Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

POLYMORPHISMOF GENEFV (LEIDEN G1691A), GENEF2 (G20210A) AND GENEMTHFR (C677T)ATPATIENTS WITH A CRANIOCEREBRAL INJURYIN ZABAIKALIANEDGE

Stupin Yu.V. 2, 1 Dorzheev V.V. 2 Miromanov A.M. 2 Vitkovskiy Yu.A. 2
1 City hospital № 1
2 Chita State Medical Academy
Results of research of occurrence of genotypes of a polymorphic marker of a gene of the factor V Leiden (FV G1691A), a gene of a prothrombin II (FII G20210A) and a gene methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR C677T) at patients with a craniocerebral injury in Zabaikalian edge are presented. 96 patients are included in research with a craniocerebralinjury at the age from 20 till 40 years. The control group was made by practically healthy 100 donors of similar age. As a material for the genetic analysis the samples of DNA allocated from peripheric venous blood served. In work standard sets research-and-production firm "Liteh" - «SNP» (Moscow) were used. The obtained data are processed by means of the program «Statistica 6.1». The statistical analysis of the received data is spent with use of criterion χ2. Absence of communication between development of venous tromboembolic episodes is fixed at a craniocerebralinjury and hereditary changes in system of coagulation of blood in view of absence of those complications that is bound to obligatory preventive application anticoagulation preparations at the given group of patients. Prevalence of genotypes of polymorphic molecules of gene FV-1691G>A, geneFII-20210G>A, gene MTHFR-677C>T and them allele variants at patients with a craniocerebralinjury does not differ from healthy faces.
craniocerebral injury.
thrombophilia
genes
polymorphism

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является одной из актуальных проблем современной медицины. ЧМТ относится к числу наиболее распространенных повреждений и составляет около 40% от всех видов травм. Согласно статистике Всемирной организации здравоохранения она имеет тенденцию к нарастанию в среднем на 2% в год. При этом преобладает контингент пострадавших в возрасте от 20 до 50 лет, то есть в период наибольшей трудоспособности [5].

Несмотря на многочисленные исследования в области патогенеза первичных и вторичных повреждений головного мозга, разработку современных методов диагностики, лечения и реабилитации таких больных, летальность в последние годы существенно не изменилась и остается на уровне 35-68%. Наряду с этим у большинства выживших (60-70%) в результате тяжелой черепно-мозговой травмы наблюдается снижение работоспособности или инвалидизация[1, 5, 10, 11, 12].

В настоящее время общепризнанна роль тромбофилий в возникновении осложнений и отягощении течения различных заболеваний. Установлено, что большая часть хирургической патологии протекает на фоне нарушений в системах гемостаза и иммунитета. Состояние последних оказывает значительное влияние на течение заболеваний, эффективность лечения и исход. К сожалению, Забайкальская популяция людей в этом отношении является далеко неизученной. Под руководством Ю.А. Витковского выполнены популяционные исследования частоты протромботических мутаций FV (ЛейденG1691A), мутация в гене протромбина II(G20210A), в гене МТГФР (C677T) среди здоровых и больных сосудистыми заболеваниями головного мозга, инфекционными заболеваниями у детей, опухолях легких в этническом и возрастном аспектах. Однако эти исследования не коснулись больных с ЧМТ. Травма является триггером ферментного каскада системы гемостаза, при этом у пациентов, страдающих тромбофилией, происходит срыв резервных возможностей организма, что неизбежно приводит к грубым патофизиологическим сдвигам [2].

            В связи с вышесказанным, изучение генетического полиморфизма молекул, принимающих участие в механизмах регуляции межклеточных взаимодействий у больных при ЧМТ, а также поиски генетических маркеров развития осложнений представляется перспективным как в теоретическом, так и практическом отношениях.

Цель исследования - изучить частоту встречаемости генотипов полиморфного маркера гена фактораV Лейден (FV Leiden G1691A), гена протромбина (FII G20210A) и гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR C677T) у больных с черепно-мозговой травмой в Забайкальском крае.

Материалы и методы

В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (WorldMedicalAssociationDeclarationofHelsinki 1964, 2011 - поправки) и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утверждёнными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003г. № 266. Проведено обследование 96 пациентов в возрасте от 20 до 40 лет с черепно-мозговой травмой. Полученные данные сравнивались с результатами исследований, проведенных у100 практически здоровых доноров в возрасте от 20 до 40 лет.В работе с ЧМТ использовалась общепринятая классификация. Диагноз выставлялся на основании жалоб, факта травмы, данных клинического и невро­логического обследования и подтвержден нейровизулизационными методами исследования (КТ головного мозга)[5, 12].

Из клинической группы исключались пациенты с какой-либо сопутствующей патологией.

            Материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из периферической венозной крови. Для исследования выбрана точковая мутация FVв позиции 1691(G>A), мутацияFII в позиции 20210 (G>A) и мутация MTHFR в позиции 677 (C>T). Амплификацию фрагмента исследуемыхгенов проводили в термоцикле (модель Ре «Бис» - М111 (ООО «Бис-Н», Новосибирск). В работе использовались стандартные наборы праймеров научно-производственной фирмы «Литех»-«SNP» (Москва). Визуализация продуктов амплификации выполнена с помощью электрофореза в 3% агарозном геле с добавлением бромистого этидия в проходящем в ультрафиолетовом свете [7].

            Полученные данные обработаны с помощью программы «STATISTICA 6.1». Статистический анализ полученных данных проведен с использованием критерия χ2. Различия считались статистически значимыми при p<0,05. Для оценки ассоциаций аллелей с генотипом рассчитывали относительный риск (ОR) [8].

