сыворотке крови по сравнению с животными 2-й группы.
Следствием двухнедельного введения этанола контрольной группе животных явилось снижение гликогена в гомогенате печени на 51% по сравнению с нормой (p<0,001). Под влиянием глицирама в группе опытных животных на фоне алкогольной интоксикации наблюдалось увеличение гликогена печени на 39% (12,8±0,76 г/кг против 9,2±0,81 г/кг в контроле, p<0,05). В 4-й группе животных, получавших карсил, в условиях эксперимента наблюдалось увеличение содержания триглицеридов в печени на 29% по сравнению с контролем (p<0,05).
В контроле отмечалось выраженное увеличение уровня триглицеридов в гомогенате печени на 69% по сравнению со здоровыми животными (p<0,001). В тех же условиях опыта у животных, которым вводили глицирам, выявлено снижение триглицеридов в печени на 30%. При этом у животных, получавших карсил, в условиях эксперимента произошло снижение содержания триглицеридов в печени на 19% по сравнению с контролем (p<0,01). Прием глицирама вызвал более выраженное снижение содержания триглицеридов в печени – на 13% (p<0,05) по сравнению с карсилом (табл. 2).
Таблица 2
Влияние глицирама на биохимические показатели в печени крыс в условиях токсического поражения этанолом
|
|
Группы животных |
|||
|
Группа 1 n =6 |
Группа 2 n =6 |
Группа 3 n =6 |
Группа 4 n =6 |
|
|
Гликоген печени, г/кг |
18,6±1,7 |
9,2±0,81 p1 < 0,001 –51% |
12,8±0,76 p2 < 0,05 +39% р 3< 0,5 +7% |
11,9±0,54 p2 < 0,05 +29% |
|
Триглицериды печени, ммоль/л |
6,92±0,34 |
11,7±0,48 p1 < 0,001 +69% |
8,22±0,31 p2 < 0,001 –30% р 3 < 0,05 –13% |
9,43±0,27 p2 < 0,01 –19% |
Заключение. Результаты показали, что при проведении эксперимента интоксикация, вызванная этиловым спиртом, приводит к изменению большинства биохимических показателей, в том числе активности индикаторных ферментов, вызывающих нарушение метаболических процессов в печени. Об этом свидетельствуют значительное повышение уровня триглицеридов в гомогенате печени и снижение количества гликогена в гомогенате печени, повышение активности цитолитических ферментов в сыворотке крови (аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы), а также увеличение содержания общего билирубина в сыворотке крови. Установлено, что в условиях эксперимента по изучению гепатопротекторного влияния глицирама выявлено более выраженное снижение содержания триглицеридов в печени, превышающее такое же действие карсила. Остальные изученные нами биохимические показатели находились на том же уровне, что и при гепатопротекторном действии препарата сравнения карсила.
Вывод: при назначении глицирама пациентам рекомендуется учитывать его гепатопротекторное свойство.