При АС выявляются признаки системной воспалительной реакции, которая характеризуется оксидантным стрессом, коагулопатией по типу ДВС-синдрома, генерализованной активацией и дегрануляцией мастоцитов, тотальным включением в цитокиногенез эндотелиоцитов, сосудистых макрофагов и системы комплимента, внутрисосудистой активацией нейтрофилов системы комплемента. Следствием данных процессов является нарастающая провоспалительная цитокинемия [3].
В современной ревматологии изучение цитокинового профиля приобретает все большее значение в рамках поиска новых мишеней для терапии системных воспалительных заболеваний, исследований новейших генно-инженерных биологических препаратов и новых подходов для своевременной клинической диагностики [4].
Цель исследования
Оценить зависимость активности заболевания при АС от содержания провоспалительных цитокинов в сыворотке крови.
Материалы и методы исследования
Исследование проводилось на базе ревматологического отделения ГУЗГКБСМП № 25 г. Волгограда. Критериям включения соответствовали 60 пациентов с достоверным диагнозом АС (согласно модифицированным Нью-Йоркским критериям 1984 г.) [6]. Средний возраст пациентов составил 38±14,8 лет, среди которых было 46 (77%) мужчин и 14 (23%) женщин. Длительность заболевания более 5 лет отмечалась у 25 (42%) пациентов, продолжительность болезни менее 5 лет - у 35 (58%) человек.
Для оценки цитокинового профиля использовали наборы реагентов производства ЗАО «Вектор-Бест» для иммуноферментного определения концентрации цитокинов в сыворотке крови человека: ИЛ-1β (ИНТЕРЛЕЙКИН-1 бета-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8766, чувствительность: 1 пг/мл, диапазон измерений: 0-250 пг/мл), ИЛ-8 (ИНТЕРЛЕЙКИН-8-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8762, чувствительность: 2 пг/мл, диапазон измерений: 0-250 пг/мл), ИЛ-17 (ИНТЕРЛЕЙКИН-17-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8778, чувствительность: 2 пг/мл, диапазон измерений: 0-500 пг/мл), ФНО-α (альфа-ФНО-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8756, чувствительность: 1 пг/мл, диапазон измерений: 0-250 пг/мл.
Лабораторные исследования выполнялись на многоканальном микропланшетном спектрофотометре «MULTISCAN EX» (Thermo Electron Corporation) при длине волны 450 нм в условиях клинико-диагностической лаборатории ФГБНУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» (г. Волгоград) в соответствии с ведомственными нормативными документами, регламентирующими порядок их проведения. После измерения оптической плотности раствора в лунках планшета на основании соответствующего калибровочного графика нами рассчитывалась концентрация исследуемого цитокина в анализируемых образцах. Полученные результаты выражали в пг/мл.
Для оценки активности заболевания использовался BASDAI (Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index).
Статистическая обработка данных проводилась при помощи программного обеспечения STATISTICA 6,0 (StatSoft, USA). Данные представлены в виде средней арифметической (М), среднеквадратического отклонения (σ), 25 и 75 процентилей. Для оценки достоверности различий между группами использовались критерии Стьюдента (t) для независимых групп [5]. Различия считались достоверными при p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
На основании инструкций по применению к наборам реагентов нами были выделены следующие предельно допустимые значения (ПДЗ).
Таблица 1
Предельно допустимые значения исследуемых показателей
|
ИЛ-1β |
0-11 пг/мл |
|
ИЛ-8 |
0-10 пг/мл |
|
ИЛ-17 |
0-5 пг/мл |
|
ФНО-α |
0-6 пг/мл |
Пациенты были разделены на 2 группы по активности заболевания:
1-я группа - высокая активность (BASDAI ≥ 4);
2-я группа - умеренная активность (BASDAI < 4).
Таблица 2
Общая характеристика пациентов
|
Показатель |
Высокая активность |
Умеренная активность |
|
Общее число пациентов (n = 60) |
38 (64%) |
22 (36%) |
|
BASDAI |
5,48±1,03[4, 8; 6, 5] |
2,5±1,03[1, 5; 3, 6] |
|
Длительность АС < 5 лет (n = 35) |
24 |
11 |
|
Длительность АС > 5 лет (n = 25) |
9 |
16 |
Во время исследования нами отмечалась более высокая активность заболевания у пациентов с длительностью болезни менее 5 лет, что можно объяснить более выраженными биохимическими процессами, которые запускают и поддерживают механизм длительного аутоиммунного воспаления, в некоторых случаях - поздней диагностикой заболевания и малой продолжительностью патогенетического лечения.
Таблица 3
Сравнение уровней провоспалительных цитокинов (в пг/мл) у пациентов с разной активностью анкилозирующего спондилита
|
Показатель |
Высокая активность |
Умеренная активность |
p |
t |
|
ИЛ-1β |
62,43±32,83 [16,24;95,81] |
40,43±21,3 [12,4;68,11] |
0,006 |
3,5072 |
|
ИЛ-8 |
72,76±23,58 [18,34;85,43] |
42,12±24,62 [10,23;70,31] |
0,0008 |
2,842 |
|
Ил-17 |
1,68±0,63 [0,64;1,87] |
1,66±1,02 [10,13;34,54] |
0,72 |
-1,023 |
|
ФНО-α |
84,2±34,65 [14,63;87,7] |
59,76±24,65 [11,87;72,32] |
0,0006 |
3,125 |
Полученные нами данные показывают достоверно более высокие концентрации провоспалительных цитокинов ИЛ-1β, ИЛ-8, ФНО-α у пациентов с высокой активностью.
Значения ИЛ-17 в нашем исследовании не выходили за рамки предельно допустимых значений, но, несомненно, данный интерлейкин требует дальнейшего изучения, являясь новой мишенью терапии для схожего по клинической картине псориатического артрита [3].
Повышенные значения ИЛ-1β и ФНО-α в группе пациентов с высокой активностью заболевания вероятнее всего являются одной из причин высокой активности заболевания, потому что способствуют инициации воспаления и разрушения костной и хрящевой ткани как аксиального скелета, так и периферических суставов, тем самым усиливая болевые и сковывающие симптомы у пациентов, заполнявших опросник BASDAI.
ИЛ-8 вместе с другими цитокинами участвует в создании градиента для хемотаксиса фагоцитирующих клеток. Помимо этого, он обладает способностью вызывать появление в клетках эндотелия специфических рецепторов, которые реагируют с моноцитами и нейтрофилами и останавливают эти клетки в капиллярах, расположенных в районе воспаления [2]. Таким образом, данный цитокин обеспечивает длительное поддержание воспаления в пораженной области, обеспечивая более высокую активность.
Выводы
На основании полученных нами данных повышение значений провоспалительных цитокинов ИЛ-1β, ИЛ-8, ФНО-α вместе с другими факторами системного воспалительного процесса имеет прямую взаимосвязь с высокой активностью заболевания при анкилозирующем спондилите.
Рецензенты:
Гонтарь И.П., д.м.н., профессор, зав. клинико-иммунологической лабораторией ФГБНУ «НИИ КиЭР», г. Волгоград;
Зборовская И.А., д.м.н., профессор, директор ФГБНУ «НИИ КиЭР» г. Волгоград.