Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ГЛИЦИРАМА В УСЛОВИЯХ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У КРЫС

Сергеева Е.О. 1 Скульте И.В. 1 Терехов А.Ю. 1 Додохова М.А. 2
1 Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
2 ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской федерации
К настоящему времени актуальным является поиск препаратов биогенного происхождения, обладающих низкой токсичностью и гепатопротекторной активностью. Целью исследования явилось изучение гепатопротекторного действия глицирама на некоторые метаболические процессы у крыс в условиях экспериментального токсического поражения печени, вызванного этанолом. Эксперимент по исследованию гепатопротекторного действия глицирама был проведен на 24 белых крысах линии Wistar, масса которых составляла 180–200 г на начало эксперимента. Биохимические исследования осуществлялись в сыворотке крови и гомогенате печени. В сыворотке крови проводили определение: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, общего билирубина, в гомогенате печени – триглицеридов и гликогена с использованием общепринятых биохимических методов стандартными наборами. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в условиях эксперимента интоксикация, вызванная этиловым спиртом, приводит к изменению большинства биохимических показателей, в том числе активности индикаторных ферментов, вызывающих нарушение метаболических процессов в печени. Об этом свидетельствуют значительное повышение содержания триглицеридов в печени и снижение гликогена в печени, повышение активности цитолитических ферментов в сыворотке крови – аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы, а также увеличение содержания общего билирубина в сыворотке крови. Установлено, что в условиях эксперимента гепатозащитное влияние глицирама было сопоставимо с гепатопротекторным действием препарата сравнения карсила.
глицирам
карсил
биохимические показатели
гепатозащитное действие
алкогольная интоксикация
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2019. 1216 с.
2. Глицирризиновая кислота в лечении заболеваний печени // Рациональная фармакотерапия. 2015. № 2 (35). С. 49-54.
3. Зарубаев В.В., Аникин В.Б., Смирнов В.С. Противовирусная активность глицерретовой и глицирризиновой кислот // Инфекция и иммунитет. 2016. № 6 (3). С. 199-206.
4. Орманов Н.Ж., Пернебекова Р.К., Орманова Л.Н., Жолымбекова Л.Д., Киргизбаеаева А.А. Биологическая активность и фармакологические свойства препаратов из корня солодки // Вестник КазНУ. Серия биологическая. 2013. № 2. (58). С. 147-151.
5. Zugong Yu., Feng Wu., Jing Tian., Xuewen Guo., Ran An., Yangyang Guo. Ammonium glycyrrhizin counteracts liver injury caused by lipopolysaccharide/amoxicillin-clavulanate potassium. Oncotarget. 2017. vol. 8. no 57. P. 96837-96851.
6. Zugong Yu., Feng Wu., Jing Tian., Xuewen Guo., Ran An. Protective effects of compound ammonium glycyrrhizin, L arginine, silymarin and glucurolactone against liver damage induced by ochratoxin A in primary chicken hepatocytes. Molecular medicine reports. 2018. vol. 18. P. 2551-2560.
7. Осечкина Н.С. Прогнозирование тяжести интоксикации этанолом на основе генетических маркеров ГАМК2 рецепторов: автореф. дис. … канд. биол. наук. Санкт–Петербург, 2020. 26 с.
8. Камышников В.С. Методы клинических лабораторных исследований. МЕДпресс-Информ, 2013. 736 с.

Алкогольная интоксикация на сегодняшний день представляет собой глобальную проблему человечества, часто встречающуюся у людей, страдающих алкоголизмом, что сопровождается обострением ряда хронических заболеваний и способствует появлению острых состояний, опасных для жизни больного.Этанол – сильнейший токсин, он поражает все органы и системы человека. Заболевания печени при алкоголизме по степени своего разрушительного действия стоят на 2-м месте после болезней головного мозга. Выраженность их клинических проявлений определяется стадией. Чем дольше человек страдает алкозависимостью, тем более серьезные поражения имеются в гепатобилиарной системе организма. Разрушение печеночных клеток – гепатоцитов – становится причиной тяжелых осложнений, ведущих без лечения к летальному исходу.

