Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,006

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ПРОТРОМБОТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ У ДЕТЕЙ, ОБСЛЕДОВАННЫХ В ЦЕНТРАХ ЗДОРОВЬЯ

Черепанова Л.А. 1 Строзенко Л.А. 1 Галактионова М.Ю. 2 Лобанов Ю.Ф. 1
1 ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России
2 ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет им. Проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России
Включение исследования генетических полиморфизмов генов факторов свёртывания крови и генов фолатного обмена в работу Центров здоровья для детей выявили, что частота аллеля А 2756G гена MTR (р=0,032) и аллеля С1565 гена ITGB3 (р=0,012) в популяции девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками. Также определено, что доля аллеля 4G (-675) гена PAI-1 (р=0,028) достоверно чаще выявлялась у мальчиков, в то время как доля аллеля 5G гена PAI-1 (р=0,032) с большей частотой выявлена у девочек. Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови и фолатного обмена было проверено на соответствие равновесию Харди – Вайнберга. В группу детей с факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 %. Она характеризовалась тем, что встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курения и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %). У детей данной группы в 64,3 % случаев была определена мутация генотипа GA гена фактора V Лейден, а также 35,7 % детей были с компаундами из гомозиготного аллеля ТТ генотипа С677Т гена MTHFR и гомозиготного аллеля АА генотипа G(-455)A гена фибриногена FBG.
генетические маркеры
тромбофилия
Центры здоровья
дети
1. Кочерова В.В., Щербак В.А. Задержка внутриутробного развития плода: факторы риска, диагностика, отдаленные последствия // Российский педиатрический журнал. – 2015. – Т. 18, № 2. – С. 36-42.
2. Основы формирования здоровья детей: учебник / Р.Р. Кильдиярова, В.И. Макарова, Ю.Ф. Лобанов. – Москва, 2016. (2-е изд., испр. и доп.).
3. Строзенко Л.А., Гордеев В.В., Лобанов Ю.Ф., Момот А.П. Распределение полиморфных вариантов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма у подростков Алтайского края // Российский педиатрический журнал. – 2015. – Т. 18, № 4. – С. 19-25.
4. Строзенко Л.А., Лобанов Ю.Ф., Черепанова Л.А. Первичная профилактика тромбоз-ассоциированных заболеваний у детей в центрах здоровья. Монография / Л.А. Строзенко, Ю.Ф. Лобанов, Л.А. Черепанова. – Барнаул, 2015. – 211 с.
5. Stegnar, M. Review: Thrombophilia screening - at the right time, for the right patient, with a good reason / M. Stegnar // Clin. Chem. Lab. Med. – 2010. – Vol. 48, № 1. – С.105-113.
6. Walker, P. Screening, testing, or personalized medicine: where do inherited thrombophilias fit best? / P. Walker, A.R. Gregg // Obstet. Gynecol. Clin North Am. – 2010. – Vol. 37, № 1. – Р.87-107.
7. Zangari, M. Thrombophilia / M. Zangari, F. Elice et al. // Drug Target Insights. – 2008. – № .3. – C.87-97.

По данным Всемирной Организации Здравоохранения тромбоз-ассоциированные заболевания занимают одну из лидирующих позиций в структуре заболеваемости и смертности населения всего мира. Раньше тромбоз считался исключительно заболеванием старшего возраста, но в последние десятилетия появляется все больше сведений о том, что данная патология является актуальной проблемой у лиц молодого возраста, а также детей [1,2,3].

Тромбозы относятся к мультифакторным заболеваниям, в основе которых лежит взаимодействие как внешних, так и внутренних, генетически детерминированных факторов риска [4,5,6]. Особый интерес представляют полиморфизмы генов, кодирующих белки, принимающие участие в процессах тромбообразования [7].

Материал и методы исследования

Проведено генетическое исследование двенадцати протромботических полиморфных вариантов генов-кандидатов: метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR (C677T), метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR (A1298C), метионинсинтазы MTR (A2756G), метионинсинтазыредуктазы MTRR (A66G), фактора II протромбина (G20210А); фактора V Лейден (G1691A); коагуляционного фактора VII – проконвертина (F7) – (G10976A), фактора XIII свертывания крови (G226A); фибриногена G(-455)A; гликопротеина (интегрин альфа-2) ITGA2 (C807T), тромбоцитарного рецептора фибриногена ITGB3-b интегрин (Т1565С), ингибитора активатора плазминогена PAI-1 4G(-675)5G.

Результаты исследования и их обсуждение

При исследовании распределения частот аллелей генов системы свертывания крови было установлено, что частота аллеля С 807 гена ITGA2 (р=0,0003) в популяции девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками, напротив, доля аллеля Т 807 гена ITGA2 с большей частотой выявлена у мальчиков. Вместе с тем доля аллеля 5G (-675) гена PAI-1 (р=0,001) достоверно чаще определялась у девочек, однако, частота аллеля 4G (-675) гена PAI-1 (р=0,011) достигала уровня статистической значимости у мальчиков. По остальным частотам аллелей в исследованных полиморфных вариантах генов статистически значимых различий не наблюдалось (табл. 1).

Таблица 1

Распределение частот аллелей генов фолатного метаболизма и факторов свертывания крови у детей

Локус

Аллели

Всего

n=396(%)

Девочки

n=219(%)

Мальчики

n=177(%)

р

MTHFR

С677Т

С

Т

271 (68,5)

124 (31,5)

150 (68,9)

68 (31,1)

120 (68,0)

57 (32,0)

0,897

0,885

MTHFR

А1298С

А

С

286 (72,1)

110 (27,9)

157 (71,8)

62 (28,2)

128 (72,5)

48 (27,5)

1,000

0,888

MTR

A2756G

А

G

289 (73,1)

107 (26,9)

159 (72,7)

60 (27,3)

130 (73,6)

46 (26,4)

1,000

0,888

MTRR

A66G

A

G

164 (41,3)

232 (58,7)

88 (40,3)

131 (59,7)

75 (42,7)

101 (57,3)

0,460

0,588

FII

G20210А

G

A

393 (99,3)

3 (0,7)

217 (99,2)

2    (0,8)

176 (99,4)

1    (0,6)

1,000

1,000

FV

G1691A

G

A

387 (97,8)

9 (2,2)

215 (97,5)

5 (2,5)

174 (98,3)

3 (1,7)

1,000

1,000

FVII

G10976A

G

A

351 (88,7)

45 (11,3)

194 (88,6)

    25 (11,4)

157 (88,8)

20 (11,2)

1,000

1,000

FXIII

G226A

G

A

296 (74,8)

100 (25,2)

163 (74,8)

55 (25,2)

132 (74,7)

  45 (25,3)

1,000

1,000

FGB

G(-455)A

G

A

308 (77,9)

88 (22,1)

169 (77,5)

49 (22,5)

139 (78,6)

  38 (21,4)

0,170

0,427

ITGA2

C807T

С

T

237 (59,9)

158 (40,1)

144 (66,0)

74 (34,0)

91 (51,7)

85 (48,3)

0,0003

<0,001

ITGB3

Т1565С

Т

С

330 (83,4)

65 (16,6)

177 (81,1)

41 (18,9)

153 (86,5)

24 (13,5)

0,687

0,105

PAI-1

4G(-675)5G

5G

4G

177 (44,9)

218 (55,1)

104 (47,9)

114 (52,1)

73 (41,0)

104 (59,0)

0,001

0,011

 

При анализе частоты встречаемости мутаций и полиморфных вариантов генов с учетом половых различий было выявлено (табл. 2), что мутация генотипа 807 TT гена ITGA2 с большей частотой определялась у мальчиков (р=0,006) по сравнению с девочками. По остальным полиморфным вариантам генов факторов свертывания крови статистически значимых различий не было выявлено. Определено, что полиморфный вариант G1691A гена FV Leiden, мутация G(-455)A гена FGB, полиморфизм 4G(-675)5G гена PAI-1 выявлялись с одинаковой частотой у мальчиков и девочек (р>0,05). В исследованной выборке не было обнаружено минорных аллелей полиморфного варианта G20210A гена FII и полиморфизма G1691A гена FV Leiden.

Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови проверено на соответствие равновесию Харди – Вайнберга. Как видно из табл. 4, что распределение частот восьми генотипов генов факторов свертывания крови соответствует соотношению Харди – Вайнберга, то есть наблюдаемое распределение генотипов G20210А FII, G1691A FV, G10976A FVII, G226A FXIII, G(-455)A FGB, C807T ITGA2, Т1565С ITGВ3, 4G (-675)5G PAI-1 согласуется с ожидаемыми частотами распределения. При анализе соответствия распределению частот аллелей и генотипов в популяции детей установлено, что фактическое распределение генотипов генов факторов свертывания крови согласуется с теоретическим, статистически значимых различий выявить не удалось.

Таблица 2

Распределение генотипов и аллелей генов факторов свертывания крови у детей

Локус

Генотип

N.O. %

N.E. %

χ2,   d.f.=1

FII

G20210А

 

GG

98,6

98,5

0,011

p=0,916

GA

1,4

1,4

AA

0

0,01

FV

G1691A

 

GG

95,7

95,7

0,102

p=0,750

GA

4,3

4,2

AA

0

0,05

FVII

G10976A

 

GG

79,3

78,7

0,866

p=0,352

GA

18,8

20,0

AA

1,9

1,3

FXIII

G226A

 

GG

56,7

55,9

0,413

p=0,520

GA

36,1

37,7

AA

7,2

6,4

FGB

G(-455)A

 

GG

56,7

55,9

0,413

p=0,520

GA

36,1

37,7

AA

7,2

6,4

ITGA2

C807T

 

CC

37,0

35,8

0,512

p=0,474

CT

45,7

48,1

TT

17,3

16,1

ITGB3

T1565C

 

TT

69,2

69,6

0,131

p=0,717

TC

28,4

27,7

CC

2,4

2,7

PAI-1

4G (-675)5G

 

5G/5G

19,5

19,0

0,177

p=0,828

4G/5G

51,3

42,2

4G/4G

29,2

31,8

Примечание: N.O. – наблюдаемые частоты генотипов; N.E. – ожидаемые частоты генотипов; критерий χ2 использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди – Вайнберга; d.f. – число степеней свободы.

При исследовании частоты встречаемости генотипов и аллелей генов фолатного метаболизма в популяции детей установлено, что распределение частот четырех генотипов С677Т и А1298С гена MTHFR, A2756G гена MTR и генотипа A66G гена MTRR соответствовало равновесию Харди – Вайнберга. Отклонений в распределении данных генотипов в популяции детей зафиксировано не было.

На основании данных о наличии трёх и более признаков отягощенного тромбогенного анамнеза была сформирована группа с высокими факторами тромбогенного риска. В группу детей с высокими факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 % от общего количества исследованных. Из них было 17 девочек и 10 мальчика. У детей этой группы встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курения и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %), а также наличие генетической предрасположенности к тромбозам.

Таблица 3

Характеристика группы с высокими факторами тромбогенного риска  

Признак

Всего (n=27)

Девочки (n=17)

Мальчики (10)

Более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни

8 (28,5%)

3 (20,0%)

5 ( 50,0%)

Наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников

6 (21,4%)

3 (20,0%)

2 (25,0%)

Наличие остеохондроза, ожирения и/или вегетососудистой дистонии

6 (21,4%)

3 (20,0%)

2 (25,0%)

Наличие установленного диагноза тромбофилия

0

0

0

Наличие активного и/или пассивного курения

8 (28,5%)

2 (10,0%)

7 (75,0%)*

Занятия игровыми видами спортом

2 (7,1%)

2 (10,0%)

0

Приём оральных контрацептивов

0

0

-

Повышенное артериальное давление

0

0

0

Малоподвижный образ жизни

6 (21,4%)

3 (20,0%)

2 (25,0%)

Подверженность стрессовым ситуациям

5 (17,2%)

2 (10,0%)

2 (25,0%)

Нерациональное питание

10 (35,7%)

5 (30,0%)

5 (50,0%)

Отягощенный гинекологический анамнез у девушек

0

0

0

Примечание: * – статистически значимые различия показателей у мальчиков и девочек (p<0,05).

Как видно из табл. 3, в группе детей с высокими факторами тромбогенного риска, статистически чаще среди мальчиков встречалось наличие активного и/или пассивного курения (p<0,05). По остальным признакам достоверных различий не было обнаружено.

В ходе исследования были определены 27 человек (что составляет 6,7 % от общего количества исследованных детей), которые набрали прогностический коэффициент (ПК) равный или больше +13. По абсолютному критерию отнесения ребенка в группу высокого тромбогенного риска является наличие полиморфных вариантов гена фактора V Лейден (G1691A) генотипа GA, AA или гена протромбина FII (G20210A) генотипа AA.

Те дети, которые набирали по сумме при подсчете прогностического коэффициента от -12 до + 12 баллов были отнесены в группу с факторами тромбогенного риска либо в группу без факторов риска на усмотрение врача, который беседовал с пациентом, выясняя подробнее о наличии отягощённого семейного анамнеза в отношении тромбоз ассоциированных заболеваний. А также наличия таких временных факторов риска, как ожирение, курение, занятие силовыми видами спорта, приём оральных контрацептивов, повышенное АД, малоподвижный образ жизни, подверженность стрессам, нерациональное питание, более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни, установленный диагноз тромбофилия. И, конечно, наличие генетической предрасположенности являлось решающим для отнесения в ту или иную группу. Решение принималось индивидуально по каждому ребёнку.

Таким образом, на основании критериев включения и исключения, данных тромбогенного анамнеза и с учетом распределения полиморфных вариантов протромботических генов были сформированными две группы для исследования. В группу без факторов тромбогенного риска вошли 369 человек, то составило 93,3 % от всех участников исследования. У детей данной группы были зафиксированы менее трёх признаков отягощенного тромбогенного анамнеза, а также отсутствовало носительство полиморфизмов генов фолатного обмена и факторов свёртывания крови. В группу детей с факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 %. Она характеризовалась тем, что встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курению и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %). У детей данной группы в 64,3 % случаев была определена мутация генотипа GA гена фактора V Лейден, а также 35,7 % детей были с компаундами из гомозиготного аллеля ТТ генотипа С677Т гена MTHFR и гомозиготного аллеля АА генотипа G(-455)A гена фибриногена FBG.

Заключение

Таким образом, в деятельность работы Центра здоровья для детей включены исследования генетических полиморфизмов генов факторов свёртывания крови и генов фолатного обмена. Результаты генотипирования выявили, что частота аллеля А 2756G гена MTR (р=0,032) и аллеля С1565 гена ITGB3 (р=0,012) в популяции девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками. Также определено, что доля аллеля 4G (-675) гена PAI-1 (р=0,028) достоверно чаще выявлялась у мальчиков, в то время как доля аллеля 5G гена PAI-1 (р=0,032) с большей частотой выявлена у девочек. Доля аллеля G (-455) гена FGB статистически чаще встречалась у мальчиков (p=0,042), а аллеля A (-455) гена FBG достоверно чаще у девочек (p=0,041). Подобная ситуация наблюдалась в гене ITGA2: аллель С807 достоверно чаще встречается в популяции девочек (p=0,001), а аллель 807Т – у мальчиков (p=0,002). Частоты аллелей исследованных полиморфных вариантов генов фолатного цикла статистических различий не имеют (р>0,05).

Частота гомозиготного аллеля 677Т гена MTHFR у детей, обследованных в Центре здоровья, составила 9,6 %. У девочек достоверно чаще (45,9 %) встречается вариант гетерозиготного аллеля С677Т гена MTHFR (p=0,032). Геторозиготный вариант аллеля A2756G чаще (38,8 %) встречается среди лиц мужского пола (p=0,012), а гомозигота 2756G гена MTR достоверно чаще (11,4 %) встречается у лиц женского пола (p=0,023). Мутация генотипа 807TT гена ITGA2 с большей частотой определялась у мальчиков-подростков (р=0,002), гетерозиготная форма полиморфизма с большей частотой регистрировалась у девочек (р=0,001), а генотип 807СС – у мальчиков (p=0,001). Генотип 1565СС гена ITGB3 (р=0,012) у девочек статистически значимо выше по сравнению с мальчиками. Мутация гена FGB (-455)AА и (-455) GA чаще встречались у девочек (p=0,04), а вариант (-455) GG – у мальчиков (p=0,04). Полиморфизм 4G(-675)5G гена PAI-1 выявлялся: гетерозиготный вариант (-675) 4G5G и гомозиготный вариант (-675) 4G4G статистически значимо чаще встречался у мальчиков (p=0,02), а гомозигота (-675) 5G5G – у девочек (p=0,03).

Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови и фолатного обмена было проверено на соответствие равновесию Харди – Вайнберга. Определилось отклонение для частот генотипов G(-455)А гена FBG (χ2=7,832; р=0,02), T(1565)C гена ITGB3 (χ2=8,079; р=0,01), а также для генотипа A2756G гена MTR (χ2=4,342; р=0,043).

На основании критериев включения и исключения, данных тромбогенного анамнеза и с учетом распределения полиморфных вариантов протромботических генов были сформированы две группы для исследования. В группу без факторов тромбогенного риска вошли 369 человек, что составило 93,3 % от всех участников исследования. У детей данной группы были зафиксированы менее трёх признаков отягощенного тромбогенного анамнеза, а также отсутствовало носительство полиморфизмов генов фолатного обмена и факторов свёртывания крови. В группу детей с факторами тромбогенного риска вошли 27 человек, что составило 6,7 %. Она характеризовалась тем, что встречались сочетания нерационального питания, малоподвижного образа жизни и наличие вегетососудистой дистонии (21,2 %). Подверженность стрессовым ситуациям, курению и наличие положительного тромботического анамнеза у кровных родственников (14,3 %). Нерациональное питание, малоподвижный образ жизни и более трёх эпизодов кровоточивости в течение жизни (21,2 %). У детей данной группы в 64,3 % случаев была определена мутация генотипа GA гена фактора V Лейден, а также 35,7 % детей были с компаундами из гомозиготного аллеля ТТ генотипа С677Т гена MTHFR и гомозиготного аллеля АА генотипа G(-455)A гена фибриногена FBG.


Библиографическая ссылка

Черепанова Л.А., Строзенко Л.А., Галактионова М.Ю., Лобанов Ю.Ф. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ПРОТРОМБОТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ У ДЕТЕЙ, ОБСЛЕДОВАННЫХ В ЦЕНТРАХ ЗДОРОВЬЯ // Современные проблемы науки и образования. – 2016. – № 5. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=25332 (дата обращения: 19.03.2024).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1,674