В литературе имеются многочисленные свидетельства того, что свободные радикалы являются одним из универсальных механизмов повреждения клетки. Перекисное окисление липидов (ПОЛ) рассматривается, с одной стороны, как необходимое звено метаболизма, обеспечивающее нормальную жизнедеятельность клеток, а с другой стороны, нарушение регуляции данного процесса, его замедление или ускорение является основой патогенеза многих заболеваний в том числе – кожных [1]. Активные формы кислорода и последующая интенсификация процесса ПОЛ, выступая в роли «первичного медиатора» стресса, являются одним из наиболее ранних регуляторных метаболитов, играющих важную роль в повреждении мембран клеток [2,3]. В связи с этим целесообразным рассматривается применение антиоксидантов в комплексной терапии и профилактике заболеваний кожи; существенное преимущество имеют лекарственные средства растительного и животного происхождения, содержащие в своем составе полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) омега-3 и 6, которые в своей структуре имеют значительное количество двойных ненасыщенных связей [9]. Пи-связи влияют на свободные радикалы, защищая организм от окислительного стресса [5,11].
Целью нашего исследования является сравнение показателей ПОЛ и антиоксидантной системы пораженной кожи крыс при экспериментальном дерматите простом раздражительном контактном (ДПРК) в процессе местного лечения с использованием средства, содержащего омега-3 и омега-6 ПНЖК (крем «Витамин F99» жирный), а также Радевит мази – противовоспалительной.
Материал и методы
Экспериментальное исследование выполнено с соблюдением Международных принципов Европейской конвенции о защите позвоночных животных с учетом норм и правил биомедицинской этики (с разрешения этического комитета РостГМУ – протокол № 16/13 от 14.11.2013 г.) [4]. Группа 1-я –20 крыс без ДПРК, 2-я группа – с ДПРК без лечения в течение 4-х дней (n 17), животных 3-й группы (n 17) лечили Радевит мазью (ежедневно – в течение 11 дней), в группу 4-ю вошли 17 животных – ежедневно смазывания очагов ДПРК кремом «Витамин Ф 99» жирный. Для профилактики пиодермии раз в 3 дня – смазывания Эритромициновой мазью.
Радевит мазь рекомендована для лечения дерматитов контактных, ее использовали в группе 3-й. В 4-й группе лечения проводили ежедневными смазываниями очагов ДПРК Кремом «Витамин Ф 99» жирным, действующим веществом, в котором является витамин F – источник незаменимых ПНЖК, эфиры омега-3 жирных кислот и др.
Из компонентов ПОЛ мы оценивали содержание малонового диальдегида (МДА) [7], антиоксидантную систему характеризовала активность супероксиддисмутазы (СОД) [11] и каталазы (КАТ) [6] гомогенатов пораженной кожи из очагов ДПРК.
Для уточнения сведений о состоянии ПОЛ и антиоксидантной системы в очагах поражения при ДПРК мы провели исследования параллельно при «выраженной ожоговой травме» – эксперимент 1 (металлическую пластину, использованную для ожога, нагревали на электрической плитке с закрытой спиралью при начальных проявлениях покраснения покрывающей спираль металлической части), а также при «умеренной ожоговой травме» – эксперимент 2 – разогретую металлическую пластину затем (до контакта с кожей животного) предварительно охлаждали до 120 градусов, помещая на 20 сек на металлическую основу комнатной температуры. За основу брали показатели «при выраженной ожоговой травме» – эксперимент 1.
Результаты и их обсуждение
Полученные при исследовании показатели представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Перекисное окисление кожи крыс при дерматите простом раздражительном контактном («выраженная ожоговая травма»)
|
Группы белых крыс |
МДА нмоль/г |
СОД усл. ед./г |
КАТ ЕД х 102 /г х мин |
|
1 гр., «контрольные» белые крысы (n 20) без ДПРК |
63,15 + 4,98 |
589,6+31,7 |
20,50+1,49 |
|
2 гр., сравнения – 4 дня после ожоговой травмы без лечения (здесь и далее n10) |
147,9+ 8,5 * |
453,0+48,0* |
30,84+1,28* |
|
3 гр., лечение – Радевит мазью (11 дн.) |
164,1+12,1 * |
470,1 +91,7 |
30,49+1,85 * |
|
4 гр., лечение – Крем «Витамин Ф 99» жирный (11 дн.) |
142,6 +14,6 * |
597,6 +27,9 ;2* |
33,92 + 1,12 * |
Примечание. Существенные различия: с контрольной группой – *, с группой сравнения – без лечения 4 дня после ожоговой травмы – 2*.
Таблица 2
Перекисное окисление липидов кожи крыс при дерматите простом раздражительном контактном («умеренная ожоговая травма»)
|
Группы белых крыс |
МДА нмоль/г |
СОД усл.ед./г |
КАТ ЕД х 102 /г х мин |
|
1 гр., «контрольные» белые крысы ( n 20) без ДПРК |
63,15 + 4,98 |
589,6+31,7 |
20,50+1,49 |
|
2 гр., сравнения – 4 дня после ожоговой травмы без лечения (здесь и далее n 7) |
107,4+11,2 * |
468,2+69,4 |
33,78+1,70 * |
|
3 гр., лечение – Радевит мазью (11 дн.) |
113,2+24,6 |
531,6+95,1 |
30,92+1,03 * |
|
4 гр., лечение – Крем «Витамин Ф 99» жирный (11 дн.) |
139,6 +16,3 * |
682,2+44,7; 2* |
29,90 + 1,80 * |
Примечание. Различия существенны: с контрольной группой – *, с группой сравнения – без лечения 4 дня после ожоговой травмы – 2*.
Оценивая показатели ПОЛ в коже, мы получили определенные закономерности, проявлявшиеся весьма отчетливо. По МДА – его содержание после 4-х дней после ожоговой травмы резко нарастало при «выраженной ожоговой травме» (147,9 + 8,5 нмоль/г – в 2,3 раза; Р < 0,01). Различия между этими показателями экспериментов 1 и 2 с превалированием 1-го – в 1,4 раза ( Р < 0,05). Аналогично превалирование было отмечено по 3-й группе в 1,4 раза (тенденция) и по 4-й группе в 1, 2 раза (тенденция). Совершенно ясную динамику по всем 3-м группам в обоих вариантах проявила КАТ пораженной кожи. Она оказалась достоверно повышенной при обоих вариантах эксперимента во всех 3-х группах. При «выраженной ожоговой травме» (1-й вариант эксперимента) во 2-й группе – 30,84+ 1,28 ЕД х 102 /г х мин (в 1,5 раза; Р < 0,001), в 3-й группе – 30,49 +1,85 ЕД х 102 /г х мин ( в 1,5 раза; Р < 0,001) , в 4-й группе – 33,92 + 1,12 ЕД х 102 /г х мин (в 1,7 раза; Р < 0,001). Соответственно, при умеренной ожоговой травме (2-й вариант эксперимента) во 2-й группе – 33,78+1,70 ЕД х 102 /г х мин (в 1,7 раза; Р < 0,001), в 3-й группе – 30,92+1,03 ЕД х 102 /г х мин (в 1,5 раза ; Р < 0,001), в 4-й группе – 29,90 +1,80 ЕД х 102 /г х мин (в 1,5 раза; Р < 0,001).
Значительно менее определенно при обоих вариантах эксперимента проявляется СОД. Удалось, тем не менее, отметить при этом две позиции. Относительно 2-й группы (4 дня после ожоговой травмы без лечения) при 1-м варианте эксперимента («выраженная ожоговая травма») активность СОД составила 453,0 +48,0 усл. ед./г, будучи сниженной (Р < 0,05) в 1,3 раза, а при 2-м варианте эксперимента во 2-й группе – 468,2 + 69,4 усл.ед/г – тенденция к снижению в 1,3 раза. Тем самым в ситуации повышенного содержания МДА кожи при 1-м варианте эксперимента во 2-й группе (147,9 +8,5 нмоль/г, в 2,3 раза; Р < 0,001) и при 2-м варианте эксперимента во 2-й группе (107,4+11,2 нмоль/г, в 1,7 раза; Р < 0,01) в обоих вариантах эксперимента в 2-х группах по показателям МДА и СОД отмечена декомпенсация системы (оксидативный стресс), а по КАТ выявлены начальные признаки компенсации этой системы.
Вторая позиция, относительно активности СОД пораженной кожи у экспериментальных белых крыс с ДПРК, которую нам удалось отметить, заключается в следующем. В обоих вариантах эксперимента активность СОД в 4-й группе по сравнению со 2-й группой 597,6+27,9 усл. ед./г и 453,0 +48,0 усл. ед./г, а также 682,2 +44,7 усл. ед./г и 468,2 +69,4 усл. Ед./г – выше в 1,3 раза (Р < 0,05) и выше в 1,5 раза (Р < 0,05). Таким образом выявлена существенная компенсация антиоксидантной системы за счет возрастания активности СОД в 4-й группе экспериментальных животных, то есть леченных Кремом «Витамин Ф 99» жирным в сочетании с повышенной активностью КАТ пораженной кожи в 1-м варианте эксперимента до 33,92 +1,12 ЕД х 102/г х мин (в 1,7 раза; Р < 0,001) и во 2-м варианте эксперимента – до 29,90 +1,80 ЕД х 102/г х мин (в 1,5 раза; Р < 0,001). Это существенные и значительные компенсаторные звенья в условиях прежде отмечавшегося оксидативного стресса. Подобной благоприятной динамики не наблюдалось в 3-й группе животных, леченных Радевит мазью. Удалось показать преимущество в отношении влияния на декомпенсированное состояние ПОЛ и антиоксидантной системы при экспериментальном ДПРК наружного средства, содержащего омега-3 и омега-6 ПНЖК (Крем «Витамин Ф 99» жирный), по сравнению с (Радевит мазь).
После 4-х дней течения воспалительной реакции кожи (2-я группа) с «выраженной ожоговой травмой» возрастало в пораженной коже содержание МДА в 2,3 раза (при «умеренной ожоговой травме» – в 1,7 раза). Превалирование 1-го показателя – в 1,4 раза. Причина – в различии выраженности ожоговой травмы. Показатели повышены в 3-й группе – в 2,6 раза, и в 4-й группе – в 2,3 раза. Активность КАТ пораженной кожи оказалась существенно повышенной при обоих вариантах эксперимента («выраженная ожоговая реакция» и «умеренная ожоговая реакция») во всех 3-х группах. При 1-м варианте во 2-й и 3-й группах – в 1,5 раза, в 4-й группе – в 1,7 раза и при 2-м варианте, соответственно – в 1,7 раза, в 1,5 раза, и в 1,5 раза. Повышение активности КАТ пораженной кожи должно быть расценено как компенсаторная реакция в связи с повышением содержания в ней МДА.
Мы оценили показатели ПОЛ и антиоксидантной системы пораженной кожи белых крыс при экспериментальном ДПРК в процессе наружного лечения с использованием содержащего омега-3 и омега-6 ПНЖК Крема «Витамин Ф 99» жирного, а также средства противовоспалительной активности (Радевит мазь).
Активность СОД пораженной кожи при обоих вариантах эксперимента проявилась менее определенно. Однако удалось выявить две закономерности. Относительно 2-й группы (4 дня после ожоговой травмы без лечения) при «выраженной ожоговой травме» она снижена в 1,3 раза, а при «умеренной ожоговой травме» – тенденция к снижению в 1,3 раза. В обоих вариантах эксперимента во 2-х группах по показателям МДА и СОД установлен оксидативный стресс; по показателям КАТ пораженной кожи выявляются признаки компенсации этих систем.
Удалось отметить вторую позицию в отношении СОД пораженной кожи. При обоих вариантах эксперимента в 4-х группах по сравнению со 2-ми группами соответственно активность СОД выше в 1,3 раза и выше в 1,5 раза. Так установлена компенсация антиоксидантной системы вследствие относительного возрастания активности СОД в 4-х группах (лечение – Крем «Витамин Ф 99» жирный) в дополнение к повышенной активности КАТ пораженной кожи в группе «выраженной ожоговой травмы» в 1,7 раза и во втором варианте эксперимента в 1,5 раза. В условиях прежде отмечавшегося оксидативного стресса это существенные звенья компенсации антиоксидантной защиты. Благоприятной динамики ведущих компонентов ПОЛ не наступало в 3-й группе (лечение Радевит мазью). Это сопоставление демонстрирует преимущество относительно влияния на декомпенсированное состояние ПОЛ и антиоксидантной системы наружным средством, содержащим омега-3 и омега-6 ПНЖК, в сравнении с таковым противовоспалительного действия – Радевит мазью. Кроме того, МДА в группах 2–4 существенно повышен в сочетании с усиленной активностью КАТ.
Заключение
Более эффективным в отношении состояния ПОЛ и антиоксидантной системы при экспериментальном ДПРК у белых крыс оказалось лечение Кремом «Витамин Ф 99» жирный. Результаты использования Крема «Витамин Ф 99» жирный (4-я группа) превосходили таковые в 3-й группе (Радевит мазь). При этом обосновано применение в лечении заболеваний кожи с воспалительным компонентом в патогенезе – при ДПРК, аллергическом контактном дерматите, атопическом дерматите, диффузном и очаговом нейродермите, псориазе, кожной форме пигментной крапивницы у детей наружных средств, содержащих омега-3 и 6 ПНЖК и антиоксиданты. Период их использования – от выраженного обострения до существенной стабилизации высыпаний со значительным ослаблением воспалительной реакции пораженной кожи (эритемы, отечности и инфильтрации кожи, а также зуда).