Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

В результате работы сердца кровь, состоящая из форменных элементов и плазмы, непрерывно перемещается по сосудам животного, обеспечивая газообмен и доставку к тканям питательных и биологически активных веществ, а также удаление из них токсических соединений и шлаков [3; 8]. Успешность гемоциркуляции, особенно в сосудах наименьшего калибра, во многом зависит от агрегации форменных элементов крови, выраженность которой находится под постоянным контролем со стороны сосудистой стенки [8]. Замечено, что избыточная агрегация эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов может нарушать метаболические процессы и тормозить развитие животных [9; 10]. В этой связи становится актуальной оценка выраженности агрегации форменных элементов крови и сосудистого контроля над нею у телят в самом начале онтогенеза - в фазу новорожденности. В этом нуждается не только фундаментальная наука, но и практика, т.к. нарушения агрегационно-дезагрегационных взаимодействий в крови у новорожденных телят играют существенную роль в патогенезе многих заболеваний [5]. Для ветеринарии необходимы точно выверенные нормативные показатели агрегации основных форменных элементов крови и антиагрегационного контроля сосудов над ними для оценки степени его динамики у новорожденных телят на фоне применения в случае необходимости различных вариантов коррекции их состояния [6].

В работе поставлена цель - установить выраженность агрегационных свойств форменных элементов крови и антиагрегационного контроля сосудов над ними у телят в течение фазы новорожденности.

Материалы и методы

Исследование выполнено на 32 телятах черно-пестрой породы, взятых в исследование на 1-2 сутки жизни. Обследование проводилось в течение фазы новорожденности пятикратно - на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни.

Выраженность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме оценивалась по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором «Агат-Мед» и ацилгидроперекисей (АГП) [4]. Антиокислительный потенциал жидкой части крови определялся по ее антиокислительной активности (АОА) [3].

Сосудистый контроль над агрегацией форменных элементов крови определяли по ее ослаблению в пробе с временной венозной окклюзией [1].

Выраженность агрегации эритроцитов до и после временной ишемии стенки сосуда определяли с помощью светового микроскопа в камере Горяева, регистрируя количество агрегатов эритроцитов, число агрегированных и неагрегированных эритроцитов [9]. У всех телят путем деления суммы всех эритроцитов в агрегатах на величину этой суммы на фоне временной венозной окклюзии [1] рассчитывался индекс контроля сосудов над суммой эритроцитов в агрегате (ИКССЭА), в результате деления количества агрегатов без временной венозной окклюзии на их количество на фоне временной венозной окклюзии определяли индекс контроля сосудов над количеством эритроцитарных агрегатов (ИКСКЭА) и в ходе деления количества свободных эритроцитов на фоне временной венозной окклюзии на количество свободных эритроцитов без нее высчитывалась величина индекса контроля сосудов над количеством свободных эритроцитов (ИКСКСЭ).

Агрегацию тромбоцитов (АТ) оценивали с помощью визуального микрометода оценки АТ [10] до и после венозной окклюзии с применением АДФ (0,5x10^{-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл) и адреналина (5,0x10-6 М) в богатой тромбоцитами плазме со стандартизированным количеством тромбоцитов 200x109} тр. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) выявляли при делении времени развития АТ после венозной окклюзии на время без нее [1].

Дезагрегационное влияние сосудов на нейтрофилы оценивалось по способности этих клеток к агрегации на фотоэлектроколориметре в плазме, полученной после наложения манжетки и без нее [11]. В качестве индукторов применены лектин зародыша пшеницы в дозе 32 мкг/мл, конканавалин А - 32 мкг/мл и фитогемагглютинин - 32 мкг/мл. У всех телят рассчитывался индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов (ИТССАН) путем деления величины агрегации нейтрофилов в плазме, полученной без манжетки, на ее величину в плазме, взятой с наложением манжетки. Статистическая обработка полученных результатов велась t-критерием Стьюдента.

Результаты исследований

У телят отмечена невысокая активность ПОЛ плазмы, имеющая тенденцию к снижению в течение срока наблюдения - содержание в ней АГП уменьшилось с 1,53±0,26 Д₂₃₃/1 мл до 1,42±0,31 Д₂₃₃/1 мл, ТБК-активных продуктов с 3,62±0,12 мкмоль/л до 3,48±0,24 мкмоль/л. Это сопровождалось тенденцией к росту АОА плазмы с 32,0±0,42% на 1-2 сутки до 33,4±0,28% на 9-10 сутки.

В течение фазы новорожденности у телят отмечена тенденция к повышению спонтанной агрегации эритроцитов, о чем судили по наклонности к увеличению суммарного количества эритроцитов в агрегате (на 4,7%), нарастанию количества самих агрегатов (на 2,5%) и понижению числа свободно лежащих красных кровяных телец (на 2,4%).

На фоне временной венозной окклюзии у телят в течение новорожденности суммарное количество эритроцитов в агрегатах за первые 10 суток жизни сократилось на 3,1%, число этих агрегатов уменьшилось на 2,8%, что сопровождалось увеличением числа свободных эритроцитов на 1,7%, обеспечив тенденцию к повышению ИКССЭА, ИКСКЭА и ИКСКСЭ (табл. 1).

У всех телят в течение новорожденности отмечена тенденция к усилению агрегации тромбоцитов. Так, у них на 1-2 сутки жизни время развития АТ под влиянием коллагена составляло 31,6±0,19 с, находясь в течение новорожденности на достаточно низком уровне. Аналогичное состояние АТ у здоровых новорожденных животных отмечено для АДФ (в среднем 40,3±0,15 с) и ристомицина (в среднем 48,1±0,19 с). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, также не испытывая достоверной динамики в течение наблюдения и составляя в среднем 53,2±0,16 с и 98,9±0,32 с, соответственно (табл. 1).

В пробе с временной венозной окклюзией найдена тенденция к замедлению АТ. Это указывало у наблюдаемых телят на наклонность к усилению у них контроля стенки сосуда над тромбоцитарной агрегацией, что подтверждалось найденной тенденцией к увеличению ИААСС, достигших у телят к 9-10 суткам жизни: для адреналина 1,64±0,008, для АДФ 1,65±0,004, для коллагена 1,62±0,008 , для тромбина 1,53±0,006, для ристомицина 1,52±0,004 (табл. 1).

В течение новорожденности у телят также отмечена тенденция к усилению агрегации нейтрофилов. Так, агрегация нейтрофилов у них за время наблюдения возросла с лектином на 2,7%, с конканавалином А на 6,9%, с фитогемагглютинином на 3,7%.

В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация также имела наклонность к усилению в отношении всех испытанных индукторов, что обусловило тенденцию к повышению ИТССАН для лектина на 5,0%, для конканавалина А на 3,3%, для фитогемагглютинина на 3,4% (табл. 1).

Таблица 1. Агрегация форменных элементов крови и антиагрегационный контроль над нею сосудов у новорожденных телят

Обсуждение

Развитие животноводства требует серьезного подхода к обеспечению сохранности молодняка [2]. В этой связи большое значение придается исследованиям по физиологии крови у телят в течение новорожденности, и в т.ч. агрегации ее форменных элементов крови, во многом обеспечивающей ее реологию [5; 8]. Стабильно высокая АОА плазмы обеспечивает невыраженную в ней активность ПОЛ [3; 9]. Выявленная у новорожденных телят низкая интенсивность свободнорадикальных процессов в плазме способствует незначительности перестроек в мембранах эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов, которые в данных условиях проявляют невысокую агрегабельность при выраженной функциональной активности эндотелиоцитов.

Очевидно, нормальная агрегация эритроцитов у телят in vivo во многом обеспечена высокой дезагрегирующей способностью сосудистой стенки при одновременно оптимальной электроотрицательности поверхности эритроцитов за счет нарастания количества на их мембране отрицательно заряженных протеинов [9]. Эффективный контроль над генерацией активных форм кислорода обеспечивает минимизацию оксидативных повреждений данных белков мембраны и глобулярных протеинов плазмы, способных связывать эритроциты между собой в уже образовавшихся агрегатах [9; 10]. Высокий контроль сосудистой стенки над агрегацией эритроцитов, очевидно, имеет в своей основе повышенную концентрацию в крови новорожденных телят простациклина и NO, поддерживающих в красных кровяных тельцах оптимум активности аденилатциклазы и фосфодиэстеразы, обеспечивающих физиологическое соотношение в их цитоплазме количества циклического АМФ и Са²⁺.

Авторы считают, что фаза новорожденности характеризуется сложными обменными сдвигами, неизбежно влияющими на поверхностные свойства эритроцитов. Можно думать, что регистрирующееся у новорожденных телят в кровотоке низкое содержание измененных эритроцитов при высоком количестве свободных эритроцитов [9] во многом обеспечивает должные реологические свойства крови, достаточную перфузию внутренних органов и способствует оптимальному онтогенезу.

В течение всей новорожденности у телят отмечена тенденция к усилению агрегационной активности тромбоцитов, достоверно понижающейся в пробе с временной венозной окклюзией. При этом у новорожденных телят исходная активность тромбоцитов достаточно низка [5], что, очевидно, связано с невыраженностью стимулирующих экзогенных влияний на них при низкой концентрации в крови фактора Виллебранда - кофактора адгезии тромбоцитов и числа рецепторов к нему - (GPIв) на поверхности кровяных пластинок. Это подтверждала у телят невысокая АТ в ответ на ристомицин.

Оптимальная АТ с сильными и слабыми агонистами агрегации обуславливалась невысокой активностью фосфолипаз А₂ и С, стимулирующих тромбоксановый и фосфоинозитольный путь активации тромбоцитов.

Выраженное торможение АТ и тенденция к повышению чувствительности тромбоцитов к дезагрегирующим воздействиям со стороны сосудистой стенки у телят в течение первых 10 суток жизни имеет в своей основе оптимальность выработки в эндотелии простациклина и NО во многом вследствие невыраженности ПОЛ плазмы.

Нормальная агрегация нейтрофилов, полученная у наблюдаемых телят, видимо, связана с высокими антиагрегационными возможностями сосудов, сочетающимися с оптимумом состава гликопротеиновых рецепторов лейкоцитов и их невысокой чувствительностью к лектинам, использованным в качестве индукторов. Слабая тенденция к росту лектин- и конканавалин А-индуцированной агрегации нейтрофилов у новорожденных телят обеспечивалась тенденцией к усилению экспрессии на их поверхности рецепторов адгезии и увеличением в их составе участков, содержащих N-ацетил-D-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту и маннозу. Тенденция к росту индуцированной фитогемагглютинином агрегации обеспечивалось склонностью к нарастанию в их рецепторах участков гликопротеинов, содержащих bD-галактозу при эффективном сдерживании агрегации высокой выработкой в сосудах животных простациклина и NO.

Оптимум агрегационных свойств эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов у новорожденных телят обеспечивает необходимый для данного этапа онтогенеза уровень жидкостных свойств крови и требующуюся перфузию внутренних органов, что в значительной степени поддерживает нужный для роста и развития животного уровень метаболизма в тканях. Несомненно, что выявленные особенности активности агрегационных свойств форменных элементов крови и сосудистого контроля над нею во многом обеспечивают переход организма к внеутробному существованию и являются важным элементом общего адаптационного процесса организма в раннем онтогенезе.

Заключение. В первые 10 суток жизни у телят выявлена тенденция к усилению агрегации форменных элементов крови. Для телят в течение новорожденности оказалось характерна наклонность к усилению дезагрегирующего контроля со стороны сосудистой стенки над агрегационными свойствами эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов.

Рецензенты:

Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор, профессор кафедры биохимии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.

Грушкин А.Г., д.б.н., профессор кафедры ветеринарии и физиологии животных Калужского филиала РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, г. Калуга.