Результаты исследования и их обсуждение

Распределение распространенности генотипов полиморфного локуса G1691А гена FV и локуса G20210AгенаFIIу больных с черепно-мозговой травмойи контрольной группы, соответствовало ожидаемому равновесию Харди-Вайнберга, тогда как распределение полиморфного локуса С677Т гена MTHFR, напротив,не подчинялось данному равновесию, в результате чего, для расчета полученных данных нами использована аддитивная модель - тест Кохрана-Армитаджа для линейных трендов (табл. 3).

Характеристика распределениячастоты аллелей и генотипов гена FV-1691G>Aу пациентов с ЧМТи группой здоровых лиц представлена в таблице 1.

Таблица1

Частота аллельных вариантов гена FV-1691G>Aи егогенотипов среди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (χ2, df=1)

Аллели/Генотипы

Контроль

ЧМТ

χ2

р

OR

n=100

n=96

знач.

95% CI

Аллель G

0,995

0,979

1,95

0,16

0,24

0,03-2,13

Аллель A

0,005

0,021

4,23

0,47-38,23

Генотип GG

0,990

0,969

1,44

0,49

0,31

0,03-3,06

ГенотипGA

0,010

0,021

2,11

0,19-23,62

ГенотипAA

0,000

0,010

3,16

0,13-78,46

               Аномалия Лейден выявлена в 1 (1,04%) случа­е только в клинической группе, а в гетерозиготном состоянии у 2 (2,08%) пациентов и 1 здорового резидента (1%). По данным литературы частота это­го полиморфизма составляет от 3 до 7% в попу­ляции [4, 6,14, 17]. Низкая распространенность мутантной гомозиготы в нашем исследовании объясняется малой выборкой (не популяционной), хотя и позволит в дальнейшем проводить сравнительный частотный анализ.

Распределение распространенностиаллелей и генотипов генаFII-20210G>A среди пациентов с ЧМТ и здоровых лиц представлено в таблице 2.

Таблица 2

Частота аллельных вариантов гена FII-20210G>Aи егогенотипов среди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (χ2, df=1)

Аллели/Генотипы

Контроль

ЧМТ

χ2

р

OR

n=100

n=96

знач.

95% CI

Аллель G

0,99

0,979

0,76

0,38

0,47

0,09-2,62

Аллель A

0,01

0,021

2,11

0,38-11,64

Генотип GG

0,980

0,958

 

0,77

 

0,68

 

0,47

0,08-2,62

ГенотипGA

0,020

0,042

2,13

0,38-11,91

ГенотипAA

0,000

0,000

1,04

0,02-53,01

    Аномалии в гене FII-20210G>A(-20210А/А)нами не выявлено, тогда как носительство генотипа - 20210G/А гена FII зарегистрировано у 2 лиц контрольной группы и 4 пациентов с ЧМТ.Встречаемость генотипа - 20210А/А гена FIIв общей по­пуляции регистрируется в среднем у 2,3% людей [6]. ПоданнымJunkerR. etall. [16], частотаэтоймутацииуевропейцевварьируетот 0,­4%. Отмечено, что эта мутация чаще встреча­ется у европейцев, и редко у азиат [14].

Распределение генотипов генаMTHFR-677C>Tу здоровых лиц и у пациентов с ЧМТ представлено в таблице 3.

Таблица 3

Частота генотипов гена MTHFR-677C>Tсреди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (xi=[0,1,2],df=1)

 

Генотипы

Контроль

ЧМТ

χ2

р

OR

n=100

n=96

знач.

95% CI

Генотип CC

0,450

0,417

0,00

 

0,97

 

0,87

0,5-1,54

ГенотипCT

0,440

0,510

1,33

0,76-2,33

ГенотипTT

0,110

0,073

0,64

0,24-1,72

            Носительство генотипа - 677С/ТгенаMTHFRотмечено у 44 (44%) здоровых лиц и 49 (51%) пациентов с ЧМТ, а частота генотипа - 677Т/Т выявлена у 11 (11%) и 7 (7,3%) человек, соответственно, что согласуется с литературными данными, поскольку генотип-677С/ТгенаMTHFRвстречается в популяциив 50%, а го­мозиготное носительство данной мутации среди белого населения планеты составляет от 5 до 12% [13, 15].

            Попытка установить связь между развитием венозных тромбоэмболических осложнений при ЧМТ и наследственными изменениями в системе свертывания крови не увенчалась успехом ввиду отсутствия таковых осложнений, что, вероятно, связано с обязательным профилактическим применением антикоагулянтных препаратов у данной группы больных [3, 9].

    Таким образом,полученные результаты создают пред­посылки для продолжения исследования генетического полиморфизма молекул принимающих участие в механизмах регуляции межклеточных взаимодействий, что позво­лит более детально и достоверно оценить вклад генетических факторов не только изучаемых ал­лельных вариантов, но и их комбинаций в разви­тие наиболее грозных осложнений при ЧМТ и в дальнейшем поможет разработать программы по их профилактике на основе формирования групп по­вышенного риска.

    Вывод

          Распространенность генотипов полиморфных молекул гена FV-1691G>A, генаFII-20210G>A, гена MTHFR-677C>T и их аллельных вариантов у пациентов с черепно-мозговой травмой не отличается от здоровых лиц.

Рецензенты:

ЦыбиковН.Н., д.м.н.,профессор, заведующий кафедрой патологической физиологииГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Чита;

Намоконов Е.В., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей и специализированной хирургии с курсом топографической анатомии и оперативной хирургии ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Чита.