При повреждении печени может происходить нарушение ее функциональных состояний, часто сопровождающееся развитием инвалидности, потерей трудоспособности и приводящее к сокращению продолжительности жизни больного. Гепатоз, обусловленный химической интоксикацией, нарушением со стороны иммунной системы, повреждением бактериальными, вирусными инфекциями, может привести к замещению соединительной тканью печеночной. При этом имеют место значительное увеличение размеров органа и изменение его функциональной активности, вызывающие необратимые изменения, проявляющиеся циррозом печени. Неблагоприятное действие окружающей среды: загрязнение воздуха, воды, воздействие ксенобиотиков, а также употребление некачественных пищевых продуктов, наличие вредных привычек: курение, токсикомания, злоупотребление крепкими спиртными напитками – увеличивают степень необратимости функциональных и биохимических осложнений со стороны печени.

Безусловно, в современном мире имеются определенные успехи в диагностике и лечении патологии печени различного генеза. Однако рост заболеваний печени сохраняется.

К настоящему времени актуальным является поиск препаратов биогенного происхождения, обладающих низкой токсичностью и гепатопротекторной активностью.

К классу тритерпеноидов относится глицирризиновая кислота, являющаяся основным компонентом препарата глицирам (аммонийной соли глицирризиновой кислоты) [1]. Биологические и фармакологические эффекты глицирризиновой кислоты заключаются в антивирусной [2], иммунотропной, противоаллергической, противовоспалительной, противоопухолевой [3], антимикробной, гиполипидемической, гепатопротекторной, противоязвенной активности [4]. Актуальность проведенных исследований по выявлению гепатопротекторного действия глицирама подтверждается в работах зарубежных ученых по изучению влияния аммонийной соли глицирризиновой кислоты на нормализацию патологических процессов различного генеза в гепатоцитах экспериментальных животных. По мнению ряда авторов, глицирризат аммония вызывает гепатопротективный эффект в гепатоцитах и может выступать в качестве потенциального средства при повреждениях печени [5, 6].

В данной экспериментальной работе была поставлена цель – изучить гепатопротекторное действие глицирама на некоторые метаболические процессы у крыс в условиях воспроизведения экспериментального токсического поражения печени, вызванного этанолом.

Новизна научной работы заключается в возможности расширения спектра фармакологической активности препарата глицирам. При назначении его больным следует учитывать наличие гепатопротекторного действия данного лекарственного средства.

Материалы и методы исследования

Гепатопротекторное действие глицирама (ЗАО «Фармцентр» ВИЛАР) изучалось на 24 белых крысах линии Wistar массой 180–200 г на начало эксперимента. Эксперимент проводился на животных, полученных из питомника Пятигорского медико-фармацевтического института, прошедших двухнедельное содержание в макролоновых клетках, на стандартном рационе питания вивария.

В условиях алкогольной интоксикации был использован следующий экспериментальный дизайнерский проект:

1-я группа – интактные животные;

2-я группа – контрольные животные, получавшие per os 40%-ный раствор этилового спирта в дозе 5 г/кг массы тела животного (2,5 мл/200 г массы животного) на протяжении 2 недель [7];

3-я группа – опытные животные, получавшие per os суспензию, приготовленную путем измельчения таблеток препарата глицирама в дозе 10 мг/кг в 1 мл физраствора (данная доза рассчитана исходя из средней терапевтической дозы глицирама для человека и с учетом межвидового коэффициента пересчета на животное) в течение 14 дней. Предварительно за 1 ч до введения препарата вводился per os 40%-ный раствор этилового спирта в дозе 5 г/кг на протяжении 2 недель;

4-ая-группа (группа сравнения) – опытные животные, получавшие per os суспензию, приготовленную путем измельчения таблеток препарата карсила в дозе 100 мг/кг в 1 мл физраствора в течение 14 дней; предварительно за 1 ч до введения препарата вводился per os 40%-ный раствор этилового спирта в дозе 5 г/кг на протяжении 2 недель.

На 15-й день крыс декапитировали. В качестве ингаляционного наркоза был использован диэтиловый эфир с целью проведения эвтаназии в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных 86/609 ЕЕС (решение этического комитета о проведении экспериментального исследования, протокол № 3 от 05.02.2021 г.).

Материалом биохимического исследования служили сыворотка крови и гомогенат печени. В сыворотке крови проводили определение следующих биохимических показателей: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы (колориметрический метод определения аминотрансфераз по Райтману–Френкелю), щелочной фосфатазы (по гидролизу бета-глицерофосфата (метод Бодански), общего билирубина (колориметрический диазометод (по Йендрашику–Клеггорну–Грофу), общего белка (метод Лоури), в гомогенате печени – триглицеридов (колориметрический метод по Gottfried и Roserberg в модификации Н.А. Сентебовой) и гликогена (колориметрический метод по реакции с фенолом в кислой среде после щелочного гидролиза гликогена).

Определение содержания биохимических показателей липидного, пигментного, белкового и углеводного обмена, а также активности индикаторных ферментов в сыворотке при экспериментальной модели патологии, вызванной этанолом, осуществлялось с использованием биохимических методов стандартными наборами [8].

Математический анализ проводили следующим образом: в исследованных группах проводилось вычисление среднего значения (М) и стандартной ошибки среднего значения (m), которые вместе со значением n представлены в таблицах. Различия между группами анализировали параметрическими или непараметрическими методами, в зависимости от типа распределения. В качестве параметрического критерия использовали критерий Стьюдента, в качестве непараметрического критерия – U-критерий Манна–Уитни. Для статистической обработки результатов применяли пакет программ «Stat Plus 2009».

Результаты исследования и их обсуждение

В эксперименте распределение изучаемых данных носило нормальный характер во всех группах. Проверка соответствия анализируемых данных нормальному распределению реализована в программе Stat Plus, в связи с чем применяли параметрический метод оценки достоверности результатов исследования с использованием t-критерия Стьюдента. При расчетах сравнивались попарно интактная группа и контрольная группа; контрольная группа и соответствующая опытная группа животных; опытная группа, получавшая глицирам, и опытная группа, получавшая карсил. Уровень статистической значимости считали достоверными при значении р от 0,001 до 0,05.

При введении этанола в группе контрольных животных имело место значительное увеличение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови на 120% по сравнению с интактными животными (p<0,001). Прием глицирама у опытных животных в условиях эксперимента привел к снижению активности аланинаминотрансферазы в крови на 28% (110±4,7 Ед/л против 152±9,4 Ед/л) по сравнению с контрольными животными (p<0,01)) (табл. 1).

Таблица 1

Влияние глицирама на биохимические показатели в сыворотке крови крыс в условиях токсического поражения этанолом


Показатели

Группы животных

Группа 1

n=6

Группа 2

n=6

Группа 3

n=6

Группа 4

n=6

Аланинаминотрансфераза, Ед/л

69±3,2

152±9,4

p1< 0,001 +120%

110±4,7

p2<0,01 –28%

p3<0,5 +9%

101±5,3

p2<0,01 –34%

Аспартатаминотрасфераза,

Ед/л

76±5,8

174±8,6

p1<0,001

+129%

117±6,3

p2< 0,01 –33%

p3< 0,5 +7%

109±5,8

p2< 0,01–37%

Щелочная фосфатаза,

Ед/л

108±9,2

191±7,5

p1<0,01

+76%

154±7,9

p2<0,05 –19%

p3<0,05 +23%

125±8,3

p2<0,01 –35%

Общий билирубин,

мкмоль/л

8,4±0,5

17,5±1,2

p1<0,001

+108%

14,7±0,9

p2<0,5 –16%

р3<0,5+9%

 

13,3±0,6

p2< 0,05 –24%

Общий белок,

г/л

69,2±8,1

57,4±6,3

p1<0,5

–18%

62,5±5,9

p2<0,5 +9%

р3<0,5 +5%

59,4±6,8

p2< 0,5 +10%

n – количество животных в группе; р1– уровень статистической значимости по отношению к интактным животным; р2– уровень статистической значимости по отношению к группе контроля; р3– уровень статистической значимости по отношению к группе сравнения.

Под влиянием введения препарата карсила у животных также наблюдалось снижение активности аланинаминотрасферазы в сыворотке крови на 34% (101±5,3 Ед/л против 152±9,4 Ед/л в контроле, p<0,01). В контрольной группе животных при введении этанола отмечалось существенное увеличение активности аспартатаминотрасферазы в сыворотке крови на 129% (174±8,6 Ед/л против 76±5,8 Ед/л при сравнению с 1-й группой животных (p<0,001)). При алкогольном воздействии в 3-й группе опытных животных, получавших глицирам, имело место подавление активности аспартатаминотрансферазы на 33% (117±6,5 Ед/л против 174±8,6 Ед/л по сравнению со 2-й группой животных, p<0,01).

Под влиянием карсила – препарата сравнения – у крыс наблюдалось снижение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови на 37% по сравнению с контрольной группой крыс (p<0,001). Во 2-й группе животных отмечался значительный рост активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови – на 76% (p<0,001) по сравнению с 1-й группой крыс. В результате проведения эксперимента у животных 3-й группы, получавших глицирам, установлено снижение активности щелочной фосфатазы в крови на 19% (154±7,9 Ед/л против 191±7,5 Ед/л против контрольных животных, p<0,05). В 4-й группе животных, которым вводился карсил в тех же условиях опыта, выявлено существенное снижение активности указанного показателя – на 35% (p<0,01) по сравнению со 2-й группой. При этом в опытных группах животных достоверного различия активности ферментов крови аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы не было установлено при воздействии глицирама и препарата сравнения карсила. Под действием этанола у животных 2-й группы значительно увеличивалась концентрация общего билирубина в крови – на 108% (p<0,001) по сравнению с животными 1-й группы. Введение карсила опытной группе животных в тех же условиях опыта вызвало снижение содержания общего билирубина на 24% (13,3±0,6 мкмоль/л против 17,5±1,2 мкмоль/л) по сравнению с контролем (p<0,05). При приеме глицирама не наблюдалось статистически значимого снижения содержания общего билирубина по сравнению с контролем.

Введение этанола животным 2-й группы обусловило снижение концентрации общего белка в сыворотке крови на 18%. Статистически значимого различия не зафиксировано. В опытных группах животных не прослеживалось изменения уровня общего белка в сыворотке крови по сравнению с животными 2-й группы.

Следствием двухнедельного введения этанола контрольной группе животных явилось снижение гликогена в гомогенате печени на 51% по сравнению с нормой (p<0,001). Под влиянием глицирама в группе опытных животных на фоне алкогольной интоксикации наблюдалось увеличение гликогена печени на 39% (12,8±0,76 г/кг против 9,2±0,81 г/кг в контроле, p<0,05). В 4-й группе животных, получавших карсил, в условиях эксперимента наблюдалось увеличение содержания триглицеридов в печени на 29% по сравнению с контролем (p<0,05).

В контроле отмечалось выраженное увеличение уровня триглицеридов в гомогенате печени на 69% по сравнению со здоровыми животными (p<0,001). В тех же условиях опыта у животных, которым вводили глицирам, выявлено снижение триглицеридов в печени на 30%. При этом у животных, получавших карсил, в условиях эксперимента произошло снижение содержания триглицеридов в печени на 19% по сравнению с контролем (p<0,01). Прием глицирама вызвал более выраженное снижение содержания триглицеридов в печени – на 13% (p<0,05) по сравнению с карсилом (табл. 2).

Таблица 2

Влияние глицирама на биохимические показатели в печени крыс в условиях токсического поражения этанолом


Показатели

Группы животных

Группа 1

n =6

Группа 2

n =6

Группа 3

n =6

Группа 4

n =6

Гликоген печени, г/кг

18,6±1,7

9,2±0,81

p1 < 0,001

–51%

12,8±0,76

p2 < 0,05 +39%

р 3< 0,5 +7%

11,9±0,54

p2 < 0,05 +29%

Триглицериды печени, ммоль/л

6,92±0,34

11,7±0,48

p1 < 0,001

+69%

8,22±0,31

p2 < 0,001 –30%

р 3 < 0,05 –13%

9,43±0,27

p2 < 0,01 –19%

Заключение. Результаты показали, что при проведении эксперимента интоксикация, вызванная этиловым спиртом, приводит к изменению большинства биохимических показателей, в том числе активности индикаторных ферментов, вызывающих нарушение метаболических процессов в печени. Об этом свидетельствуют значительное повышение уровня триглицеридов в гомогенате печени и снижение количества гликогена в гомогенате печени, повышение активности цитолитических ферментов в сыворотке крови (аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы), а также увеличение содержания общего билирубина в сыворотке крови. Установлено, что в условиях эксперимента по изучению гепатопротекторного влияния глицирама выявлено более выраженное снижение содержания триглицеридов в печени, превышающее такое же действие карсила. Остальные изученные нами биохимические показатели находились на том же уровне, что и при гепатопротекторном действии препарата сравнения карсила.

Вывод: при назначении глицирама пациентам рекомендуется учитывать его гепатопротекторное свойство.


Библиографическая ссылка

Сергеева Е.О., Скульте И.В., Терехов А.Ю., Додохова М.А. ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ГЛИЦИРАМА В УСЛОВИЯХ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У КРЫС // Современные проблемы науки и образования. – 2021. – № 4. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=31055 (дата обращения: 18.10.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074