Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ИММУНОГЕННЫЕ И ПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТОВ ВЫСШИХ ГРИБОВ ГРУППЫ ПОРЯДКОВ ГАСТЕРОМИЦЕТЫ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСОВ ГРИППА А И В

Макаревич Е.В. 1 Ибрагимова Ж.Б. 1 Косогова Т.А. 1 Курская О.Г. 1 Мазурков О.Ю. 1 Ильичева Т.Н. 1 Теплякова Т.В. 1 Мазуркова Н.А. 1
1 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»
Проведено исследование токсичности и противовирусной активности водных экстрактов высших грибов группы порядков гастеромицеты на перевиваемой линии клеток MDCK и беспородных белых мышах. Выявлено, что все исследованные образцы грибных экстрактов малотоксичны на культуре клеток MDCK и лабораторных животных. Изучение противовирусной активности экстрактов грибов гастеромицетов на культуре клеток MDCK в профилактической схеме показало, что большинство исследованных образцов подавляло размножение вирусов гриппа А и В на 1,8 - 5,5 lg. В опытах in vivo выявлена протективная активность исследованных водных экстрактов гастероидных грибов как в экстренно профилактической схеме, так и в лечебно-профилактической. Наибольший коэффициент защиты выявлен у экстракта, выделенного из сухого плодового тела гриба Lycoperdon pеrlatum, который составил 33,4 и 36,9 % в экстренно профилактической и лечебно- профилактической схемах соответственно.
противовирусная активность
токсичность
вирус гриппа В
вирус гриппа А
беспородные белые мыши
культура клеток MDCK
водные экстракты
плодовое тело
гастеромицеты
1. Белова Н. В. Перспективы использования биологически активных соединений высших базидиомицетов в России // Микология и фитопатология. - 2004. - Т. 38, №. 2. - С. 1-7.
2. Бурцева Е. И. Чувствительность к ремантадину и Арбидолу вирусов гриппа, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в России в сезоне 2004-2005 г. // Вопросы вирусологии. - 2007. - №. 2.- С. 24-29.
3. Все о грибах [Электронный ресурс] // сайт. - URL: http://www.vsegriby.com
4. Марченко В. Ю. Характеристика вируса гриппа субтипа H5N1, выделенного во время вспышки среди диких птиц в России (Республика Тыва) в 2010 г. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2011. - № 4. - С. 36-40.
5. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / [под ред. Л. С. Страчунского, Ю. Б. Белоусова, С. Н. Козлова]. - М.: Боргес, 2002. - 384 с.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / [под ред. Р. Ю. Хабриева]. - М.: Медицина, 2005. - 829 с.
7. Шестопалов А. М. Мониторинг гриппа у населения Западной Сибири в 2007-2009 гг. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2010. - №. 6. - С. 26 -30.
8. Lindequist U., Niedermeyer T. H. J., Julich W.-D. Pharmacological Potential of Mushrooms // Evid. Based Complement Altern. Med. - 2005. - Vol. 2, № 3. - P. 263-265.
Введение

В настоящее время по своей социальной значимости грипп занимает одно из лидирующих мест среди всех инфекционных болезней человека. Эволюция вируса гриппа продолжается, и постоянно возникают новые антигенные варианты, которые вызывают ежегодные эпидемии этого заболевания. Кроме этого, внезапно появляются штаммы, к которым нет иммунитета у большинства людей, результатом являются пандемии.

Для специфической профилактики и лечения гриппозной инфекции известны две группы препаратов, обладающих доказанной клинической эффективностью: блокаторы М2-каналов (амантадин и  ремантадин), активные только в отношении вируса гриппа А,  и ингибиторы вирусной нейраминидазы (занамивир и озельтамивир), используемые для лечения вируса гриппа А и В [5]. В России также используется созданный на основе отечественных разработок арбидол, обладающий   интерферониндуцирующими и иммуномодулирующими свойствами и усиливающий фагоцитарную функцию макрофагов [2]. Полагают, что арбидол препятствует слиянию липидной оболочки вируса с клеточными мембранами, однако точный механизм противовирусного действия препарата пока не установлен. Следует также отметить, что рандомизированных исследований арбидола не проводилось, есть только  опыт клинического применения, который свидетельствует о его эффективности и хорошей переносимости. В целом, опыт применения противовирусных препаратов указывает на необходимость использования комбинации нескольких лекарственных средств для повышения эффективности лечения вирусной инфекции и устранения возможности появления резистентных вариантов вирусов. Поэтому  вопрос о необходимости разработки и поиска новых лекарственных средств защиты от гриппозной инфекции, включающих как профилактические, так и лечебные препараты, представляется крайне важным и особо актуальным.

В последние годы внимание исследователей во многих странах направлено на изучение возможности использования в качестве источника биологически активных и лечебных веществ высших грибов - базидиомицетов [1; 8]. Лекарственные свойства некоторых базидиомицетов, включая гастеромицеты, известны давно. Так, в народной медицине Индии и Китая, начиная с 17 века,  водные и спиртовые настойки из высушенных или свежих плодовых тел гастеромицетов используют при гастритах, почечных заболеваниях, для лечения кожных ран, язв, корост, а также в качестве противовоспалительного средства. В Венгрии грибы гастеромицеты применяют при лечении подагры и ревматизма. Мазь из веселки обыкновенной применяют и в официальной медицине при ревматизме [3].

В настоящей работе проведено исследование токсических и противовирусных свойств водных экстрактов высших грибов группы порядков гастеромицеты в отношении вируса гриппа А (субтипов H1N1, H3N2, H5N1) и вируса гриппа В in vitro и in vivo.

Материалы и методы

Экспериментальные образцы грибных экстрактов.  В работе использовали водные экстракты из следующих грибов гастеромицетов: Lycoperdon pеrlatum, Battarrea phalloides, Dictyophora duplicate, Gastrosporium simplex, Geastrum fimbriatum, Calvatia lilacina, Chlorophyllum agaricoides, Lycoperdon utriforme, Lycoperdon umbrinum. Для приготовления образцов грибных экстрактов сухие плодовые тела грибов смешивали  с дистиллированной водой в соотношении 1:50, выдерживали на кипящей водяной бане в течение 6 часов, затем фильтровали через тканевый фильтр.

Культура клеток. Для определения токсичности и противовирусной активности грибных экстрактов использовали перевиваемую линию клеток почки собаки кокер-спаниеля MDCK, полученную из коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». Клеточную суспензию разводили предварительно подогретой до температуры 37 ºC средой RPMI-1640 (ООО «БиолоТ» г. Санкт-Петербург), содержащей 5 % сыворотки крови плодов коровы (ООО «БиолоТ» г. Санкт-Петербург), до концентрации 1,0-1,5×105 клеток/мл и вносили по 100 мкл/лунку 96-луночного планшета. Затем планшеты с клетками помещали в термостат при температуре 37 ºC, 5 % СО2 и 100 % влажности на 2-3 сут до образования клеточного монослоя.

Вирусы. В работе использовали штамм вируса гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и адаптированный к лабораторным мышам штамм вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2), полученные из отдела «Коллекция микроорганизмов» ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» и наработанные на 10-суточных развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ) в отделе профилактики и лечения ООИ ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» [3]. Кроме того, в работе были использованы штаммы вируса гриппа человека: A/Novosibirsk/129k/2011 (H1N1), B/ Novosibirsk/91k/2011 и B/Novosibirsk/SJ/2011, полученные и выделенные на культуре клеток MDCK сотрудниками отдела зоонозных инфекций и гриппа ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» из мазков больных, жителей г. Новосибирска: от женщины 1987 г. р., начало заболевания 08.02.2011 г.; от девочки 1998 г. р., начало заболевания 29.01.2011 г.; от девочки 6 лет, начало заболевания 09.01.2011 г. соответственно [4; 7].

Определение токсичности экстрактов грибов in vitro. Для определения токсических доз образцы грибных экстрактов разводили в несколько раз (в 2 раза, 5 раз, в 10, 100, 1000, 10000 раз) средой RPMI-1640, содержащей 5 % сыворотки крови плодов коровы, вносили на монослой клеток MDCK по 100 мкл/лунку планшета и ставили в термостат при температуре 37 ºC, 5 % СО2 и 100 % влажности. Наличие или отсутствие токсического действия экстрактов грибов на монослой клеток MDCK оценивали с помощью инвертированного микроскопа через 2 сут [6].

Определение токсичности экстрактов грибов in vivo. Для определения токсических доз грибных экстрактов в опытах на беспородных белых мышах массой 14-16 г полученные образцы разводили дистиллированной водой (в 2 раза, 5, 10, 50, 100 раз). В субхроническом эксперименте на беспородных белых мышах обоего пола испытывали влияние экстрактов грибов на общее состояние животных. Образцы вводили перорально (по 200 мкл/мышь) 1 раз в сутки в течение 5 дней. За животными наблюдали в течение 30 дней. Затем проводили взвешивание мышей  в опыте и контроле, а также взвешивание внутренних органов животных опытных и контрольных групп: тимуса, селезенки, печени [6].

Определение противовирусной активности экстрактов грибов in vitro. В исследованиях по определению противовирусной активности грибных экстрактов  использовали их максимально переносимые концентрации (МПК). Готовили разведения вируссодержащей жидкости от 1 до 8 с десятикратным шагом на среде RPMI-1640, содержащей 2 мкг/мл трипсина. Для определения противовирусной активности грибных экстрактов в профилактической схеме на монослой культуры клеток MDCK вносили образцы в объеме 50 мкл/лунку в максимально нетоксичной концентрации, после инкубирования клеток при температуре 37 °С в атмосфере 5 % CO2 в течение 1 ч вносили разведения вируссодержащей жидкости в объеме 50 мкл/лунку и вновь инкубировали клетки в течение 2-3 суток при температуре 37 °С в атмосфере 5 % CO2. По окончании инкубирования клеток регистрировали цитопатическое действие вируса (ЦПД) в монослое клеток с помощью инвертированного микроскопа и определяли наличие вируса в среде культивирования по реакции гемагглютинации (РГА) с 1 % эритроцитами петуха [6].

Определение протективных свойств экстрактов гастеромицетов в отношении вируса гриппа А в опытах in vivo. В опытах по изучению протективных свойств экстрактов в отношении вируса гриппа А использовали следующие схемы: экстренно профилактическую - экстракты вводили перорально мышам (по 200 мкл/мышь) через час после заражения вирусом гриппа А/Aichi/2/68 (H3N2) в дозе (10 ЛД50~ 3,6 lg ТЦД50), далее экстракты вводили 1 раз в сутки в течение 5 суток; лечебно-профилактическую - экстракты вводили перорально мышам (по 200 мкл/мышь) за час до заражения вирусом гриппа А/ Aichi/2/68 (H3N2) (10 ЛД50~ 3,6 lg ТЦД50), далее экстракты вводили 1 раз в сутки в течение 5 суток. За животными наблюдали в течение 14 суток. Высчитывали процент выживаемости животных в опыте и контроле, коэффициент защиты (КЗ) и среднюю продолжительность жизни (СПЖ) мышей. КЗ высчитывали по формуле: % гибели мышей в контроле - % гибели мышей в опыте .

Результаты и обсуждение

Цитотоксическое действие экстрактов гастеромицетов на клетки MDCK. Установлено, что 50 %-я цитотоксическая доза (ТС50) экстрактов, полученных из плодовых тел грибов гастеромицетов, составляла от 0,2 до 1,3 мг/мл для разных образцов (табл. 1).

Изучение цитотоксического действия экстрактов грибов гастеромицетов в опытах на беспородных белых мышах. При наблюдении за мышами в течение и после курса введения экстрактов грибов в опытах при оценке хронической токсичности, отклонений во внешнем виде, состоянии шерстного покрова, характере выделений, поведении не выявлено. Введение экстрактов не влияло на прибавку массы тела животных в опыте по сравнению с контролем. Проведенный морфометрический анализ не обнаружил отличий в относительной массе внутренних органов у беспородных белых мышей в опытных и контрольной группах.

Изучение протективных свойств экстрактов грибов гастеромицетов в отношении вирусов гриппа А и В in vitro. Для оценки противовирусной активности грибных экстрактов в опытах использовали их нетоксические дозы. Данные противовирусной активности грибных экстрактов в отношении вирусов гриппа А и В приведены в табл. 1 и 2.  Представленные результаты показывают, что экстракты грибов весьма эффективно подавляют размножение трех штаммов вируса гриппа А и двух штаммов вируса гриппа В в культуре клеток. Индексы нейтрализации (ИН) вируса гриппа птиц A/chiken/Kurgan/05/2005 (H5N1) для большинства образцов составляли 1,1 - 3,0 lg, ИН вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2) составляли 1,0-2,5 lg, а ИН изолята A/Novosibirsk/129k/2011 (H1N1), выделенного от больного человека в Новосибирске, грибными экстрактами были наибольшими из всех использованных в работе вирусов гриппа А и составляли 1,8-4,8 lg (табл. 1). Изучение противовирусной активности экстрактов гастеромицетов  в отношении вирусов гриппа В показало, что эта противовирусная активность существенно превосходит активность экстрактов в отношении вирусов гриппа А (ИН изолята B/Novosibirsk/SJ/2011составляли 2,7-3,3 lg для всех исследованных образцов, а ИН другого изолята B/Novosibirsk/91k/2011 для всех экстрактов были наибольшими в настоящей работе и составляли 4,5-5,5 lg) (табл. 2). Важно, что экстракты (Lycoperdon pеrlatum № 10-47, Battarrea phalloides № 10-49 и Lycoperdon umbrinum № 10-58), обнаружившие наибольшую противовирусную активность в отношении всех использованных в исследовании вирусов гриппа, обладали низкой токсичностью для эукариотических клеток. 

Изучение протективных свойств экстрактов грибов гастеромицетов в отношении вируса гриппа А в опытах на беспородных белых мышах. В опытах in vivo, проведенных по лечебно-профилактической схеме, введение мышам экстрактов №№ 10-47, 10-48 и 10-58 до заражения вирусом гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2) и после заражения в течение 5 суток вызывало значительную защиту животных  (83,4, 66,8 и 49,8 % соответственно). В инфицированной группе сравнения (введение Тамифлю) и контрольной инфицированной группе (введение дистиллированной воды) выжило 100 и 50 % животных, соответственно. Наибольший коэффициент защиты, который составлял 33,4 %, проявил экстракт, выделенный из гриба Lycoperdon pеrlatum (табл. 3). При экстренно профилактической схеме использования экстрактов гастеромицетов на лабораторных мышах установлено, что процент выживаемости животных составлял от 35,0 до 61,0 % (100,0 и 24,1 % - при введении Тамифлю и дистиллированной воды соответственно), а коэффициент защиты варьировал в опыте от 10,9 до 36,9 % (КЗ для Тамифлю составил 75,9 %) (табл. 3). При экстренно профилактической схеме на лабораторных животных, как и при лечебно- профилактической, наибольшей противовирусной активностью обладал экстракт на основе гриба Lycoperdon pеrlatum (табл. 3).

Таблица 1 Противовирусная активность экстрактов гастеромицетов в клетках MDCK, зараженных вирусом гриппа А (профилактическая схема)

Образец

Концентрация сухого вещества в экстракте, мг/мл

Токсичность для культуры клеток MDCK (ТС50), мг/мл

Инфекционность вируса (титр) в клетках MDCK  в lg ТЦД50/мл (М±I95, n=3)

Индекс нейтрализации

(Титр контроль - Титр опыт), lg

Наименование

№№

A/Aichi/ 2/68

(H3N2)

A/chiken/Kurgan

/05/2005  

(H5N1)

A/Novosibirsk

/129k/2011

(H1N1)

A/Aichi/

2/68 (H3N2)

A/chiken/Kurgan

/05/2005 

(H5N1)

A/Novosibirsk

/129k/2011

(H1N1)

Lycoperdon pеrlatum

10-47

 

