Введение. Заболеваемость амилоидозом составляет 8 случаев на миллион населения в год (Comenzo R.L., 2007). Чаще всего поражаются сердце и почки, однако у многих пациентов выявляются нарушения функций двух и более органов, так как в большинстве своем амилоидоз носит системный характер поражения органов мишеней, и без лечения большинство пациентов погибают в течение года.
Известны несколько способов лечения этой патологии, таких как метод аутологичной трансплантации, применяемый в гематологии, использование которого в свою очередь ограничено плохим соматическим статусом большинства пациентов, и даже при соблюдении правил отбора больных для проведения вышепредложенного метода, смертность достигает 20% (Sanchorawala et.al., 2004). Использование таких препаратов, как талидомид, леналидомид и бортезолиб, в лечении амилоидоза не привело к значительному улучшению результатов терапии (Dispenzieri et. al., 2003, 2007; Sanchorawala et. al., 2007; Wechalekar et al., 2008). Это объясняется в первую очередь их высокой токсичностью, а снижение дозы вело к снижению эффективности. Известны также исследования с применением мелаксена [2; 3], минеральной воды и янтарной кислоты [1; 4].
Таким образом, несмотря на многообразие применяемых препаратов и методов, используемых для лечения амилоидоза, разработка наиболее эффективных и экономически выгодных методов лечения все еще остается одной из актуальнейших задач в медицине.
Цель исследования
Изучение влияния одномоментного введения смеси милдроната и ацизола на морфо-функциональные показатели почек у сирийских золотистых хомяков с моделью экспериментальной амилоидной нефропатии.
Материалы и методы исследования
Работа проводилась на золотистых сирийских хомяках массой 100-120 г. Для опыта были выбраны половозрелые самцы c экспериментальным амилоидозом.
Сравнительный анализ исследованных показателей был проведен в 2 группах животных:
- животные с экспериментальной амилоидной нефропатией,
- животные с моделью экспериментальной амилоидной нефропатии, подвергнутые введению ацизола внутрижелудочно в дозе 30 мг/кг вместе с введением милдроната подкожно из расчета 10%-5 мг/кг массы тела животного.
Животные в течение эксперимента находились на стандартном пищевом рационе и имели свободный доступ к воде и пище в течение суток. Световой режим - естественный.
Модель амилоидоза воспроизводилась однократным введением нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда из расчета 0,2 мл в 5 точек инъекций. Ацизол внутрижелудочно и милдронат подкожно вводили через 2 месяца создания амилоидоза. По истечении 30 и 60 дней экспериментальной терапии исследовались функциональные и морфологические характеристики почек. Для изучения функций почек в условиях спонтанного диуреза животные на 30 и 60-й день эксперимента помещались в обменные клетки, где в течение 6 часов у них собиралась моча. Определялись:
- объем диуреза;
- скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина, и рассчитывалась канальцевая реабсорбция воды;
- содержание калия и натрия, методом пламенной фотометрии, с помощью пламенного фотометра ФПА-2;
- концентрация кальция на спектрометре СФ-26, с использованием набора «Кальций» ООО «Агат-Мед» (г. Москва, Россия).
- концентрация общего белка определялась спектрофотометрически (СФ-26), с помощью реактива Фоллина.
Показатели электролито- и водовыделительной функций почек. Таблица 1.
|
|
Стат. показатель |
Диурез, мл/час/ 100 |
СКФ, м/час 100 |
Реаб- Сорбция, % |
Ек |
ENa |
ЕСа |
Фз Ca, мкмоль /час/ 100 |
Фз Na, мкмоль /час/ 100 |
Фз K, мкмоль /час/ 100 |
R Ca |
R Na |
Белок, мг/мл |
|
Фон |
М ± m |
0,15
±0,005 |
21,02
±0,739 |
99,30
±0,024 |
6,37
±0,194 |
11,18
±0,585 |
0,49
±0,053 |
32,10
±1,251 |
2705,32
±99,12 |
91,19
±4,24 |
99,49
±0,140 |
99,58
±0,018 |
0,88
±0,02 |
|
Амилоидная |
М ± m |
0,11
± 0,004 |
11,66
± 1,400 |
99,05
± 0,030 |
7,33
± 0,324 |
5,85
± 0,417 |
0,73
± 0,078 |
14,15
± 0,841 |
1548,73
± 62,89 |
65,62
± 4,02 |
94,84
± 0,477 |
99,62
± 0,030 |
3,20
± 0,07
|
|
|
р |
*) |
*) |
*) |
*) |
*) |
*) |
*) |
*) |
*) |
*) |
|
*) |
|
30 дней лечения милдронат и ацизолом |
М ± m |
0,14
± 0,006 |
24,28
± 1,323 |
99,42
± 0,011 |
9,74
± 0,550 |
8,43
± 0,639 |
0,83
±0,094 |
39,83
± 2,119 |
3142,60
±173,211 |
122,55
± 7,404 |
97,93
±0,230 |
99,73
± 0,230 |
2,62
± 0,107 |
|
|
р |
|
*) ; **) |
*) ; **) |
*) ; **) |
*) ; **) |
*) ; **) |
|
*) ; **) |
*) ; **) |
*) ; **) |
|
*) ; **) |
|
60 дней лечения милдронат и ацизолом |
М ± m |
0,18
± 0,007 |
33,27
± 1,701 |
99,47
± 0,012 |
7,01
±0,471 |
15,51
± 0,773 |
0,48
±0,058 |
70,30
± 4,146 |
4147,53
±197,404 |
123,55
± 3,320 |
99,30 . ±0,091 |
99,62
± 0,011 |
1,61
± 0,071 |
|
|
р |
*) ; **) |
*) ; **) |
*) ; **) |
|
*) ; **) |
|
*);**) |
*) ; **) |
*) ; **) |
|
|
*) ; **) |
*) р ≤0,05 достоверное увеличение относительно фона;
**) р ≤0,05 достоверное увеличение относительно амилоидных животных.
Концентрация электролитов в крови. Таблица 2.
|
|
Стат. показатель |
Концентрация Ca в плазме крови |
Концентрация Na в плазме крови |
Концентрация K в плазме крови |
|
Фон |
М ± m |
2,29 ± 0,019 |
135,45 ± 0,450 |
4,55 ± 0,121 |
|
Амилоидная группа |
М ± m |
1,87 ± 0,080 |
139,76 ± 1,109 |
5,88 ± 0,161 |
|
р |
*) |
*) |
*) |
|
|
30 дней лечения |
М ± m |
2,55 ± 0,105 |
136,22 ± 1,516 |
5,32 ± 0,159 |
|
р |
*) ; **) |
|
*) ; **) |
|
|
60 дней лечения |
М ± m |
3,26 ± 0,116 |
131,51 ± 1,587 |
5,95 ± 0,124 |
|
р |
*) ; **) |
|
*) ; **) |
По истечении времени эксперимента (60 дней) животных забивали с использованием тиопентала натрия с целью исследования гистологического строения тканей. Для морфологических исследований образцы тканей почек фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, после чего подвергали заливке в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 7-8 микрон. Срезы окрашивались гематоксилином, эозином, конго красным. Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением 80x200x800 (рис. 1, 2).
Рис. 1. Морфологические изменения в почках, через 60 дней после однократного введения равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда. Окраска конго красным, увеличение 80х200х400.
Конгофилия сосудистых клубочков (а) и базальных мембран канальцев (б).
Рис. 2. Влияние смеси милдронат и ацизола на морфологические изменения при амилоидозе почек на фоне однократного введения почек равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы с полным адъювантом Фрейнда. Окраска конго красным, увеличение 80х200х400. Снижение количества конгофильного белка в сосудистых клубочках (а) и базальных мембранах канальцев (б).
Результаты и их обсуждение. Анализ результатов исследования у золотистых сирийских хомяков с экспериментальным амилоидозом почек, моделированным однократным введением равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда, с последующим внутрижелудочным введеним ацизола и подкожным введением милдроната, показал достоверное корригирующее действие препаратов на показатели процессов мочеобразования, водо- и электровыделительную функцию почек. Так, у животных с моделью экспериментального амилоидоза относительно интактных животных отмечались: снижение объема диуреза, обусловленное уменьшением скорости клубочковой фильтрации, несмотря на снижение величины канальцевой реабсорбции; выраженная протеинурия; а также достоверное повышение калий- и кальцийуреза, что было обусловлено снижением реабсорбции этих катионов, несмотря на уменьшение их фильтрационного заряда. Отмечено значительное снижение экскреции натрия, и нарастание протеинурии, более чем в 2 раза. Как указано ранее, вышеперечисленные показатели свидетельствуют о развитии нефропатического типа экспериментального амилоидоза у животных. В качестве корригирующих средств нами были выбраны милдронат 10%-5мг/кг массы тела животного, вводимый подкожно, и ацизол 30 мг/кг массы животного, вводимый интрагастрально.
При этом на 30-й день введения вышеуказанных препаратов имело место увеличение объема диуреза относительно показателя амилоидных животных, обусловленное ускорением клубочковой фильтрации с одновременным повышением величины канальцевой реабсорбции, повышением кальций- и калийуреза, значительным нарастанием экскреции натрия, а также наблюдалось значительное снижение потери белка. В конце второго месяца, наблюдалось более выраженное восстановление объема диуреза, обусловленное повышением скорости клубочковой фильтрации более чем в 2,5 раза, несмотря на нарастание величины канальцевой реабсорбции. Снижение потерь белка было почти в 2 раза относительно показателя амилоидных животных. Имело место также достоверное повышение натрийуреза, снижение калий- и кальцийуреза, что было обусловлено снижением реабсорбции этих катионов, несмотря на уменьшение фильтрационного заряда калия, и увеличением фильтрационного заряда натрия и кальция. Перечисленные показатели приближались к показателям интактных животных. Таким образом, полученные данные свидетельствуют об эффективном корригирующем влиянии смеси милдроната и ацизола на показатели основных процессов мочеобразования и экскрецию электролитов у животных с имеющейся моделью амилоидной нефропатии.
При гистологическом исследовании почек животных группы № 2 была выявлена активная регенерация капилляров и эндотелия клубочков почек. Количество амилоида в клубочках и в базальных мембранах канальцев было существенно меньше.
В миокарде под влиянием милдроната и ацизола выявлены положительные гистоструктурные характеристики в виде уменьшения отложения амилоида в кардиомиоцитах, стенках кровеносных и лимфатических сосудов микроциркуляторного русла. Выявлено снижение дисциркуляторных процессов в виде уменьшения гиперемии, плазматического пропитывания, отека пространств межуточного вещества.
В печени - уменьшение конгофилии стенок центральных вен печеночных долек, уменьшение очагов паренхиматозной и жировой дистрофии гепатоцитов. Частичное восстановление органоспецифической цитоархитектоники в форме пролиферации гепатоцитов с крупными гиперхроматическими ядрами. Имеются участки активного формирования характерных печеночных балок с регенерацией внутридольковых печеночных протоков.
Таким образом, результаты проведенного эксперимента позволяют сделать вывод, что введение 10%-ного милдроната в дозе 5 мг/кг массы тела животного внутрижелудочно и ацизола из расчета 30 мг/кг подкожно, при амилоидозе, сформировавшемся спустя 2 месяца от момента однократного введения равнодолевой смеси нативной овечьей плазмы и полного адъюванта Фрейнда из расчета 0,2 мл в 5 точек инъекций, является эффективным способом коррекции гистоструктурных и функциональных показателей почек.
Рецензенты:
Джиоев И.Г., д.м.н., профессор, заведующий Центральной научно-исследовательской лабораторией ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Владикавказ.
Каде А.Х., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей и клинической патофизиологии Кубанского государственного медицинского университета, лауреат премии Правительства Российской Федерации, г. Краснодар.