Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Ступин Ю.В. 2, 1 Доржеев В.В. 2 Мироманов А.М. 2 Витковский Ю.А. 2

---

1 ГУЗ «Городская клиническая больница № 1»

2 ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России

Представлены результаты исследования встречаемости генотипов полиморфного маркера гена фактораV Лейден (FV G1691A), гена протромбинаII (FIIG20210A) и гена метилентетрагидрофолатредуктазы(MTHFRC677T) у больных с черепно-мозговой травмой в Забайкальском крае. В исследование включено 96 пациентов с черепно-мозговой травмой в возрасте от 20 до 40 лет. Контрольную группу составили 100 практически здоровых доноров аналогичного возраста. Материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из периферической венозной крови. В работе использовались стандартные наборы праймеров научно-производственной фирмы «Литех»-«SNP» (Москва). Полученные данные обработаны с помощью программы «Statistica 6.1». Статистический анализ полученных данных проведен с использованием критерия χ2. Зафиксировано отсутствие связи между развитием венозных тромбоэмболических осложнений при черепно-мозговой травме и наследственными изменениями в системе свертывания крови ввиду отсутствия таковых осложнений, что связано с обязательным профилактическим применением антикоагулянтных препаратов у данной группы больных. Распространенность генотипов полиморфных молекул гена FV-1691G>A, генаFII-20210G>A, гена MTHFR-677C>T и их аллельных вариантов у пациентов с черепно-мозговой травмой не отличается от здоровых лиц.

Статья в формате PDF

126 KB

черепно-мозговая травма.

тромбофилия

гены

полиморфизм

1. Агаджанян В.В. Политравма. Неотложная помощь и транспортировка. - Новосибирск: Наука, 2008. – 320 с.

2. Доржеев В.В. Некоторые генетические и иммунологические механизмы развития гемокоагуляционных осложнений у пациентов с политравмой:автореф. дис. … канд. мед.наук. – Чита, 2015. – 22 с.

3. Мироманов А.М. Венозные тромбоэмболические осложнения при патологии опорно-двигательного аппарата: учебное пособие. - Москва, 2014. – 64 с.

4. Мироманова Н.А. Особенности иммунитета и гемостаза у детей при некоторых инфекционных заболеваниях отягощенных и неотягощенных тромбофилией: автореф. дис. … канд. мед.наук. – Чита, 2006. – 20 с.

5. Неврология: национальное руководство / под ред. Е.И. Гусева [и др.]. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 1040 с.

6. Патрушев Л.И. Генетические механизмы наследственных нарушений гемостаза / Биохимия. – 2002. - № 1. – С. 40-56.

7. Полиморфизм гена TNF-α (G-308А) у больных с гнойно-воспалительными осложнениями при переломах длинных костей конечностей в Забайкальском крае [Электронный ресурс] / А.М. Мироманов и [др.] // Забайкальский медицинский вестник. – 2013. – № 1. – С. 41-45. – Режим доступа:http://chitgma.ru/zmv2.

8. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. – М.:МедиаСфера, 2002. – 312 с.

9. Российские клинические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике венозных тромбоэмболических осложнений. – М.: Планида, 2012. – 114 с.

10. Соколов В.А. Множественные и сочетанные травмы. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – 512 с.

11. Терещенко С.Н. Тромбоэмболия легочной артерии: руководство. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 96 с.

12. Травматология: национальное руководство / под ред. Г.П. Котельникова, С.П. Миронова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 1104 с.

13. Шмелева В.М. Гипергомоцистеинемия – значимый фактор риска артериальных и венозных тромбозов / В.М.Шмелева, С.И.Капустин, М.Н.Блинов // Медицинский академический журнал. – 2003. - № 4. – С. 28-34.

14. BauerK.A. Managementofthrombophilia // Thromb. Haemost. – 2003. - № 7. – P. 1429-1433.

15. Driscoll C.M. The methylantetrahydrofolate Reductase Gene C677T mutant and ishemic stoke in Sickle Cell disease C.M. Driscoll, R. Prauner / Thromb. Haemost. – 1999. - № 6. – P. 1780-1781.

16. Junker R. Prothrombin G20210A gene mutation and laurtherprothrombotic risk factors in childhood thrombophilia / R. Junker, H.-G. Koch, K. Auberger/ Arteriosclerosis, Thrombosis and Vask. Biol. – 1999. - № 10. – Р. 2568-2572.

17. Kalafatis M. Factor V (Leiden) and thrombophilia / M. Kalafatis, K.G. Mam // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vask. Biol. – 1997. - № 4. – Р. 620-627.

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является одной из актуальных проблем современной медицины. ЧМТ относится к числу наиболее распространенных повреждений и составляет около 40% от всех видов травм. Согласно статистике Всемирной организации здравоохранения она имеет тенденцию к нарастанию в среднем на 2% в год. При этом преобладает контингент пострадавших в возрасте от 20 до 50 лет, то есть в период наибольшей трудоспособности [5].

Несмотря на многочисленные исследования в области патогенеза первичных и вторичных повреждений головного мозга, разработку современных методов диагностики, лечения и реабилитации таких больных, летальность в последние годы существенно не изменилась и остается на уровне 35-68%. Наряду с этим у большинства выживших (60-70%) в результате тяжелой черепно-мозговой травмы наблюдается снижение работоспособности или инвалидизация[1, 5, 10, 11, 12].

В настоящее время общепризнанна роль тромбофилий в возникновении осложнений и отягощении течения различных заболеваний. Установлено, что большая часть хирургической патологии протекает на фоне нарушений в системах гемостаза и иммунитета. Состояние последних оказывает значительное влияние на течение заболеваний, эффективность лечения и исход. К сожалению, Забайкальская популяция людей в этом отношении является далеко неизученной. Под руководством Ю.А. Витковского выполнены популяционные исследования частоты протромботических мутаций FV (ЛейденG1691A), мутация в гене протромбина II(G20210A), в гене МТГФР (C677T) среди здоровых и больных сосудистыми заболеваниями головного мозга, инфекционными заболеваниями у детей, опухолях легких в этническом и возрастном аспектах. Однако эти исследования не коснулись больных с ЧМТ. Травма является триггером ферментного каскада системы гемостаза, при этом у пациентов, страдающих тромбофилией, происходит срыв резервных возможностей организма, что неизбежно приводит к грубым патофизиологическим сдвигам [2].

            В связи с вышесказанным, изучение генетического полиморфизма молекул, принимающих участие в механизмах регуляции межклеточных взаимодействий у больных при ЧМТ, а также поиски генетических маркеров развития осложнений представляется перспективным как в теоретическом, так и практическом отношениях.

Цель исследования - изучить частоту встречаемости генотипов полиморфного маркера гена фактораV Лейден (FV Leiden G1691A), гена протромбина (FII G20210A) и гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR C677T) у больных с черепно-мозговой травмой в Забайкальском крае.

Материалы и методы

В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (WorldMedicalAssociationDeclarationofHelsinki 1964, 2011 - поправки) и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утверждёнными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003г. № 266. Проведено обследование 96 пациентов в возрасте от 20 до 40 лет с черепно-мозговой травмой. Полученные данные сравнивались с результатами исследований, проведенных у100 практически здоровых доноров в возрасте от 20 до 40 лет.В работе с ЧМТ использовалась общепринятая классификация. Диагноз выставлялся на основании жалоб, факта травмы, данных клинического и невро­логического обследования и подтвержден нейровизулизационными методами исследования (КТ головного мозга)[5, 12].

Из клинической группы исключались пациенты с какой-либо сопутствующей патологией.

            Материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из периферической венозной крови. Для исследования выбрана точковая мутация FVв позиции 1691(G>A), мутацияFII в позиции 20210 (G>A) и мутация MTHFR в позиции 677 (C>T). Амплификацию фрагмента исследуемыхгенов проводили в термоцикле (модель Ре «Бис» - М111 (ООО «Бис-Н», Новосибирск). В работе использовались стандартные наборы праймеров научно-производственной фирмы «Литех»-«SNP» (Москва). Визуализация продуктов амплификации выполнена с помощью электрофореза в 3% агарозном геле с добавлением бромистого этидия в проходящем в ультрафиолетовом свете [7].

            Полученные данные обработаны с помощью программы «STATISTICA 6.1». Статистический анализ полученных данных проведен с использованием критерия χ2. Различия считались статистически значимыми при p<0,05. Для оценки ассоциаций аллелей с генотипом рассчитывали относительный риск (ОR) [8].

