Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

VALIDATION ASSESSMENT TECHNIQUE FOR DETERMINING GLYCINE AND SUCCINIC ACID IN TABLETS NOOTROPIC ACTION BY CAPILLARY ELECTROPHORESIS

Krylov N.N. 1 Senchenko S.P. 1 Kompantseva E.V. 1
1 Pyatigorsk medico-pharmaceutical institute – branch to Volgograd State Medical Universit
Представлены результаты валидационной оценки методики определения глицина и кислоты янтарной при совместном присутствии в препарате «Гинкготропил-форте», экспериментальная серия от 27.11.14, методом капиллярного электрофореза. Валидационную оценку проводили, используя стандартные образцы глицина и кислоты янтарной и модельные смеси по следующим параметрам, как специфичность, линейность, прецизионность (сходимость) и правильность.Установлено что данная методика является специфичной; область линейной зависимости находится при концентрацияхглицина в интервале 0,0025–0,2000% и янтарной кислоты 0,0050–0,0400%; сходимость методики имеет относительное стандартное отклонение для глицина ±1,99% и кислоты янтарной ±2,51%;открываемость для обоих веществ находится в пределах для глицина 95–105% и янтарной кислоты 90–107%. Полученные результаты могут быть использованы для включения в нормативную документацию на разрабатываемый препарат в разделы «Подлинность», «Количественное определение»проекта ФСП «Таблетки “Гинкготропил-форте” сублингвальные».
The results of the validation methodology for determining the assessment of glycine and succinic acid in the joint presence of the preparation "Ginkgotropil forte", an experimental series of 11.27.14, by capillary electrophoresis. Validation assessment was carried out using standard samples of glycine and succinic acid, and mixtures of the following model parameters such as specificity, linearity, precision and accuracy. It was found that this method is specific; the region is a linear relationship with the concentration of glycine in the range 0.0025–0.2000% and succinic acid 0.0050–0.0400%; the convergence of the method is the relative standard deviation for glycine ± 1,99% of succinic acid and ± 2,51%; openability for both substances is in the range of 95–105% of glycine and succinic acid 90–107%. The results obtained can be used for inclusion in the legal and technical documentation developed the drug in the sections "authenticity", "Quantitative determination of the" FSP project ""Tablets"Ginkgotropil-forte"sublingual".
accuracy.
precision
linearity
specificity
validation
capillary electrophoresis
succinic acid
glycine
При разработке нового лекарственного препарата одной из основных задач является его стандартизация. Ранее нами были разработаны: состав препарата «Гинкготропил-форте»[4]и на примере экспериментальной серии таблеток методика совместного определения в нем глицина и кислоты янтарнойметодом капиллярного электрофореза[2].Настоящая работапосвященавалидационной оценкеразработанной методики.

Цель работы

Валидационная оценка методикиопределения глицина и кислоты янтарной в таблетках ноотропного действия методом капиллярного электрофореза.

Материалы и методы исследования

Для исследования использовали образцы таблеток разрабатываемого препарата ноотропного действия «Гинкготропил-форте» (экспериментальная серия от 27.11.14); субстанции глицина с количественным содержанием 99,5% (WIRUD®GL10001, производитель WIRUDGmbH, Германия), кислоты янтарной с содержанием 99,7% (HuanlongFoodAdditivesCorporation, Китай), а также сухие экстракты гинкго двулопастного и лабазника вязолистного [2].

Работа проводилась с использованием системы капиллярного электрофореза Капель 105 (группа компаний Люмэкс, Россия). Рабочие параметры прибора: кварцевый капилляр диаметром 75 мкм, общей длинной 60 см и эффективной длинной 50 см;детектирование осуществляли спектрофотометрически при длине волны равной 200 нм в катодной области капилляра;напряжение +20 кВ, температура опыта 30°С; ввод пробы гидродинамически 150 мБар×с; давление, прикладываемое при анализе 10 мБар.Ведущий электролит0,01 М боратный буферный раствор с рН 9.Для подготовки капилляра и восстановления его поверхности проводили его последовательную промывку водой, 0,5 М раствором кислоты хлористоводородной, водой, 0,5 М раствором натрия гидроксида, водой и затем ведущим электролитом [1–3].

