Введение
Одним из наиболее распространенных классов биологически активных веществ в растительном сырье являются гидроксикоричные кислоты [5]. Этот класс соединений представлен сложными эфирами кофейной кислоты с хинной, шикимовой и винной кислотами, гликозидами, а также комплексами с целлюлозой, лигнином и белками [6]. Доказано, что гидроксикоричные кислоты обладают выраженной антиоксидантной и антирадикальной активностью, проявляют противовоспалительные, желчегонные свойства. Кофейная, хлорогеновая, феруловая и кумаровая кислоты оказывают гипоазотемический эффект, усиливают функцию почек, стимулируют антитоксическую функцию печени [1; 2]. Согласно литературным данным, цикориевая кислота обладает бактерицидными и иммуностимулирующими свойствами [2-4].
В совокупности все вышесказанное обуславливает перспективность создания новых фитопрепаратов на основе гидроксикоричных кислот и, как следствие, необходимость совершенствования существующих и разработки новых методов анализа и выделения из лекарственного растительного сырья данной группы биологически активных соединений.
Целью данного исследования явилась разработка методики количественного определения гидроксикоричных кислот в траве девясила иволистного (Inula salicina L.).
Материалы и методы
Объектом исследования служила трава девясила иволистного, заготовленная на территории Курской области в 2012 г. в период массового цветения растений.
Качественный анализ гидроксикоричных кислот в траве девясила иволистного проводили методом хроматографии на бумаге в системе растворителей: 2%-ная и 5%-ная кислота уксусная с последующей обработкой специфическими реактивами: парами аммиака, 1%-ным спиртовым раствором железа окисного хлорида. Определение количественного содержания суммы гидроксикоричных кислот проводили модифицированным методом прямой спектрофотометрии [3; 4; 7].
Изучение качественного состава фенольных соединений, в том числе и гидроксикоричных кислот, проводили также на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы GILSTON, модель 305, Франция, инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 USA, с последующей компьютерной обработкой.
Результаты и их обсуждение
В результате хроматографирования на бумаге в этилацетатной фракции спиртоводного извлечения из травы девясила иволистного установили наличие 3 веществ в виде пятен с голубой флюоресценцией в УФ-свете. С достоверными образцами идентифицировали кислоты галловую, кофейную и хлорогеновую.
При проведении ВЭЖХ в траве были идентифицированы галловая, цикоревая, хлорогеновая, кофейная, коричная и розмариновая кислоты.
Для количественного определения суммы гидроксикоричных кислот мы применили метод прямой спектрофотометрии спиртового извлечения. Расчет концентраций проводили с использованием удельного показателя поглощения хлорогеновой кислоты как одного из преобладающих компонентов в траве прозанника крапчатого.
Данная методика была адаптирована для травы девясила иволистного посредством выявления оптимальных условий анализа: измельченности сырья, типа растворителя, времени экстрагирования (таблица 1).
Таблица 1.
Влияние условий экстракции на содержание суммы гидроксикоричных кислот в траве девясила иволистного
|
Условия экстракции |
Содержание суммы гидроксикоричных кислот, % |
|
Степень измельченности сырья, мм |
|
|
0,5 |
6,18±0,13 |
|
1,0 |
6,03±0,27 |
|
2,0 |
5,74±0,17 |
|
3,0 |
5,12±0,14 |
|
Экстрагент: спирт этиловый, % |
|
|
Вода дистиллированная |
6,18±0,08 |
|
30 |
7,36±0,15 |
|
50 |
6,29±0,09 |
|
70 |
6,13±0,26 |
|
96 |
4,87±0,18 |
|
Время экстракции, мин |
|
|
30 |
7,21±0,26 |
|
45 |
7,36±0,15 |
|
60 |
6,41±0,62 |
|
90 |
6,35±0,13 |
Было установлено, что наиболее полное извлечение гидроксикоричных кислот из травы девясила иволистного достигается при использовании степени измельченности сырья 0,5 мм, спирта этилового 30%-ного; экстракцию вели до истощения сырья, которое наступает через 45 минут.
На основании проведенных исследований разработана методика количественного определения суммы гидроксикоричных кислот в траве девясила иволистного.
Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в траве девясила иволистного: аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,5 мм. Около 0,5 г сырья (точная навеска) заливали 50 мл спирта этилового 30%-ного. Колбу с содержимым присоединяли к обратному холодильнику и экстрагировали на кипящей водяной бане в течение 45 минут. После охлаждения извлечение фильтровали в мерную колбу на 50 мл, при необходимости доводили объем спиртом этиловым 30%-ным до метки. 1 мл полученного извлечения переносили в мерную колбу на 50 мл и доводили объем спиртом этиловым 30%-ным до метки. Измеряли оптическую плотность приготовленного раствора при длине волны 325 нм.
В качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый 30%-ный.
Содержание суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту вычисляли по следующей формуле с использованием удельного показателя поглощения хлорогеновой кислоты:
D – оптическая плотность исследуемого раствора;
A – объем мерной колбы, используемой для сбора извлечения, мл;
B – объем мерной
колбы, используемой для разведения и анализа, мл;
– удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при l=325 нм, равный 504,425;
a – навеска сырья, г;
b – объем извлечения, взятый для разведения и анализа, мл.
Содержание суммы гидроксикоричных кислот в сырье девясила иволистного составило 7,36±0,15%.
Повторяемость методики определяли на одном образце в 5 повторностях. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не превышает 5%, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости [8].
Выводы
С помощью бумажной хроматографии в траве девясила иволистного (Inula salicina L.) установлено присутствие гидроксикоричных кислот. Методом ВЭЖХ идентифицировали галловую, цикоревую, хлорогеновую, кофейную, коричную и розмариновую кислоты.
Методом прямой спектрофотометрии было установлено количественное содержание суммы гидроксикоричных кислот в сырье девясила иволистного, которое в пересчете на кислоту хлорогеновую составило 7,36±0,15%.
Рецензенты:Сипливая Л.Е., д.б.н., профессор, заведующая кафедрой фармацевтической, токсикологической и аналитической химии ГБОУ ВПО «КГМУ», г. Курск.
Раздорская И.М., д.фарм.н., профессор, заведующая кафедрой управления и экономики фармации ГБОУ ВПО «КГМУ», г. Курск.