Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

АГРЕГАЦИОННЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, ТРОМБОЦИТОВ И ЛЕЙКОЦИТОВ И СОСУДИСТЫЙ КОНТРОЛЬ НАД НИМИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ

Завалишина С.Ю. 1 Белова Т.А. 1 Медведев И.Н. 1
1 Курский институт социального образования (филиал) Российского государственного социального университета
Успешность гемоциркуляции, особенно в сосудах наименьшего калибра, во многом зависит от агрегации форменных элементов крови, выраженность которой находится под постоянным контролем со стороны сосудистой стенки. Цель – установить выраженность агрегационных свойств форменных элементов крови и антиагрегационного контроля сосудов над ними у телят в течение фазы новорожденности. Исследование выполнено на 32 новорожденных телятах черно-пестрой породы, обследованных за фазу новорожденности 5 раз. У новорожденных телят отмечена тенденция к повышению агрегации форменных элементов крови. Это сопровождалось у них тенденцией к усилению антиагрегационного контроля сосудистой стенки за счет усиления выработки в эндотелии оксида азота и простациклина. Найденные особенности агрегационных и дезагрегационных явлений в крови у новорожденных телят обеспечивают у них необходимые для данного этапа онтогенеза степень перфузии микроциркуляторного русла, внутренних органов и уровень метаболизма в тканях, способствуя дальнейшему росту и развитию животного.
фаза новорожденности
телята
сосудистая стенка
антиагрегация
форменные элементы крови.
1. Балуда В.П., Соколов Е.И., Балуда М.В. Манжеточная проба в диагностике функционального состояния сосудистого звена системы гемостаза // Гематология и трансфузиология. – 1987. – № 9. – С. 51-53.
2. Ватников Ю.А., Курнявко Н.Ю., Порфирьев И.А. Проблемы интенсификации воспроизводства крупного рогатого скота // Ветеринария сельскохозяйственных животных. – 2009. – № 10. – С. 4-12.
3. Волчегорский И.А., Долгушин И.И., Колесников О.Л. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма. – Челябинск, 2000. – 167 с.
4. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лабораторное дело. - 1983. – № 3. – С. 33-36.
5. Завалишина С.Ю., Глаголева Т.И. Контроль сосудистой стенки над индуцированной агрегацией тромбоцитов у новорожденных телят в условиях дефицита железа // Ветеринарная практика. – 2013. – № 2 (61). – С. 40-42.
6. Завалишина С.Ю., Глаголева Т.И., Медведев И.Н. Антиагрегационные возможности сосудов у новорожденных телят с дефицитом железа на фоне ферроглюкина и гамавита // Теоретические и прикладные проблемы агропромышленного комплекса. – 2013. – № 2 (15). – С. 3-5.
7. Захария Е.А., Кинах М.В. Упрощенный способ определения агрегации и дезагрегации тромбоцитов // Лабораторное дело. – 1989. – № 1. – С. 36-38.
8. Кутафина Н.В., Завалишина С.Ю. Механизмы функционирования сосудисто-тромбоцитарного гемостаза // Вестник РУДН, серия «Экология и безопасность жизнедеятельности». – 2012. – № 1. – С. 30-37.
9. Медведев И.Н., Завалишина С.Ю., Краснова Е.Г. Методические подходы к исследованию реологических свойств крови при различных состояниях // Российский кардиологический журнал. – 2009. – № 5. – С. 42-45.
10. Шитикова А.С. Визуальный микрометод исследования агрегации тромбоцитов // Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний / под ред. Н.Н. Петрищева, Л.П. Папаян. – СПб., 1999. – С. 49-53.

В результате работы сердца кровь, состоящая из форменных элементов и плазмы, непрерывно перемещается по сосудам животного, обеспечивая газообмен и доставку к тканям питательных и биологически активных веществ, а также удаление из них токсических соединений и шлаков [3; 8]. Успешность гемоциркуляции, особенно в сосудах наименьшего калибра, во многом зависит от агрегации форменных элементов крови, выраженность которой находится под постоянным контролем со стороны сосудистой стенки [8]. Замечено, что избыточная агрегация эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов может нарушать метаболические процессы и тормозить развитие животных [9; 10]. В этой связи становится актуальной оценка выраженности агрегации форменных элементов крови и сосудистого контроля над нею у телят в самом начале онтогенеза - в фазу новорожденности. В этом нуждается не только фундаментальная наука, но и практика, т.к. нарушения агрегационно-дезагрегационных взаимодействий в крови у новорожденных телят играют существенную роль в патогенезе многих заболеваний [5]. Для ветеринарии необходимы точно выверенные нормативные показатели агрегации основных форменных элементов крови и антиагрегационного контроля сосудов над ними для оценки степени его динамики у новорожденных телят на фоне применения в случае необходимости различных вариантов коррекции их состояния [6].

В работе поставлена цель - установить выраженность агрегационных свойств форменных элементов крови и антиагрегационного контроля сосудов над ними у телят в течение фазы новорожденности.

Материалы и методы

Исследование выполнено на 32 телятах черно-пестрой породы, взятых в исследование на 1-2 сутки жизни. Обследование проводилось в течение фазы новорожденности пятикратно - на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни.

Выраженность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме оценивалась по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором «Агат-Мед» и ацилгидроперекисей (АГП) [4]. Антиокислительный потенциал жидкой части крови определялся по ее антиокислительной активности (АОА) [3].

Сосудистый контроль над агрегацией форменных элементов крови определяли по ее ослаблению в пробе с временной венозной окклюзией [1].

Выраженность агрегации эритроцитов до и после временной ишемии стенки сосуда определяли с помощью светового микроскопа в камере Горяева, регистрируя количество агрегатов эритроцитов, число агрегированных и неагрегированных эритроцитов [9]. У всех телят путем деления суммы всех эритроцитов в агрегатах на величину этой суммы на фоне временной венозной окклюзии [1] рассчитывался индекс контроля сосудов над суммой эритроцитов в агрегате (ИКССЭА), в результате деления количества агрегатов без временной венозной окклюзии на их количество на фоне временной венозной окклюзии определяли индекс контроля сосудов над количеством эритроцитарных агрегатов (ИКСКЭА) и в ходе деления количества свободных эритроцитов на фоне временной венозной окклюзии на количество свободных эритроцитов без нее высчитывалась величина индекса контроля сосудов над количеством свободных эритроцитов (ИКСКСЭ).

Агрегацию тромбоцитов (АТ) оценивали с помощью визуального микрометода оценки АТ [10] до и после венозной окклюзии с применением АДФ (0,5x10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл) и адреналина (5,0x10-6 М) в богатой тромбоцитами плазме со стандартизированным количеством тромбоцитов 200x109 тр. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) выявляли при делении времени развития АТ после венозной окклюзии на время без нее [1].

Дезагрегационное влияние сосудов на нейтрофилы оценивалось по способности этих клеток к агрегации на фотоэлектроколориметре в плазме, полученной после наложения манжетки и без нее [11]. В качестве индукторов применены лектин зародыша пшеницы в дозе 32 мкг/мл, конканавалин А - 32 мкг/мл и фитогемагглютинин - 32 мкг/мл. У всех телят рассчитывался индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов (ИТССАН) путем деления величины агрегации нейтрофилов в плазме, полученной без манжетки, на ее величину в плазме, взятой с наложением манжетки. Статистическая обработка полученных результатов велась t-критерием Стьюдента.

Результаты исследований

У телят отмечена невысокая активность ПОЛ плазмы, имеющая тенденцию к снижению в течение срока наблюдения - содержание в ней АГП уменьшилось с 1,53±0,26 Д233/1 мл до 1,42±0,31 Д233/1 мл, ТБК-активных продуктов с 3,62±0,12 мкмоль/л до 3,48±0,24 мкмоль/л. Это сопровождалось тенденцией к росту АОА плазмы с 32,0±0,42% на 1-2 сутки до 33,4±0,28% на 9-10 сутки.

В течение фазы новорожденности у телят отмечена тенденция к повышению спонтанной агрегации эритроцитов, о чем судили по наклонности к увеличению суммарного количества эритроцитов в агрегате (на 4,7%), нарастанию количества самих агрегатов (на 2,5%) и понижению числа свободно лежащих красных кровяных телец (на 2,4%).

На фоне временной венозной окклюзии у телят в течение новорожденности суммарное количество эритроцитов в агрегатах за первые 10 суток жизни сократилось на 3,1%, число этих агрегатов уменьшилось на 2,8%, что сопровождалось увеличением числа свободных эритроцитов на 1,7%, обеспечив тенденцию к повышению ИКССЭА, ИКСКЭА и ИКСКСЭ (табл. 1).

У всех телят в течение новорожденности отмечена тенденция к усилению агрегации тромбоцитов. Так, у них на 1-2 сутки жизни время развития АТ под влиянием коллагена составляло 31,6±0,19 с, находясь в течение новорожденности на достаточно низком уровне. Аналогичное состояние АТ у здоровых новорожденных животных отмечено для АДФ (в среднем 40,3±0,15 с) и ристомицина (в среднем 48,1±0,19 с). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, также не испытывая достоверной динамики в течение наблюдения и составляя в среднем 53,2±0,16 с и 98,9±0,32 с, соответственно (табл. 1).

В пробе с временной венозной окклюзией найдена тенденция к замедлению АТ. Это указывало у наблюдаемых телят на наклонность к усилению у них контроля стенки сосуда над тромбоцитарной агрегацией, что подтверждалось найденной тенденцией к увеличению ИААСС, достигших у телят к 9-10 суткам жизни: для адреналина 1,64±0,008, для АДФ 1,65±0,004, для коллагена 1,62±0,008 , для тромбина 1,53±0,006, для ристомицина 1,52±0,004 (табл. 1).

В течение новорожденности у телят также отмечена тенденция к усилению агрегации нейтрофилов. Так, агрегация нейтрофилов у них за время наблюдения возросла с лектином на 2,7%, с конканавалином А на 6,9%, с фитогемагглютинином на 3,7%.

В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация также имела наклонность к усилению в отношении всех испытанных индукторов, что обусловило тенденцию к повышению ИТССАН для лектина на 5,0%, для конканавалина А на 3,3%, для фитогемагглютинина на 3,4% (табл. 1).

Таблица 1. Агрегация форменных элементов крови и антиагрегационный контроль над нею сосудов у новорожденных телят

Определяемые показатели

Фаза новорожденности, n=32, M±m

1-2 сут. жизни

3-4 сут. жизни

5-6 сут. жизни

7-8 сут. жизни

9-10 сут. жизни

средние величины

Сумма всех эритроцитов в агрегате

38,5±0,24

39,2±0,31

39,6±0,39

39,9±0,27

40,3±0,38

39,5±0,32

ИКССЭА

1,17±0,007

1,19±0,006

1,21±0,004

1,24±0,009

1,27±0,007

1,22±0,007

Количество эритроцитарных агрегатов

8,0±0,14

8,0±0,18

8,1±0,09

8,1±0,15

8,2±0,19

8,1±0,15

ИКСКЭА

1,11±0,004

1,12±0,006

1,14±0,008

1,16±0,005

1,17±0,003

1,14±0,005

Количество свободных эритроцитов

253,1±1,34

251,0±1,63

250,1±1,42

248,9±2,08

247,2±1,85

250,1±1,66

ИКСКСЭ

1,18±0,012

1,19±0,009

1,20±0,010

1,21±0,006

1,23±0,009

1,20±0,009

Агрегация тромбоцитов с АДФ, с

40,8±0,14

40,6±0,16

40,3±0,10

40,0±0,18

39,8±0,19

40,3±0,15

ИААСС с АДФ

1,59±0,006

1,60±0,005

1,62±0,007

1,64±0,005

1,65±0,004

1,62±0,005

Агрегация тромбоцитов с коллагеном, с

31,6±0,19

31,4±0,12

31,3±0,11

31,0±0,09

30,8±0,17

31,2±0,14

ИААСС с коллагеном

1,56±0,004

1,58±0,005

1,59±0,007

1,60±0,005

1,62±0,008

1,59±0,006

Агрегация тромбоцитов с тромбином, с

53,9±0,14

53,6±0,12

53,2±0,19

52,8±0,14

52,6±0,20

53,2±0,16

ИААСС с тромбином

1,50±0,006

1,50±0,004

1,51±0,008

1,52±0,004

1,53±0,006

1,51±0,06

Агрегация тромбоцитов с ристомицином, с

48,6±0,14

48,5±0,19

48,2±0,21

47,8±0,19

47,5±0,23

48,1±0,19

ИААСС с ристомицином

1,49±0,005

1,50±0,006

1,50±0,009

1,51±0,007

1,52±0,004

1,50±0,006

Агрегация тромбоцитов с адреналином, с

99,8±0,34

99,3±0,29

98,9±0,37

98,4±0,28

97,9±0,31

98,9±0,32

ИААСС с адреналином

1,62±0,003

1,62±0,006

1,63±0,005

1,64±0,004

1,64±0,008

1,63±0,005

Агрегация нейтрофилов с лектином, %

14,2±0,12

14,2±0,18

14,3±0,16

14,4±0,23

14,6±0,20

14,3±0,18

ИТССАН с лектином

1,20±0,006

1,22±0,005

1,23±0,006

1,24±0,008

1,26±0,008

1,23±0,007

Агрегация нейтрофилов с конканавалином А, %

13,5±0,13

13,7±0,14

13,9±0,18

14,2±0,09

14,5±0,15

13,9±0,14

ИТССАН с конканавалином А

1,22±0,005

1,24±0,007

1,24±0,008

1,25±0,007

1,26±0,004

1,24±0,006

Агрегация нейтрофилов с фитогемагглютинином, %

26,2±0,16

26,5±0,18

26,7±0,16

26,9±0,15

27,2±0,22

26,7±0,17

ИТССАН с фитогемагглютинином

1,16±0,005

1,17±0,006

1,18±0,007

1,19±0,004

1,20±0,005

1,18±0,005

Обсуждение

Развитие животноводства требует серьезного подхода к обеспечению сохранности молодняка [2]. В этой связи большое значение придается исследованиям по физиологии крови у телят в течение новорожденности, и в т.ч. агрегации ее форменных элементов крови, во многом обеспечивающей ее реологию [5; 8]. Стабильно высокая АОА плазмы обеспечивает невыраженную в ней активность ПОЛ [3; 9]. Выявленная у новорожденных телят низкая интенсивность свободнорадикальных процессов в плазме способствует незначительности перестроек в мембранах эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов, которые в данных условиях проявляют невысокую агрегабельность при выраженной функциональной активности эндотелиоцитов.

Очевидно, нормальная агрегация эритроцитов у телят in vivo во многом обеспечена высокой дезагрегирующей способностью сосудистой стенки при одновременно оптимальной электроотрицательности поверхности эритроцитов за счет нарастания количества на их мембране отрицательно заряженных протеинов [9]. Эффективный контроль над генерацией активных форм кислорода обеспечивает минимизацию оксидативных повреждений данных белков мембраны и глобулярных протеинов плазмы, способных связывать эритроциты между собой в уже образовавшихся агрегатах [9; 10]. Высокий контроль сосудистой стенки над агрегацией эритроцитов, очевидно, имеет в своей основе повышенную концентрацию в крови новорожденных телят простациклина и NO, поддерживающих в красных кровяных тельцах оптимум активности аденилатциклазы и фосфодиэстеразы, обеспечивающих физиологическое соотношение в их цитоплазме количества циклического АМФ и Са2+.

Авторы считают, что фаза новорожденности характеризуется сложными обменными сдвигами, неизбежно влияющими на поверхностные свойства эритроцитов. Можно думать, что регистрирующееся у новорожденных телят в кровотоке низкое содержание измененных эритроцитов при высоком количестве свободных эритроцитов [9] во многом обеспечивает должные реологические свойства крови, достаточную перфузию внутренних органов и способствует оптимальному онтогенезу.

В течение всей новорожденности у телят отмечена тенденция к усилению агрегационной активности тромбоцитов, достоверно понижающейся в пробе с временной венозной окклюзией. При этом у новорожденных телят исходная активность тромбоцитов достаточно низка [5], что, очевидно, связано с невыраженностью стимулирующих экзогенных влияний на них при низкой концентрации в крови фактора Виллебранда - кофактора адгезии тромбоцитов и числа рецепторов к нему - (GPIв) на поверхности кровяных пластинок. Это подтверждала у телят невысокая АТ в ответ на ристомицин.

Оптимальная АТ с сильными и слабыми агонистами агрегации обуславливалась невысокой активностью фосфолипаз А2 и С, стимулирующих тромбоксановый и фосфоинозитольный путь активации тромбоцитов.

Выраженное торможение АТ и тенденция к повышению чувствительности тромбоцитов к дезагрегирующим воздействиям со стороны сосудистой стенки у телят в течение первых 10 суток жизни имеет в своей основе оптимальность выработки в эндотелии простациклина и NО во многом вследствие невыраженности ПОЛ плазмы.

Нормальная агрегация нейтрофилов, полученная у наблюдаемых телят, видимо, связана с высокими антиагрегационными возможностями сосудов, сочетающимися с оптимумом состава гликопротеиновых рецепторов лейкоцитов и их невысокой чувствительностью к лектинам, использованным в качестве индукторов. Слабая тенденция к росту лектин- и конканавалин А-индуцированной агрегации нейтрофилов у новорожденных телят обеспечивалась тенденцией к усилению экспрессии на их поверхности рецепторов адгезии и увеличением в их составе участков, содержащих N-ацетил-D-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту и маннозу. Тенденция к росту индуцированной фитогемагглютинином агрегации обеспечивалось склонностью к нарастанию в их рецепторах участков гликопротеинов, содержащих bD-галактозу при эффективном сдерживании агрегации высокой выработкой в сосудах животных простациклина и NO.

Оптимум агрегационных свойств эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов у новорожденных телят обеспечивает необходимый для данного этапа онтогенеза уровень жидкостных свойств крови и требующуюся перфузию внутренних органов, что в значительной степени поддерживает нужный для роста и развития животного уровень метаболизма в тканях. Несомненно, что выявленные особенности активности агрегационных свойств форменных элементов крови и сосудистого контроля над нею во многом обеспечивают переход организма к внеутробному существованию и являются важным элементом общего адаптационного процесса организма в раннем онтогенезе.

Заключение. В первые 10 суток жизни у телят выявлена тенденция к усилению агрегации форменных элементов крови. Для телят в течение новорожденности оказалось характерна наклонность к усилению дезагрегирующего контроля со стороны сосудистой стенки над агрегационными свойствами эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов.

Рецензенты:

Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор, профессор кафедры биохимии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.

Грушкин А.Г., д.б.н., профессор кафедры ветеринарии и физиологии животных Калужского филиала РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, г. Калуга.


Библиографическая ссылка

Завалишина С.Ю., Белова Т.А., Медведев И.Н. АГРЕГАЦИОННЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, ТРОМБОЦИТОВ И ЛЕЙКОЦИТОВ И СОСУДИСТЫЙ КОНТРОЛЬ НАД НИМИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 1. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=11975 (дата обращения: 10.08.2022).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074