Методика: около 0,2 г (точная навеска) массы растертых таблеток (модельной смеси) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в небольшом количестве воды очищенной в течение 10 минут, доводят объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивают. 1 мл полученного раствора центрифугируют в течение 5 минут при 8000 мин-1 и подвергают анализу, прикладывая по ходу эксперимента давление 10 мБар. В аналогичных условиях выполняют анализ растворов стандартных образцов (СО) глицина и кислоты янтарной. Расчет содержания глицина и кислоты янтарной проводили по формуле:

где:      – площадь исследуемого вещества;

 – площадь стандартного образца;

 – навескастандартного образца, г;

 – навеска испытуемого образца, г;

 – средняя масса таблеток, г.

Приготовление растворов стандартных образцов  и модельных смесей таблеток

Точные навески глицина (0,1000 г) и кислоты янтарной (0,0200 г) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли 50–60 мл воды и доводили используемым растворителем до метки.

Для построенияградуировочного графика использовали растворы СО следующих концентраций: глицин – 0,0250%; 0,0500%; 0,1000%; 0,1500%; 0,2000%; кислота янтарная – 0,0050%; 0,0100%; 0,0200%; 0,0300%; 0,0400%.

Модельные смеси таблеток готовили согласно данным, приведенным в таблице 1.

Таблица 1

Состав модельных смесей таблеток

Модельная смесь

Содержание анализируемых веществ

Содержание других компонентов в модельных смесях

Глицин, г

Янтарная кислота, г

1

Нет

Нет

Экстракт гинкго двулопастного сухого, экстракт лабазника вязолистного сухого и вспомогательных веществ до массы 0,2100 г

2

0,0800

0,0400

3

0,1000

0,0200

4

0,1200

               0,0100

 

Результаты исследований и их обсуждение

Валидационную оценку разработанной методики устанавливали по показателям: специфичность, линейность, прецизионность и правильность.

Специфичность методики определяли, сравнивая раствор СО глицина и кислоты янтарной с раствором модельной смеси 1(табл. 1) и раствором экспериментальной серии таблеток. Было установлено, что время миграции глицина и кислоты янтарной в экспериментальной серии таблеток соответствует времени СО данных веществ.Присутствующие в экстрактах гинкго и лабазника биологически активные веществаи вспомогательные вещества таблетокне мешают определению глицина и кислоты янтарной (рис. 1, Б). Полученные данные говорят о специфичности методики.

Рис.1. Элетрофореграмы растворов: А – раствор СО глицина(1) и кислоты янтарной(2);

Б – раствор модельной смеси 1; В – раствор экспериментальной серии таблеток

Линейность методикиопределялипо результатам анализа серии растворов СО глицина в интервале концентраций 0,0025–0,2000% и янтарной кислоты 0,0050–0,0400%. На рисунках 2 и 3 представлены графики зависимости площади пика исследуемых веществ от их концентраций в пробе. Полученная зависимость имеет линейный характер и описывается уравнениями регрессии: y = 259,23x + 0,9116 (глицин) и y = 1264,3x - 0,0842 (янтарная кислота). Критерием приемлемости линейности является коэффициент корреляции (r ≥ 0,99), который составил для глицина и кислоты янтарной0,9991 и 0,9990соответственно[5].

Рис.2. График зависимости площади пика от концентрации глицина в пробе

Рис.3. График зависимости площади пика от концентрации янтарной кислоты в пробе

 

Таким образом, методика валидна по критерию линейность и может быть использована для количественного определения глицина и янтарной кислоты в препарате «Гинкготропил-форте» в указанном диапазоне концентраций.

Для установления прецизионности (сходимости) методики количественного определения глицина и кислоты янтарной, проводили 6 параллельных определений этих компонентов в таблетках «Гинкготропил-форте» экспериментальной серии от 27.11.14. Расчет содержания (г/табл.) проводили с использованием СО. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2

 Результаты оценкипрецизионностиметодики количественного определения

 глицина и янтарной кислоты

Взято

Найдено

Масса таблеток,

г

Глицин

Кислота янтарная

Площади

пиков

Х, г/табл.

Метрологические

характеристики

Площади

пиков

Х,

г/табл.

Метрологические

характеристики

0,2131

0,2096

0,2109

0,2137

0,2082

0,2090

22,97

22,67

22,88

22,83

22,15

22,19

0,0970

0,1020

0,1000

0,0970

0,0980

0,0980

 

= 0,0987

SD = 0,002

RSD= ±1,99%

25,06

24,98

26,34

26,28

25,95

26,39

0,0195

0,0198

0,0201

0,0200

0,0210

0,0200

 

= 0,0201

SD = 0,001

RSD= ±2,51%

 

Критерий приемлемости, выражаемый через величину относительного стандартного отклонения (RSD,%), составляющий ±1,99% (глицин) и ±2,51% (кислота янтарная), удовлетворяет требованиям по параметру сходимости, что свидетельствует о валидностиданной методики по показателюпрецизионность [5].

Правильность методики определяли путем анализа 9 образцов модельных смесей на трех уровнях концентраций. Оценку правильности проводили по параметру «открываемость»(R, %). Полученные результаты представлены в таблицах 3,4.

Таблица 3

Результаты оценки правильности методики количественного определения глицина в модельной смеси таблеток

Глицин

Уровень

Навеска*, г

 

Содержание в модельной смеси, г

Найдено, г

R,%

Метрологические

характеристики

1

0,2013

0,0800

0,0805

100,63

 

 

 

 = 99,91 %.

SD = 1,33%

RSD = ±1,34%

1

0,2062

0,0800

0,0791

98,88

1

0,2030

0,0800

0,0802

100,25

2

0,2036

0,1000

0,0975

97,50

2

0,2101

0,1000

0,0991

99,10

2

0,2056

0,1000

0,1017

101,70

3

0,2068

0,1200

0,1192

99,33

3

0,2109

0,1200

0,1217

101,42

3

0,2090

0,1200

0,1205

100,42

Таблица 4

Результаты оценки правильности методики количественного определениякислоты янтарной в модельной смеси таблеток

Кислота янтарная

Уровень

Навеска*, г

 

Содержание в модельной смеси, г

Найдено, г

R,%

Метрологические

характеристики

1

0,2013

0,0100

0,0098

98,00

 

 

 

 = 99,69 %

SD = 2,88%

RSD = ±2,89%

1

0,2062

0,0100

0,0102

102,00

1

0,2030

0,0100

0,0099

99,00

2

0,2036

0,0200

0,0198

99,00

2

0,2101

0,0200

0,0192

96,00

2

0,2056

0,0200

0,0210

105,00

3

0,2068

0,0400

0,0394

98,50

3

0,2109

0,0400

0,0389

97,25

3

0,2090

0,0400

0,0410

102,50

*Навески: 1–3 – модельная смесь 2; 4–6 – модельная смесь 3; 7–9 – модельная смесь 4 (см. табл.2)

Полученные результаты свидетельствуют, что значения открываемости для обоих веществнаходятся в пределах для глицина 95–105% и янтарной кислоты 90–107%, что согласно общепринятым рекомендациям свидетельствует о валидности методики по данному показателю [5].

Выводы

Методика определения глицина и кислоты янтарной методом капиллярного электрофореза валидна по показателям: специфичность, линейность, прецизионность, правильность и может быть использована для включения в нормативно-техническую документацию на разрабатываемый препарат в разделы «Подлинность», «Количественное определение» проекта ФСП «Таблетки “Гинкготропил-форте”сублингвальные».

Рецензенты:

Лазарян Д.С., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармацевтической и токсикологической химии ПМФИ – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г.Пятигорск;

Кодониди И.П., д.фарм.н., доцент кафедры органической химии ПМФИ – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск.