Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ИЗМЕНЕНИЕ ВИРУЛЕНТНЫХ СВОЙСТВ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ЭНТЕРОКОККОВ В УСЛОВИЯХ МЕЖМИКРОБНЫХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ

Потатуркина-Нестерова Н.И. 1 Немова И.С. 2 Артамонова М.Н. 2 Хромова Е.Б. 3 Хохлова О.Е. 4 Трофимова Н.В. 5 Теплякова О.В. 4 Кочергина И.А. 3
1 ФГБОУ ВПО «Тольяттинский государственный университет»
2 ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»
3 ФГБОУ ВПО «Челябинский Государственный Университет»
4 ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого»
5 ФГБОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития РФ
У 168 обследованных женщин с воспалительными заболеваниями репродуктивной системы выделены штаммы Mycoplasma hominis и Еnterococcus faecalis. Для выявления микроорганизмов и определения их генетических детерминант патогенности применяли молекулярно-генетический метод. Подбор праймеров и температуры отжига осуществляли при использовании пакета программ «Lasergene» (США). В исследовании выявлены изменения встречаемости генетических детерминант патогенности микросимбионта Е. faecalis, выделенного из микробных консорциумов репродуктивного тракта женщин при наличии и отсутствии в них микоплазм. Установлено, что после сокультивирования энтерококков с микоплазмами различной вирулентности у энтерококков возрастает частота встречаемости пар праймеров сylm (токсигенность, цитолизин), cpd (бактерииоциогенность), cps (адгезия и колонизация) по сравнению с показателями, полученными до сокультивирования.
патогенный потенциал.
микросимбионты
межмикробные взаимоотношения
репродуктивный тракт
микробиоценоз
1. Бухарин О. В., Лобакова Е. С., Немцева Н. В., Черкасов С. В. Ассоциативный симбиоз. Екатеринбург: УрО РАН, 2007. - 264 c.
2. Бухарин О. В., Усвяцов Б. Я., Хлопко Ю. А Медико-экологические аспекты микросимбиоза человека // Экология человека. - 2010. - № 8. - С.28-31.
3. Бухарин О. В., Лобакова Е. С., Перунова Н. Б. и др. Симбиоз и его роль в инфекции. -Екатеринбург: УрО РАН, 2011. - 300 с.
4. Евстигнеева Н. П. Выявляемость U. urealyticum методом ПЦР в зависимости от состояния микробиоценоза влагалища // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - № 10. - С. 3-7.
5. Наумкина Е. В., Рудаков Н. В., Пахалкова Е. В. Состояние микроценоза влагалища при урогенитальных инфекциях, вызванных условно-патогенными возбудителями // Омский научный вестник. - 2009. - № 1 (65). - С.37-41.
6. Прилепская В. Н., Быковская О. В. Уреаплазменная инфекция: клиника, диагностика, лечение // Генитальные инфекции. - 2006. - № 1. - С. 46 - 52.
Изучение симбиозов в настоящее время заняло одно из приоритетных мест в ряду актуальных проблем современной биологии. Микроорганизмы, населяющие репродуктивный тракт женщин, представляют собой пример ассоциативного симбиоза, включающего все компоненты: макросимбионт (человек), доминантный симбионт (лактобациллы) и ассоциативные симбионты (токсоны ассоциативных микроорганизмов) [3]. Исследования в области изучения ассоциативных симбиозов направлены на изучение взаимного влияния макросимбионта и доминантного микросимбионта, а также доминантного и ассоциативных микросимбионтов.

Анализ направленности межмикробных взаимоотношений ассоциативных микросимбионтов позволяет прояснить патогенез широкого спектра заболеваний, правильно оценить происхождение тех или иных аномалий в структуре микросимбионтов, приводящих к изменению их типичных или проявлению новых биологических свойств [1,2].

В связи с этим целью исследования явилось изучение вирулентных свойств урогенитальных энтерококков при взаимодействии с микоплазмами в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин.

В ходе выполнения работы обследовано 168 женщин с воспалительными заболеваниями, среди которых 75 пациенток были больны аднекситом (44,6 %), 53 - кольпитом (31,6 %) и 40 - эндоцервицитом (23,8 %). Группа сравнения составили 75 практически здоровых женщин, репрезентативных по возрасту.

Количественную и качественную оценку состава вагинального микроценоза производили бактериологическим методом в соответствии с Приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 [4,5,6]. Для выявления микоплазм использовали прямой вариант МФА с контрастированием фона, культуральный метод и ПЦР. Подбор праймеров и температуры отжига осуществляли при использовании пакета программ «Lasergene» (США).

Используемые праймеры для Enterococcus faecalis: Cylm - 5' ACAGGGAGACTCTCATAGTCGCGG 3'; Сpd - 5' CGCGTGAAGAACAAATGGCCGC 3'; Сps - 5' GGCATCGAAGCTAATGGGTGGGT 3' (табл. 1).

Таблица 1

Использованные в работе праймеры

Ген

Фактор патогенности

Пары праймеров: прямой/обратный

Размер ампликона н.п.

Праймеры энтерококков Enterococcus faecalis

1

Cylm (токси-генность, цитолизин),

5'ACAGGGAGACTCTCATAGTCGCGG 3'

5'CCCCGTGCCGGGGTGCCTGGACCTG 3'

296

2

cpd (бактерии-оциогенность)

5' CGCGTGAAGAACAAATGGCCGC 3'

5'GCTTTCCTGGTAGTTGGCGTAGG 3' '

528

3

cps (адгезия и колонизация)

5' GGCATCGAAGCTAATGGGTGGGT 3'

5' GCTTTCCTGGTAGTTGGCGTAG G 3'

298

В результате исследования установлено, что из всех обследованных женщин энтерококки были выделены из влагалищного и цервикального биотопов у 46,6 % и 26,6 % здоровых и 85,1 % и 55,9 % больных соответственно. У больных женщин энтерококки обнаруживались почти в два раза чаще, чем у здоровых. Плотность микробного обсеменения (ПМО) E. faecalis при воспалительных заболеваниях увеличивалась во влагалище в 2,1 раза, а в цервикальном канале - в 3,4 раза. Штаммы Mycoplasma hominis были выделены у всех 168 женщин.

Изучение вирулентности клинических изолятов Е. faecalis методом внутрибрюшинного заражения мышей показало, что из 237 штаммов энтерококков, выделенных у женщин с заболеваниями репродуктивной системы, только 187 (78,9 %) вызывали гибель животных, показатель LD50 /lg этих штаммов варьировал от 3,6±0,1 до 5,7±0,6. В зависимости от величины показателя штаммы были разделены на три группы. LD50/lg штаммов I группы (39 штаммов) составлял от 3,6±0,1 до 4,4±0,3; II группы - от 4,5±0,4 до 5,0±0,5 (97 штаммов) и III группы - от 5,1±0,7 до 5,7±0,6 (51 штамм).

Для оценки взаимного влияния микросимбионтов на их патогенный потенциал определяли гены, детерминирующие бактериоциногенность (cpd), адгезию (cps), а также токсигенность и цитолитическую активность(cylm) у штаммов E. faecalis (n=142), выделенных из ассоциаций с М. hominis различной степени вирулентности после их совместного культивирования, а также у энтерококков (n=87), выделенных из микробных консорциумов, где микоплазмы не являлись участником микробного сообщества. Исследования показали, что частота встречаемости гена cpd у штаммов E. faecalis, выделенных из ассоциации с микоплазмами, составила 57 %, изолированных без микоплазм - 36,7 %.

Таблица 1

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей гена cpd сylm, cps у культуры E. fаecalis

 

Штаммы E. fаecalis, выделенные в ассоциации с микоплазмами:

 

Совместное культивирование

Частота встречае-мости фрагмента cpd гена

(%)

Частота встречае-мости фрагмента ген cps гена (%)

Частота встречае-мости фрагмента cylm гена (%)

авирулентными (n=29)

 

до сокультивирования

3,4±0,2

4,1±0,6

6,8±0,8

после 3-х суток сокультивирования

3,8±0,5

4,9±0,8

7,3±0,3

умеренно вирулентными (n=76)

до сокультивирования

14,4±1,7

15,7 ±0,7

35,5±1,3

после 3-х суток сокультивирования

19,7±2,7*

22,3 ±2,7*

46,7±1,7*

высоко

вирулентными (n=37)

до сокультивирования

54,1±2,9

67,5±3,5

48,6±7,2

после 3-х суток сокультивирования

86,5±3,5*

92,5±4,5*

78,3±6,4 *

Выделенные в виде монокультур

до сокультивирования

3,2±0,5

3,6±0,1

2,2±0,1

после 3-х суток сокультивирования

3,7±0,7

3,9±0,7

3,1±0,2

Примечание: * - показатель достоверности различия между уровнем частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей гена cpd у культур E. fаecalis до и после их сокультивирования с М. hominis (р<0,05).

Тестирование E. faecalis после сокультивирования с авирулентными, с умеренновирулентными и высоковирулентными микоплазмами в течение трех суток выявило достоверное (р<0,05) повышение частоты встречаемости искомых ампликонов у вирулентных штаммов (табл.1). В дальнейшие сроки исследования частота встречаемости изучаемых ампликонов не изменялась (р>0,05).

В группе энтероккоков, выделенных без микоплазм, частота встречаемости генетических детерминант сylm, cpd, cps после совместного культивирования с микоплазмами достоверно не изменялась.

Таким образом, установлено, что после сокультивирования энтерококков с микоплазмами различной вирулентности возрастает частота встречаемости всех пар праймеров сylm (токсигенность, цитолизин), cpd (бактерииоциогенность), cps (адгезия и колонизация) по сравнению с показателями, полученными до сокультивирования, что приводило к формированию более выраженной патогенности штаммов энтерококков.

Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (№14.B37.21.2010)

Рецензенты:

Ильина Н. А., д.б.н., профессор кафедры зоологии, проректор по научной работе ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет имени И. Н. Ульянова», г. Ульяновск.

Нестеров А. С., д.м.н., профессор кафедры инфекционных и кожно-венерических болезней ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет», г. Ульяновск.


Библиографическая ссылка

Потатуркина-Нестерова Н.И., Немова И.С., Артамонова М.Н., Хромова Е.Б., Хохлова О.Е., Трофимова Н.В., Теплякова О.В., Кочергина И.А. ИЗМЕНЕНИЕ ВИРУЛЕНТНЫХ СВОЙСТВ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ЭНТЕРОКОККОВ В УСЛОВИЯХ МЕЖМИКРОБНЫХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 1.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=7957 (дата обращения: 09.12.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074