Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

При разработке нового лекарственного препарата одной из основных задач является его стандартизация. Ранее нами были разработаны: состав препарата «Гинкготропил-форте»[4]и на примере экспериментальной серии таблеток методика совместного определения в нем глицина и кислоты янтарнойметодом капиллярного электрофореза[2].Настоящая работапосвященавалидационной оценкеразработанной методики.

Цель работы

Валидационная оценка методикиопределения глицина и кислоты янтарной в таблетках ноотропного действия методом капиллярного электрофореза.

Материалы и методы исследования

Для исследования использовали образцы таблеток разрабатываемого препарата ноотропного действия «Гинкготропил-форте» (экспериментальная серия от 27.11.14); субстанции глицина с количественным содержанием 99,5% (WIRUD®GL10001, производитель WIRUDGmbH, Германия), кислоты янтарной с содержанием 99,7% (HuanlongFoodAdditivesCorporation, Китай), а также сухие экстракты гинкго двулопастного и лабазника вязолистного [2].

Работа проводилась с использованием системы капиллярного электрофореза Капель 105 (группа компаний Люмэкс, Россия). Рабочие параметры прибора: кварцевый капилляр диаметром 75 мкм, общей длинной 60 см и эффективной длинной 50 см;детектирование осуществляли спектрофотометрически при длине волны равной 200 нм в катодной области капилляра;напряжение +20 кВ, температура опыта 30°С; ввод пробы гидродинамически 150 мБар×с; давление, прикладываемое при анализе 10 мБар.Ведущий электролит0,01 М боратный буферный раствор с рН 9.Для подготовки капилляра и восстановления его поверхности проводили его последовательную промывку водой, 0,5 М раствором кислоты хлористоводородной, водой, 0,5 М раствором натрия гидроксида, водой и затем ведущим электролитом [1–3].

Методика: около 0,2 г (точная навеска) массы растертых таблеток (модельной смеси) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в небольшом количестве воды очищенной в течение 10 минут, доводят объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивают. 1 мл полученного раствора центрифугируют в течение 5 минут при 8000 мин-1 и подвергают анализу, прикладывая по ходу эксперимента давление 10 мБар. В аналогичных условиях выполняют анализ растворов стандартных образцов (СО) глицина и кислоты янтарной. Расчет содержания глицина и кислоты янтарной проводили по формуле:

где:      – площадь исследуемого вещества;

 – площадь стандартного образца;

 – навескастандартного образца, г;

 – навеска испытуемого образца, г;

 – средняя масса таблеток, г.

Приготовление растворов стандартных образцов  и модельных смесей таблеток

Точные навески глицина (0,1000 г) и кислоты янтарной (0,0200 г) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли 50–60 мл воды и доводили используемым растворителем до метки.

Для построенияградуировочного графика использовали растворы СО следующих концентраций: глицин – 0,0250%; 0,0500%; 0,1000%; 0,1500%; 0,2000%; кислота янтарная – 0,0050%; 0,0100%; 0,0200%; 0,0300%; 0,0400%.

Модельные смеси таблеток готовили согласно данным, приведенным в таблице 1.

Таблица 1

Состав модельных смесей таблеток

Модельная смесь	Содержание анализируемых веществ		Содержание других компонентов в модельных смесях
	Глицин, г	Янтарная кислота, г
1	Нет	Нет	Экстракт гинкго двулопастного сухого, экстракт лабазника вязолистного сухого и вспомогательных веществ до массы 0,2100 г
2	0,0800	0,0400
3	0,1000	0,0200
4	0,1200	0,0100

 

Результаты исследований и их обсуждение

Валидационную оценку разработанной методики устанавливали по показателям: специфичность, линейность, прецизионность и правильность.

Специфичность методики определяли, сравнивая раствор СО глицина и кислоты янтарной с раствором модельной смеси 1(табл. 1) и раствором экспериментальной серии таблеток. Было установлено, что время миграции глицина и кислоты янтарной в экспериментальной серии таблеток соответствует времени СО данных веществ.Присутствующие в экстрактах гинкго и лабазника биологически активные веществаи вспомогательные вещества таблетокне мешают определению глицина и кислоты янтарной (рис. 1, Б). Полученные данные говорят о специфичности методики.

Рис.1. Элетрофореграмы растворов: А – раствор СО глицина(1) и кислоты янтарной(2);

Б – раствор модельной смеси 1; В – раствор экспериментальной серии таблеток

Линейность методикиопределялипо результатам анализа серии растворов СО глицина в интервале концентраций 0,0025–0,2000% и янтарной кислоты 0,0050–0,0400%. На рисунках 2 и 3 представлены графики зависимости площади пика исследуемых веществ от их концентраций в пробе. Полученная зависимость имеет линейный характер и описывается уравнениями регрессии: y = 259,23x + 0,9116 (глицин) и y = 1264,3x - 0,0842 (янтарная кислота). Критерием приемлемости линейности является коэффициент корреляции (r ≥ 0,99), который составил для глицина и кислоты янтарной0,9991 и 0,9990соответственно[5].

Рис.2. График зависимости площади пика от концентрации глицина в пробе

Рис.3. График зависимости площади пика от концентрации янтарной кислоты в пробе

 

Таким образом, методика валидна по критерию линейность и может быть использована для количественного определения глицина и янтарной кислоты в препарате «Гинкготропил-форте» в указанном диапазоне концентраций.

Для установления прецизионности (сходимости) методики количественного определения глицина и кислоты янтарной, проводили 6 параллельных определений этих компонентов в таблетках «Гинкготропил-форте» экспериментальной серии от 27.11.14. Расчет содержания (г/табл.) проводили с использованием СО. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2

 Результаты оценкипрецизионностиметодики количественного определения

 глицина и янтарной кислоты

 

Критерий приемлемости, выражаемый через величину относительного стандартного отклонения (RSD,%), составляющий ±1,99% (глицин) и ±2,51% (кислота янтарная), удовлетворяет требованиям по параметру сходимости, что свидетельствует о валидностиданной методики по показателюпрецизионность [5].

Правильность методики определяли путем анализа 9 образцов модельных смесей на трех уровнях концентраций. Оценку правильности проводили по параметру «открываемость»(R, %). Полученные результаты представлены в таблицах 3,4.

Таблица 3

Результаты оценки правильности методики количественного определения глицина в модельной смеси таблеток

Таблица 4

Результаты оценки правильности методики количественного определениякислоты янтарной в модельной смеси таблеток

*Навески: 1–3 – модельная смесь 2; 4–6 – модельная смесь 3; 7–9 – модельная смесь 4 (см. табл.2)

Полученные результаты свидетельствуют, что значения открываемости для обоих веществнаходятся в пределах для глицина 95–105% и янтарной кислоты 90–107%, что согласно общепринятым рекомендациям свидетельствует о валидности методики по данному показателю [5].

Выводы

Методика определения глицина и кислоты янтарной методом капиллярного электрофореза валидна по показателям: специфичность, линейность, прецизионность, правильность и может быть использована для включения в нормативно-техническую документацию на разрабатываемый препарат в разделы «Подлинность», «Количественное определение» проекта ФСП «Таблетки “Гинкготропил-форте”сублингвальные».

Рецензенты:

Лазарян Д.С., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармацевтической и токсикологической химии ПМФИ – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г.Пятигорск;

Кодониди И.П., д.фарм.н., доцент кафедры органической химии ПМФИ – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск.