Введение
Изучение изменений в органах, тканях и средах полости рта у лиц, страдающих опийной наркоманией, является одной из актуальных проблем стоматологии на современном этапе. Согласно данным ООН [7], число лиц, употребляющих наркотики, составляет 185 млн человек (3% населения земного шара). В последнее десятилетие стремительное развитие получили исследования, занимающиеся вопросами диагностики, лечения и реабилитации опиоидзависимых больных [4; 5]. Клинические проявления данного заболевания на тканевом, органном и системном уровнях организации удостоены должного внимания со стороны психиатров, наркологов, терапевтов и иммунологов [8-12; 15; 16]. Однако стоматологическая патология у данного контингента больных практически не изучена. Имеющиеся отдельные работы [1-3; 13; 14; 17-19] освещают лишь некоторые аспекты стоматологических расстройств у опиоидзависимых больных. Зачастую именно стоматологи сталкиваются с проявлениями данной патологии челюстно-лицевой области. Врачи-стоматологи, столкнувшись с данной проблемой, оказались неподготовленными к распознаванию и диагностике опийной наркомании из-за отсутствия систематизированных сведений о ее проявлении в органах полости рта [1-3].
В этой связи нами проведено исследование, целью которого явилось изучение на светооптическом уровне морфологических особенностей в структурах языка при введении малых доз опиоидного анальгетика.
Материалы и методы исследования
Материалом исследования явились половозрелые крысы - самцы линии Вистар массой 160 г, в возрасте 4,5-7,5 месяцев, всего 16 животных. Инъекции опиоидного анальгетика проводили внутримышечно, ежедневно 1 раз в сутки во временном промежутке от 10 до 11 часов утра. Первая подопытная группа в количестве 8 животных в течение 70 суток получала внутримышечно опиоидный анальгетик в следующих дозах: первые две недели - 0,212 мг / кг, от 2 до 4 недель - 0,225 мг / кг, от 4 до 6 недель - 0,252 мг / кг, от 6 до 8 недель - 0,260 мг / кг, от 8 до 10 недель - 0,283 мг / кг, после чего был проведен забор материала для гистологического исследования. Вторая подопытная группа в количестве 8 животных в течение первых 70 суток получала препарат по аналогичной схеме с первой группой, а от 10-й до 12-й недели эксперимента доза была увеличена до 0,3 мг / кг, после чего был проведен забор материала для гистологического исследования. Все животные содержались в условиях вивария и работа проводилась согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных». Перед проведением забора биопсийного материала животное усыпляли при помощи внутрибрюшинного введения тиопентала (из расчета 25 мг / 1 кг), после чего проводили ампутацию языка для последующего гистологического исследования. Гистопрепараты готовили по общепринятой методике.
Результаты исследования
В результате исследования полученного материала в конце десятой недели эксперимента по изучению влияния малых доз опиоида нами обнаружены изменения в эпителиоцитах базального слоя языка, характеризующиеся конденсированным расположением хроматина в ядрах кератиноцитов базального слоя и отсутствием визуализированных ядрышек [рис. 1-3]. Кариолема образует многочисленные инвагинации. В цитоплазме кератиноцитов присутствуют многочисленные вакуоли. Митохондрии просветленные, кристы в них деструктурированные, пространства между кристами расширены. Однако наряду с дистрофически измененными в кератиноцитах, в базальном слое обнаруживаются их гипертрофированные формы. Ядра в таких клетках увеличены в размерах, кариолема содержит многочисленные инвагинации, что значительно увеличивает их длину и протяженность. Эухроматин занимает большую часть ядра, а гетерохроматин в виде тонкой полоски находится на его периферии. В ядрах гипертрофированных кератиноцитов базального слоя эпителия расположены хорошо структурированные ядрышки (как правило, одно-два), а в их цитоплазме находятся митохондрии с признаками гиперплазии. Наличие в цитоплазме многочисленных «почек» свидетельствует об активации процессов образования митохондрий. В клетках остистого слоя выражены деструктивные изменения с конденсированным ядерным хроматином и просветленными и расширенными перинуклеарными пространствами. В цитоплазме присутствовали многочисленные вакуоли. Митохондрии гипертрофированные, матрикс в них просветленный, кристы разрушены. Базальная мембрана, отделяющая эпителиоциты от соединительной ткани, не однородна. Вблизи очагов деструкции базальной мембраны основное вещество и коллагеновые волокна дезорганизованы. В цитоплазме активированных макрофагов размещены многочисленные лизосомы и фагосомы. Гипертрофированные и гиперплазированные митохондрии в них с просветленным матриксом и с уменьшенным количеством крист, часть из которых деструктурирована. У крыс, которым вводили опиоид десять недель, в соединительной ткани собственной пластинки слизистой оболочки языка обнаружены деструктивно измененные фибробласты, активированные макрофаги и тканевые базофилы. Часто присутствовали контакты макрофагов с лимфоцитами, что указывает на активацию местного иммунитета на данном этапе наблюдения. Дополнительно наблюдали умеренный отек осевых цилиндров периферийных нервных волокон. В миосимпластах мышечных волокон тела языка присутствовали участки пересокращенных саркомеров, актиновые филаменты которых очагово деструктурированы, канальцы саркоплазматического ретикулума расширены. Гиперплазия и гипертрофия митохондрий более выражена, чем в предыдущем сроке наблюдения. Часть митохондрий отечная с просветленным матриксом и деструктурированными кристами.
Рис. 1. Ультраструктура кератиноцитов остистого слоя (А) и зернистого слоя (Б) покровного эпителия слизистой оболочки языка крыс в конце десятой недели опиоидного воздействия. Электронограмма х 2000
1 - кариорексис, 2 – цитоплазма, 3 - ядро, 4 - деструктурированные митохондрии.
Рис. 2. Ультраструктура клеток Меркеля (А) и кератиноцитов остистого слоя (Б) покровного эпителия слизистой оболочки языка крыс в конце десятой недели опиоидного воздействия. Электронограмма х 2000.
1 - клетка Меркеля, 2 - диск Меркеля, 3 - кератиноциты остистого слоя,
4 - ядро, 5 - цитоплазма, 6 - деструктурированные митохондрии.
Рис. 3. Ультраструктура соединительной ткани слизистой оболочки языка крыс в конце десятой недели опиоидного воздействия. Электронограмма х 2000.
1 - фибробласты, 2 - коллагеновые волокна, 3 - нервные волокна, 4 - макрофаги, 5 - стенка венулы, 6 - периваскулярный отек интерстиция.
В результате забора экспериментального материала в конце двенадцатой недели воздействия опиоида мы обнаружили, что изменения в эпителиоцитах базального слоя аналогичны изменениям в предыдущем сроке наблюдения [рис. 4, 5]. Однако в клетках остистого слоя деструктивные изменения прогрессировали. Хроматин в ядрах конденсированный, перинуклеарные пространства просветленные и расширенные. В цитоплазме присутствуют многочисленные вакуоли. Митохондрии гипертрофированные, матрикс в них просветленный, кристы разрушены. Звенья гемомикроциркуляторного русла в слизистой оболочке языка характеризуются полнокровием. В просветах артериол обнаруживаются пристеночные тромбы. Стенки артериол утолщены за счет гиперплазии гладких миоцитов в средней оболочке. Просветы кровеносных капилляров в слизистой оболочке расширены и полнокровны, эндотелиоциты в их стенках набухшие. Базальная мембрана вокруг капилляров неоднородная, коллагеновые волокна в ней очагово деструктурированные. Просвет венул полнокровный, в них обнаруживаются ацидофильные лейкоциты, моноциты, тромбоциты и эритроциты. Часто встречаются процессы адгезии моноцитов к эндотелиоцитам и диапедез лейкоцитов через стенки венул. Соединительная ткань в периваскулярных пространствах отечна, в ней обнаруживаются многочисленные лимфоциты, гистиоциты, эозинофильные лейкоциты и единичные
Рис. 4. Ультраструктура слизистой оболочки языка крыс в конце двенадцатой недели опиоидного воздействия. Электронограмма х 2000.
1 - фибробласты, 2 - коллагеновые волокна, 3 - клетки Лангенгарса в соединительной ткани, 4 - активированные макрофаги, 5 - контакты макрофагов и лимфоцитов, 6 - перицеллюлярный отек интерстиция.
Рис. 5. Ультраструктура слизистой оболочки языка крыс в конце двенадцатой недели опиоидного воздействия. Электронограмма х 2000.
1 - фибробласты, 2 – макрофаги, 3 - коллагеновые волокна, 4 - перицеллюлярный отек интерстиция, 5 - отек эндоневрия в нервных волокнах.
тканевые базофилы. В периваскулярных пространствах присутствовали активированные макрофаги. В их цитоплазме расположены многочисленные фагосомы и макрофаги с лимфоцитами, что указывает на активацию местного иммунитета.
Выводы
1. В конце десятой недели воздействия опиоида присутствуют структурные изменения в составе покровного эпителия и базальной мембраны, соединительной ткани собственной пластинки слизистой оболочки языка. Наблюдаются изменения в строении его нервных и мышечных волокон. Данные электронно-микроскопических исследований свидетельствуют о запуске механизмов местного иммунитета.
2. В конце двенадцатой недели воздействия опиоида обнаруживаются более глубокие деструктивные изменения в клетках остистого слоя языка. Нарушается структура стенок в звеньях гемомикроциркуляторного русла. Наблюдаются явления адгезии тромбоцитов и моноцитов. В периваскулярных пространствах присутствуют активированные макрофаги и отек соединительной ткани.
Рецензенты:
Матещук-Вацеба Л.Р., д.м.н., профессор, профессор кафедры нормальной анатомии Львовского национального медицинского университета имени Данила Галицкого, г. Львов.
Жилякова Е.Т., д.фарм.н., профессор, заместитель директора ООО «Асклепий», г. Белгород.