Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

По данным Всемирной Организации Здравоохранения тромбоз-ассоциированные заболевания занимают одну из лидирующих позиций в структуре заболеваемости и смертности населения всего мира. Раньше тромбоз считался исключительно заболеванием старшего возраста, но в последние десятилетия появляется все больше сведений о том, что данная патология является актуальной проблемой у лиц молодого возраста, а также детей [1,2,3].

Тромбозы относятся к мультифакторным заболеваниям, в основе которых лежит взаимодействие как внешних, так и внутренних, генетически детерминированных факторов риска [4,5,6]. Особый интерес представляют полиморфизмы генов, кодирующих белки, принимающие участие в процессах тромбообразования [7].

Материал и методы исследования

Проведено генетическое исследование двенадцати протромботических полиморфных вариантов генов-кандидатов: метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR (C677T), метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR (A1298C), метионинсинтазы MTR (A2756G), метионинсинтазыредуктазы MTRR (A66G), фактора II протромбина (G20210А); фактора V Лейден (G1691A); коагуляционного фактора VII – проконвертина (F7) – (G10976A), фактора XIII свертывания крови (G226A); фибриногена G(-455)A; гликопротеина (интегрин альфа-2) ITGA2 (C807T), тромбоцитарного рецептора фибриногена – ITGB3-b интегрин (Т1565С), ингибитора активатора плазминогена PAI-1 4G(-675)5G.

Результаты исследования и их обсуждение

При исследовании распределения частот аллелей генов системы свертывания крови было установлено, что частота аллеля С 807 гена ITGA2 (р=0,0003) в популяции девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками, напротив, доля аллеля Т 807 гена ITGA2 с большей частотой выявлена у мальчиков. Вместе с тем доля аллеля 5G (-675) гена PAI-1 (р=0,001) достоверно чаще определялась у девочек, однако, частота аллеля 4G (-675) гена PAI-1 (р=0,011) достигала уровня статистической значимости у мальчиков. По остальным частотам аллелей в исследованных полиморфных вариантах генов статистически значимых различий не наблюдалось (табл. 1).

Таблица 1

Распределение частот аллелей генов фолатного метаболизма и факторов свертывания крови у детей

При анализе частоты встречаемости мутаций и полиморфных вариантов генов с учетом половых различий было выявлено (табл. 2), что мутация генотипа 807 TT гена ITGA2 с большей частотой определялась у мальчиков (р=0,006) по сравнению с девочками. По остальным полиморфным вариантам генов факторов свертывания крови статистически значимых различий не было выявлено. Определено, что полиморфный вариант G1691A гена FV Leiden, мутация G(-455)A гена FGB, полиморфизм 4G(-675)5G гена PAI-1 выявлялись с одинаковой частотой у мальчиков и девочек (р>0,05). В исследованной выборке не было обнаружено минорных аллелей полиморфного варианта G20210A гена FII и полиморфизма G1691A гена FV Leiden.

Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови проверено на соответствие равновесию Харди – Вайнберга. Как видно из табл. 4, что распределение частот восьми генотипов генов факторов свертывания крови соответствует соотношению Харди – Вайнберга, то есть наблюдаемое распределение генотипов G20210А FII, G1691A FV, G10976A FVII, G226A FXIII, G(-455)A FGB, C807T ITGA2, Т1565С ITGВ3, 4G (-675)5G PAI-1 согласуется с ожидаемыми частотами распределения. При анализе соответствия распределению частот аллелей и генотипов в популяции детей установлено, что фактическое распределение генотипов генов факторов свертывания крови согласуется с теоретическим, статистически значимых различий выявить не удалось.

Таблица 2

Распределение генотипов и аллелей генов факторов свертывания крови у детей

Примечание: N.O. – наблюдаемые частоты генотипов; N.E. – ожидаемые частоты генотипов; критерий χ² использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди – Вайнберга; d.f. – число степеней свободы.

При исследовании частоты встречаемости генотипов и аллелей генов фолатного метаболизма в популяции детей установлено, что распределение частот четырех генотипов С677Т и А1298С гена MTHFR, A2756G гена MTR и генотипа A66G гена MTRR соответствовало равновесию Харди – Вайнберга. Отклонений в распределении данных генотипов в популяции детей зафиксировано не было.

На основании данных о наличии трёх и более признаков отягощенного тромбогенного анамнеза была сформирована группа с высокими факторами тромбогенного риска. В группу детей с высокими факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 % от общего количества исследованных. Из них было 17 девочек и 10 мальчика. У детей этой группы встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курения и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %), а также наличие генетической предрасположенности к тромбозам.

Таблица 3

Характеристика группы с высокими факторами тромбогенного риска  

Примечание: * – статистически значимые различия показателей у мальчиков и девочек (p<0,05).

Как видно из табл. 3, в группе детей с высокими факторами тромбогенного риска, статистически чаще среди мальчиков встречалось наличие активного и/или пассивного курения (p<0,05). По остальным признакам достоверных различий не было обнаружено.

В ходе исследования были определены 27 человек (что составляет 6,7 % от общего количества исследованных детей), которые набрали прогностический коэффициент (ПК) равный или больше +13. По абсолютному критерию отнесения ребенка в группу высокого тромбогенного риска является наличие полиморфных вариантов гена фактора V Лейден (G1691A) генотипа GA, AA или гена протромбина FII (G20210A) генотипа AA.

Те дети, которые набирали по сумме при подсчете прогностического коэффициента от -12 до + 12 баллов были отнесены в группу с факторами тромбогенного риска либо в группу без факторов риска на усмотрение врача, который беседовал с пациентом, выясняя подробнее о наличии отягощённого семейного анамнеза в отношении тромбоз ассоциированных заболеваний. А также наличия таких временных факторов риска, как ожирение, курение, занятие силовыми видами спорта, приём оральных контрацептивов, повышенное АД, малоподвижный образ жизни, подверженность стрессам, нерациональное питание, более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни, установленный диагноз тромбофилия. И, конечно, наличие генетической предрасположенности являлось решающим для отнесения в ту или иную группу. Решение принималось индивидуально по каждому ребёнку.

Таким образом, на основании критериев включения и исключения, данных тромбогенного анамнеза и с учетом распределения полиморфных вариантов протромботических генов были сформированными две группы для исследования. В группу без факторов тромбогенного риска вошли 369 человек, то составило 93,3 % от всех участников исследования. У детей данной группы были зафиксированы менее трёх признаков отягощенного тромбогенного анамнеза, а также отсутствовало носительство полиморфизмов генов фолатного обмена и факторов свёртывания крови. В группу детей с факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 %. Она характеризовалась тем, что встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курению и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %). У детей данной группы в 64,3 % случаев была определена мутация генотипа GA гена фактора V Лейден, а также 35,7 % детей были с компаундами из гомозиготного аллеля ТТ генотипа С677Т гена MTHFR и гомозиготного аллеля АА генотипа G(-455)A гена фибриногена FBG.

Заключение

Таким образом, в деятельность работы Центра здоровья для детей включены исследования генетических полиморфизмов генов факторов свёртывания крови и генов фолатного обмена. Результаты генотипирования выявили, что частота аллеля А 2756G гена MTR (р=0,032) и аллеля С1565 гена ITGB3 (р=0,012) в популяции девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками. Также определено, что доля аллеля 4G (-675) гена PAI-1 (р=0,028) достоверно чаще выявлялась у мальчиков, в то время как доля аллеля 5G гена PAI-1 (р=0,032) с большей частотой выявлена у девочек. Доля аллеля G (-455) гена FGB статистически чаще встречалась у мальчиков (p=0,042), а аллеля A (-455) гена FBG достоверно чаще у девочек (p=0,041). Подобная ситуация наблюдалась в гене ITGA2: аллель С807 достоверно чаще встречается в популяции девочек (p=0,001), а аллель 807Т – у мальчиков (p=0,002). Частоты аллелей исследованных полиморфных вариантов генов фолатного цикла статистических различий не имеют (р>0,05).

Частота гомозиготного аллеля 677Т гена MTHFR у детей, обследованных в Центре здоровья, составила 9,6 %. У девочек достоверно чаще (45,9 %) встречается вариант гетерозиготного аллеля С677Т гена MTHFR (p=0,032). Геторозиготный вариант аллеля A2756G чаще (38,8 %) встречается среди лиц мужского пола (p=0,012), а гомозигота 2756G гена MTR достоверно чаще (11,4 %) встречается у лиц женского пола (p=0,023). Мутация генотипа 807TT гена ITGA2 с большей частотой определялась у мальчиков-подростков (р=0,002), гетерозиготная форма полиморфизма с большей частотой регистрировалась у девочек (р=0,001), а генотип 807СС – у мальчиков (p=0,001). Генотип 1565СС гена ITGB3 (р=0,012) у девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками. Мутация гена FGB (-455)AА и (-455) GA чаще встречались у девочек (p=0,04), а вариант (-455) GG – у мальчиков (p=0,04). Полиморфизм 4G(-675)5G гена PAI-1 выявлялся: гетерозиготный вариант (-675) 4G5G и гомозиготный вариант (-675) 4G4G статистически значимо чаще встречался у мальчиков (p=0,02), а гомозигота (-675) 5G5G – у девочек (p=0,03).

Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови и фолатного обмена было проверено на соответствие равновесию Харди – Вайнберга. Определилось отклонение для частот генотипов G(-455)А гена FBG (χ²=7,832; р=0,02), T(1565)C гена ITGB3 (χ²=8,079; р=0,01), а также для генотипа A2756G гена MTR (χ²=4,342; р=0,043).

На основании критериев включения и исключения, данных тромбогенного анамнеза и с учетом распределения полиморфных вариантов протромботических генов были сформированы две группы для исследования. В группу без факторов тромбогенного риска вошли 369 человек, что составило 93,3 % от всех участников исследования. У детей данной группы были зафиксированы менее трёх признаков отягощенного тромбогенного анамнеза, а также отсутствовало носительство полиморфизмов генов фолатного обмена и факторов свёртывания крови. В группу детей с факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 %. Она характеризовалась тем, что встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курению и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %). У детей данной группы в 64,3 % случаев была определена мутация генотипа GA гена фактора V Лейден, а также 35,7 % детей были с компаундами из гомозиготного аллеля ТТ генотипа С677Т гена MTHFR и гомозиготного аллеля АА генотипа G(-455)A гена фибриногена FBG.