Результаты исследования и их обсуждение

Распределение распространенности генотипов полиморфного локуса G1691А гена FV и локуса G20210AгенаFIIу больных с черепно-мозговой травмойи контрольной группы, соответствовало ожидаемому равновесию Харди-Вайнберга, тогда как распределение полиморфного локуса С677Т гена MTHFR, напротив,не подчинялось данному равновесию, в результате чего, для расчета полученных данных нами использована аддитивная модель - тест Кохрана-Армитаджа для линейных трендов (табл. 3).

Характеристика распределениячастоты аллелей и генотипов гена FV-1691G>Aу пациентов с ЧМТи группой здоровых лиц представлена в таблице 1.

Таблица1

Частота аллельных вариантов гена FV-1691G>Aи егогенотипов среди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (χ2, df=1)

               Аномалия Лейден выявлена в 1 (1,04%) случа­е только в клинической группе, а в гетерозиготном состоянии у 2 (2,08%) пациентов и 1 здорового резидента (1%). По данным литературы частота это­го полиморфизма составляет от 3 до 7% в попу­ляции [4, 6,14, 17]. Низкая распространенность мутантной гомозиготы в нашем исследовании объясняется малой выборкой (не популяционной), хотя и позволит в дальнейшем проводить сравнительный частотный анализ.

Распределение распространенностиаллелей и генотипов генаFII-20210G>A среди пациентов с ЧМТ и здоровых лиц представлено в таблице 2.

Таблица 2

Частота аллельных вариантов гена FII-20210G>Aи егогенотипов среди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (χ2, df=1)

    Аномалии в гене FII-20210G>A(-20210А/А)нами не выявлено, тогда как носительство генотипа - 20210G/А гена FII зарегистрировано у 2 лиц контрольной группы и 4 пациентов с ЧМТ.Встречаемость генотипа - 20210А/А гена FIIв общей по­пуляции регистрируется в среднем у 2,3% людей [6]. ПоданнымJunkerR. etall. [16], частотаэтоймутацииуевропейцевварьируетот 0,­4%. Отмечено, что эта мутация чаще встреча­ется у европейцев, и редко у азиат [14].

Распределение генотипов генаMTHFR-677C>Tу здоровых лиц и у пациентов с ЧМТ представлено в таблице 3.

Таблица 3

Частота генотипов гена MTHFR-677C>Tсреди здоровых резидентов и пациентов с черепно-мозговой травмой (xi=[0,1,2],df=1)

            Носительство генотипа - 677С/ТгенаMTHFRотмечено у 44 (44%) здоровых лиц и 49 (51%) пациентов с ЧМТ, а частота генотипа - 677Т/Т выявлена у 11 (11%) и 7 (7,3%) человек, соответственно, что согласуется с литературными данными, поскольку генотип-677С/ТгенаMTHFRвстречается в популяциив 50%, а го­мозиготное носительство данной мутации среди белого населения планеты составляет от 5 до 12% [13, 15].

            Попытка установить связь между развитием венозных тромбоэмболических осложнений при ЧМТ и наследственными изменениями в системе свертывания крови не увенчалась успехом ввиду отсутствия таковых осложнений, что, вероятно, связано с обязательным профилактическим применением антикоагулянтных препаратов у данной группы больных [3, 9].

    Таким образом,полученные результаты создают пред­посылки для продолжения исследования генетического полиморфизма молекул принимающих участие в механизмах регуляции межклеточных взаимодействий, что позво­лит более детально и достоверно оценить вклад генетических факторов не только изучаемых ал­лельных вариантов, но и их комбинаций в разви­тие наиболее грозных осложнений при ЧМТ и в дальнейшем поможет разработать программы по их профилактике на основе формирования групп по­вышенного риска.

    Вывод

          Распространенность генотипов полиморфных молекул гена FV-1691G>A, генаFII-20210G>A, гена MTHFR-677C>T и их аллельных вариантов у пациентов с черепно-мозговой травмой не отличается от здоровых лиц.

ЦыбиковН.Н., д.м.н.,профессор, заведующий кафедрой патологической физиологииГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Чита;

Намоконов Е.В., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей и специализированной хирургии с курсом топографической анатомии и оперативной хирургии ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Чита.

Библиографическая ссылка