Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ФАКТОРЫ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ХИМИОТЕРАПИИ С ОЗОНИРОВАННЫМИ СРЕДАМИ

Кит О.И. 1 Геворкян Ю.А. 1 Ильченко С.А. 1 Златник Е.Ю. 1 Новикова И.А. 1 Непомнящая Е.М. 1 Солдаткина Н.В. 1
1 ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Проанализированы данные о 60 больных III стадией рака желудка, которым выполнена радикальная гастрэктомия с расширенной лимфодиссекцией D2. 30 больным (основная группа) проведено лечение, включающее радикальную операцию с интраоперационной химиотерапией с озонированными средами. 30 больным (контрольная группа) проведено лечение, включающее радикальную операцию без интраоперационного воздействия. В выделенных образцах ткани опухоли, перитуморальной зоны и линии резекции проводилось морфологическое исследование и иммунофенотипирование субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлюориметрии. Применение интраоперационной химиотерапии с озонированными средами благоприятно влияет на состояние локального клеточного иммунитета, способствует усилению лимфоцитарной инфильтрации в изучаемых образцах тканей желудка по сравнению с контрольной группой, с преобладанием в ткани опухоли содержания лимфоцитов Т-ряда (CD3+CD4+ и CD3+CD8+ в 1,2 и 2,2 раза, соответственно, p<0,05), реализующих адаптивный клеточный иммунитет, над эффекторами адаптивного гуморального (В-клетки) и врожденного клеточного (NK) иммунитета; способствует выраженному повышению (p<0,05) в ткани линии резекции уровня Т-лимфоцитов на 17,5% за счет CTL (увеличение на 54%), и NК-клеток (увеличение в 2,6 раза).
локальный клеточный иммунитет
иммунофенотипирование субпопуляций лимфоцитов
озонированные среды
химиотерапия
гастрэктомия
рак желудка
1. Алясова А.В., Пегов Р.Г., Михайлова Е.М., Новиков В.В., Барышников А.Ю. Содержание растворимой формы молекул HLA I класса в сыворотке крови больных раком молочной железы и лёгкого // Российский биотерапевтический журнал. – 2008. - Т. 7. - № 1. - С. 3-3.
2. Данилова И.А. Клинико-морфологический и популяционный анализ рака желудка с оценкой критериев выживаемости : дис. … докт. мед. наук. - СПб., 2011. – 297 с. : ил.
3. Давыдов М.И., Туркин И.Н., Полоцкий Б.Е., Стилиди И.С., Левицкий А.В. Ранний рак желудка. Результаты хирургии раннего рака желудка // Вестник Московского онкологического общества. – 2008. – № 9 (550). – С. 2-4.
4. Неверова Е.А. Патогенетическое обоснование применения озона при эндогенных увеитах : автореф. дис. … канд. мед. наук. - Саранск, 2007. – 116 с. : ил.
5. Скоропад В.Ю. Рациональная тактика лечения местно-распространенного рака желудка: место лучевой терапии // Практическая онкология. – 2009. – Т. 10, № 1. – С. 28-35.
6. Трякин А.А. Лечение местно-распространенного рака желудка: роль химиотерапии // Практическая онкология. – 2009. – Т. 10, № 1. – С. 36-40.
7. Фисталь Э.Я., Козинец Г.П., Самойленко Г.Е., Носенко В.М., Фисталь Н.Н., Солошенко В.В. Комбустиология : учебник. – Донецк, 2005. – 315 с.
8. Шестериков Я.А. Клинико-иммунологическое обоснование применения медицинского озона в комплексной терапии посттравматических менингитов и менингоэнцефалитов : автореф. дис. … канд. мед. наук. - Новосибирск, 2008. – 116 с. : ил.
9. Янченко О.С., Конторщикова К.Н., Новиков В.В. Барышников А.Ю. Воздействие озонотерапии на популяционный состав лимфоцитов при раке тела матки и миоме матки // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. – С. 4-7.

Введение

Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости раком желудка, он остается одной из самых распространенных форм злокачественных опухолей. В России в структуре онкозаболеваемости рак желудка занимает 3-е место после рака легкого и кожи, и 2-е место в структуре смертности после рака легкого [2]. Основным методом радикального лечения больных раком желудка является хирургический, но даже при местной распространенности опухолевого процесса радикальность оперативных вмешательств составляет 30-40% [3].

Для улучшения результатов лечения разрабатываются методы, включающие химиолучевое лечение, однако их возможности ограничены резистентностью опухоли, низкой толерантностью окружающих тканей и высокой токсичностью химиопрепаратов [5]. Поэтому важным подходом при лечении больных раком желудка являются способы введения и доставки химиопрепаратов к опухоли [6]. Перспективным направлением является применение различных модуляторов, повышающих эффективность химиопрепаратов и влияющих на результаты лечения, к которым относится и озонотерапия.

Местное и системное парентеральное применение озонированных растворов в комплексном лечении различной патологии вызывает, наряду с другими позитивными эффектами, благоприятную динамику системных и локальных иммунологических параметров. Исследования показали, что применение озона приводит к повышению уровня SIgА в слезной жидкости, нормализации показателей Т- и В-клеточного звеньев иммунной системы, снижению содержания провоспалительных цитокинов (TNF-α, IL-1α, IL-6) и лактоферрина в крови и в ликворе на фоне возрастания уровня противовоспалительного цитокина IL-4 в ликворе [4; 7; 8]. Включение озонотерапии в комплексное лечение онкологических больных способствует не только получению клинического эффекта, но и запуску апоптоза [1]. Кроме того, описано снижение при озонотерапии сывороточного уровня sHLAI, вызывающего апоптоз CD3+CD8+ (CTL), чем можно объяснить протекторное действие озона на цитотоксические Т-лимфоциты, а также указано на стимуляцию экспрессии рецепторов CD50 и CD71 (участвующих в адгезии и активации) на мононуклеарных клетках [9].

Таким образом, имеется ряд данных об участии иммунной системы в реализации эффектов озонотерапии при различных заболеваниях. Ее иммунотропное действие может быть вторичным по отношению к антимикробному и противовоспалительному, но может и играть существенную самостоятельную патогенетическую роль при онкологических заболеваниях, демонстрируя разнонаправленное влияние на апоптоз опухолевых и мононуклеарных клеток.

Цель

Изучить влияние интраоперационной химиотерапии с озонированными средами на состояние локального иммунитета у больных резектабельным раком желудка.

Материал и методы

Проанализированы данные о 60 больных III стадией местно распространенного рака желудка, которым была выполнена радикальная гастрэктомия с расширенной лимфодиссекцией в объеме D2 в отделении общей онкологии ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ.

Больные были распределены на две группы. Основную группу составили 30 больных, которым проведено лечение, включающее радикальную операцию с интраоперационной химиотерапией с озонированными средами. Контрольную группу составили 30 больных, которым проведено лечение, включающее радикальную операцию без интраоперационного воздействия.

Сравнительная характеристика групп больных по возрасту, полу, гистологической структуре и степени распространенности опухоли, сопутствующей патологии не выявила достоверных различий, что позволило провести анализ результатов лечения.

Для проведения лечения с применением химиотерапии с озонированными средами больным основной группы при проведении стандартной гастрэктомии, после мобилизации желудка, выделяли левую желудочную артерию и вену, их перевязывали и пересекали. Левые желудочно-сальниковые сосуды и короткие желудочные сосуды не пересекали, по ним осуществлялся сброс крови и препаратов в общий кровоток. Катетеризировали культю левой желудочной артерии, вводили 50 мл озонированного физиологического раствора (концентрация озона - 1000 мкг/л) в течение 5 минут. Через 5 мин вводили оксалиплатин в дозе 85 мг/м2 на 150 мл 5%-ной глюкозы. После 30-минутной экспозиции выполняли гастрэктомию. Также во время операции внутривенно вводили 100 мл озонированной аутокрови (с концентрацией озона 400 мкг/л) со скоростью 40 капель в минуту. С интервалом 5 минут вводили лейковорин 100 мг/м2 и 5-фторурацил 500 мг/м2 (получен патент РФ № 2428993. 2011. Бюл. № 26).

Дальнейший ход операции осуществлялся по стандартной методике и не имел отличий от проведения больным контрольной группы.

Проводилось плановое морфологическое исследование удаленного желудка и лимфатических узлов. Гистологический материал фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине со стандартной проводкой, заливкой в парафин и окраской гематоксилином и эозином. В выделенных образцах ткани опухоли, перитуморальной зоны (на расстоянии 3 см от опухоли) и линии резекции проводилось иммунофенотипирование субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлюориметрии. Определяли субпопуляционный состав Т- (Т-общие - CD3+, хелперно-индукторные - CD4+-, цитотоксические - CD8+) и В-лимфоцитов (CD19+), а также натуральных киллеров NK (CD16+CD56+).

Результаты и обсуждение

Морфологическое исследование показало, что в основной группе по линии резекции отмечается повышенная лимфоцитарная инфильтрация (рисунок 1). Морфологическая картина опухоли характеризовалась наличием выраженного отека вокруг желудочных желез и пластов опухолевых клеток (рисунок 1).

х 400 Выраженный отек вокруг опухолевых клеток и желез

 

х 200. Выраженная лимфоцитарная инфильтрация по линии резекции

Рисунок 1. Морфологическая картина рака желудка после применения химиотерапии с озонированными средами (окраска гематоксилином-эозином)

Обращало внимание изменение структуры опухолевых клеток: увеличение в размерах ядер с дистрофическими и некробиотическими признаками, появление в цитоплазме вакуолей. Отмечалось незначительное содержание нейтрофилов и повышенная агранулоцитарная инфильтрация со значительным преобладанием лимфоцитов – признака локальных иммунных реакций. В контрольной группе описанных изменений не наблюдалось.

Различия состава субпопуляций лимфоцитов в соответствующих образцах тканей больных основной и контрольной группы представлены в таблице 1. Результаты исследования показали, что у больных контрольной группы в ткани опухоли содержится статистически значимо меньше зрелых Т-клеток по сравнению с тканью линии резекции и перитуморальной зоны. Эта разница обусловлена более низким уровнем CD3+СD8+ клеток в ткани опухоли (в 2 раза меньшим, чем в ткани по линии резекции, и в 3 раза меньшим, чем в перитуморальной зоне). При этом в ткани опухоли и перитуморальной зоне присутствует значительное количество NК-клеток, в 2-3 раза превышающее их уровень по линии резекции. Содержание СD3+СD4+ клеток, а также СD19+(В-лимфоцитов) в опухоли соответствует их уровню по линии резекции, однако оно оказалось минимальным в перитуморальной зоне.

Уровень CD3+ во всех исследованных образцах тканей больных основной группы превышал уровень контрольной группы (p<0,05). Содержание CD3+CD4+ в опухоли является максимальным, достоверно превышая как показатель контрольного образца в 1,2 раза, так и линии резекции и перитуморальной области внутри группы в 1,1 раза. В ткани перитуморальной области количество CD3+CD4+ оказалось в 1,4 раза выше (p<0,05), чем в контрольном образце. Содержание CD3+CD8+ в опухоли при действии химиотерапии с озонированными средами было хотя и ниже в 1,4 раза (p<0,05), чем в ткани по линии резекции, но в 2,2 раза выше (p<0,05), чем в контроле. Уровень В-клеток по линии резекции оказался в 3,6 раза ниже, чем в контроле, а уровень CD16+CD56+ – в 2,6 раза выше (p<0,05). Количество NK-клеток в ткани опухоли и перитуморальной области основной группы было достоверно ниже в 1,3 и 1,5 раза, чем по линии резекции.

Таблица 1

Уровень субпопуляций лимфоцитов в ткани опухоли желудка, перитуморальной зоне и линии резекции у больных основной и контрольной группы

Показатель, %

Основная группа (n=30)

Контрольная группа (n=30)

ткань

опухоли

пери-туморальная зона

линия резекции

ткань

опухоли

пери-туморальная зона

линия резекции

CD3+

66,1±6,23

65,9±5,93

70,2±5,73

46,7±3,01,2

56,1±3,8

59,7±4,4

CD3+CD4+

44,4±2,71,2,3

38,2±3,43

38,0±2,9

35,8±3,22

27,0±2,91

38,1±3,3

CD3+CD8+

21,0±4,01,3

24,8±3,5

30,5±3,73

9,5±2,81,2

27,2±3,8

19,8±5,4

CD19+

16,5±4,21,3

18,3±3,71

8,2±3,23

29,7±4,12

18,1±3,71

29,7±3,5

CD16+CD56+

16,0±3,11

15,1±3,31,3

22,4±3,23

22,0±4,21

23,1±3,71

8,4±3,8

Примечание:

1 - статистически достоверные отличия от линии резекции (p<0,05);

2 - статистически достоверные отличия от перитуморальной зоны (p<0,05);

3 - статистически достоверные отличия от контрольной группы (p<0,05).

Поскольку лечебное воздействие в виде химио- и озонотерапии является интраоперационным, состояние ткани, расположенной по линии резекции, имеет, на наш взгляд, наибольшее значение для дальнейшего течения заболевания. В связи с этим следует обратить особое внимание на выраженные благоприятные отличия локального клеточного иммунитета именно этой области. Применение предлагаемого нами варианта лечения способствует позитивным изменениям факторов локального иммунитета в немалигнизированной ткани линии резекции, а именно приводит к значительному повышению содержания лимфоцитов, способных к проявлению цитотоксической активности и относящихся к факторам как врожденного (NК), так и адаптивного (CTL CD3+CD8+) иммунитета, хотя они и являются рециркулирующими клетками.

Итак, полученные результаты свидетельствуют о том, что проведение интраоперационной регионарной и системной химиотерапии с применением озонированных сред влияет не только на состояние опухоли, но и прилежащих тканей, включая перитуморальную зону и линию резекции.

При оценке ближайших результатов лечения больных основной группы в сроки наблюдения от 18 до 24 месяцев установлено, что признаки генерализации опухолевого процесса наблюдались у 7 (23,3%) больных. Показатели локального иммунитета этих больных были сопоставлены с теми, у кого была показана положительная клиническая динамика без признаков прогрессирования заболевания (таблица 2-4).

Таблица 2

Уровень субпопуляций лимфоцитов в ткани опухоли у больных основной группы с различным клиническим эффектом

Показатель, %

Основная группа больных (n=30)

вся группа

положительный эффект (n=23)

отсутствие эффекта

(n=7)

CD3+

66,1±6,2

68,8±3,21

57,2±5,7

CD3+CD4+

44,4±2,7

44,8±2,01

38,2±2,3

CD3+CD8+

21,0±4,0

22,0±3,61

17,4±3,5

CD19+

16,5±4,2

15,2±3,31

20,8±3,9

CD16+CD56+

16,0±3,1

14,6±2,11

20,5±3,2

Примечание:

1 – статистически достоверные отличия в зависимости от клинического эффекта, в пределах группы (p<0,05).

Таблица 3

Уровень субпопуляций лимфоцитов в перитуморальной зоне у больных основной группы с различным клиническим эффектом

Показатель, %

Основная группа больных (n=30)

вся группа

положительный эффект (n=23)

отсутствие эффекта

(n=7)

CD3+

65,9±5,9

68,1±2,71

58,5±7,8

CD3+CD4+

38,2±3,4

39,3±2,41

34,8±4,1

CD3+CD8+

24,8±3,5

26,0±2,41

21,1±4,0

CD19+

18,3±3,7

17,2±3,01

21,8±3,8

CD16+CD56+

15,1±3,3

13,9±1,51

18,8±4,8

Примечание:

1 – статистически достоверные отличия в зависимости от клинического эффекта, в пределах группы (p<0,05).

Таблица 4

Уровень субпопуляций лимфоцитов по линии резекции у больных основной группы с различным клиническим эффектом

Показатель, %

Основная группа больных (n=30)

вся группа

положительный эффект (n=23)

отсутствие эффекта

(n=7)

CD3+

70,2±5,7

71,7±2,01

65,5±10,7

CD3+CD4+

38,0±2,9

38,4±1,5

36,5±5,5

CD3+CD8+

30,5±3,7

31,6±1,91

26,7±5,6

CD19+

8,2±3,2

7,0±1,31

11,7±5,0

CD16+CD56+

22,4±3,2

22,2±1,7

23,5±6,2

Примечание:

1 – статистически достоверные отличия в зависимости от клинического эффекта, в пределах группы (p<0,05).

Как видно из представленных таблиц 2-4, при отсутствии эффекта у больных основной группы в опухоли, перитуморальной зоне и по линии резекции отмечены наиболее низкие (p<0,05) (таблица 2-3), показатели Т-клеток (CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+), а уровни В- (CD19+) и NК- (CD16+CD56+) клеток были максимальными (p<0,05) (таблица 2-3). В целом у больных основной группы при отсутствии эффекта наблюдается сходная картина с больными контрольной группы, хотя показатели были выше, чем в последней.

Итак, можно предположить, что эффективность лечения основной группы больных связана с уровнем клеточных факторов локального иммунитета, среди которых основную роль играет накопление в исследуемых образцах тканей Т-лимфоцитов с рецепторами CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+.

Таким образом, полученная характеристика факторов локального клеточного иммунитета при раке желудка свидетельствует о влиянии на них предложенного метода лечения. Это влияние развивается быстро (в течение 30-минутной инкубации в оперируемом органе) и, по-видимому, не может быть связано с пролиферацией лимфоцитов и их миграцией из лимфоидных органов. Тем не менее усиление их миграции из сосудов микроциркуляторного русла представляется возможным, с учетом влияния озона на проницаемость сосудистой стенки или на адгезивные свойства эндотелия. Вероятно, некоторые из разновидностей лимфоцитов оказались более чувствительными к введению оксалиплатина и озонированных сред. Скорее всего, это В-клетки, уровень которых в опухоли, и особенно в ткани по линии резекции, снижается по сравнению с контролем. При этом происходит перераспределение процентного содержания в пользу более устойчивых к примененным воздействиям клеток, в частности возрастает доля CD3+CD4+ и CD3+CD8+ в опухоли, что формирует локальное преобладание лимфоцитов Т-ряда, реализующих адаптивный клеточный иммунитет, над эффекторами адаптивного гуморального (В-клетки) и врожденного клеточного (NK) иммунитета.

Изменения в ткани линии резекции могут вносить значительный вклад в обеспечение длительности бессобытийного периода после хирургического этапа лечения. Поэтому важным является отмеченное нами выраженное повышение содержания Т-лимфоцитов за счет CTL, а также NК-клеток в ткани линии резекции основной группы. Мы предполагаем, что присутствие высокого числа этих клеток может способствовать предотвращению развития рецидивов, которое не наблюдалось у больных основной группы и встречалось у 2 (6,6%) больных контрольной группы.

Выводы

Применение интраоперационной химиотерапии с озонированными средами благоприятно влияет на состояние локального клеточного иммунитета, способствует усилению лимфоцитарной инфильтрации в изучаемых образцах тканей желудка по сравнению с контрольной группой, с преобладанием в ткани опухоли содержания лимфоцитов Т-ряда (CD3+CD4+ и CD3+CD8+ в 1,2 и 2,2 раза, соответственно, p<0,05), реализующих адаптивный клеточный иммунитет, над эффекторами адаптивного гуморального (В-клетки) и врожденного клеточного (NK) иммунитета; способствует выраженному повышению (p<0,05) в ткани линии резекции уровня Т-лимфоцитов на 17,5% за счет CTL (увеличение на 54%), и NК-клеток (увеличение в 2,6 раза).

Рецензенты:

Николаева Н.В., д.м.н., н.с. отделения онкогематологии ФГБУ «РНИОИ» Министерства здравоохранения Российской Федерации, асс. кафедры онкологии ГБОУ ВПО «РостГМУ» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Ростов-на-Дону.

Каймакчи О.Ю., д.м.н., асс. кафедры онкологии ГБОУ ВПО «РостГМУ» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Ростов-на-Дону.


Библиографическая ссылка

Кит О.И., Геворкян Ю.А., Ильченко С.А., Златник Е.Ю., Новикова И.А., Непомнящая Е.М., Солдаткина Н.В. ФАКТОРЫ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ХИМИОТЕРАПИИ С ОЗОНИРОВАННЫМИ СРЕДАМИ // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 5.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=9893 (дата обращения: 13.12.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074