2,5

0,6

1,8 ± 0,7*

4,8 ± 0,7#

2,0 ± 0,4@

2,5

3,0

2,8

Lycoperdon pеrlatum

10-48

1,5

0,4

2,8 ± 0,4*

5,8 ± 1,2

3,0 ± 0,3@

1,5

2,0

1,8

Battarrea phalloides

10-49

1,5

0,2

2,8 ± 0,5*

6,5 ± 0,7

0@

1,5

1,3

4,8

Dictyophora duplicata

10-50

2,5

0,6

1,8 ± 0,7*

5,8 ± 1,2

3,0 ± 0,3@

2,5

2,0

1,8

Gastrosporium simplex

10-51

 

0,5

0,3

3,8 ± 0,5

6,0 ± 0,2#

0@

0,5

1,8

4,8

Geastrum fimbriatum

10-52

 

0,5

0,3

3,8 ± 1,0

6,7 ± 1,1

3,0 ± 0,3@

0,5

1,1

1,8

Lycoperdon pratense

10-53

1,0

0,5

3,3 ± 0,5

6,0 ± 0,2#

3,0 ± 0,3@

1,0

1,8

1,8

Lycoperdon umbrinum

10-54

 

1,0

0,5

3,3 ± 0,5

7,5 ± 0,9

3,0 ± 0,3@

1,0

0,3

1,8

Calvatia lilacina

10-55

1,0

0,5

3,3 ± 1,0

5,8 ± 1,0

3,0 ± 0,3@

1,0

2,0

1,8

Chlorophyllum agaricoides

10-56

 

2,5

1,3

1,8 ± 0,5*

5,7 ± 0,9

3,0 ± 0,3@

2,5

2,1

1,8

Lycoperdon utriforme

10-57

 

1,0

0,2

3,3 ± 1,2

7,6 ± 0,7

3,0 ± 0,3@

1,0

0,2

1,8

Lycoperdon umbrinum

10-58

2,5

0,3

1,8 ± 0,4*

6,0 ± 0,7

3,0 ± 0,3@

2,5

1,8

1,8

Примечание: М-среднее арифметическое, I95-ошибка среднего, * титр вируса А/ Aichi/2/68 в опытах отличается от титра в контроле (4,3±0,5 lg ТЦД50/мл) по t-критерию Стьюдента при р ≤ 0,05; #-титр вируса A/chiken/Kurgan/05/2005 в опытах отличается от титра в контроле  (7,8±1,0 lg ТЦД50/мл) по t-критерию Стьюдента при р ≤ 0,05; @-титр вируса A/Novosibirsk/129k/2011 в опытах отличается от титра в контроле (4,8±0,49 lg ТЦД50/мл) по t-критерию Стьюдента при р ≤ 0,05; n-число экспериментов.

Таблица 2

Противовирусная активность экстрактов грибов гастеромицетов в культуре клеток MDCK, зараженных вирусом гриппа В (профилактическая схема)

Образец

Инфекционность вируса (титр КВЖ) в клетках MDCK  в lg ТЦД50/ мл

(М±I95, n=3)

Индекс нейтрализации

(Титр контроль - Титр опыт), lg

Наименование

№№

B/ Novosibirsk/

91k/2011

B/Novosibirsk/

SJ/2011

B/Novosibirsk/

91k/2011

B/Novosibirsk/SJ/2011

Lycoperdon pеrlatum

10-47

0*

0@

5,5

3,3

Lycoperdon pеrlatum

10-48

0,53±0,07*

0,24±0,10@

5,0

3,0

Battarrea phalloides

10-49

0,53±0,07*

0,24±0,10@

5,0

3,0

Dictyophora duplicata

10-50

0,70±0,05*

0,43±0,07@

4,8

2,8

Gastrosporium simplex

10-51

0,33±0,08*

0,24±0,10@

5,2

3,0

Geastrum fimbriatum

10-52

0,33±0,08*

0,24±0,10@

5,2

3,0

Lycoperdon pratense

10-53

0,43±0,07*

0,24±0,10@

5,1

3,0

Lycoperdon umbrinum

10-54

0*

0@

5,5

3,3

Calvatia lilacina

10-55

0,43±0,07*

0,24±0,10@

5,1

3,0

Chlorophyllum agaricoides

10-56

 

0,33±0,08*

0,24±0,10@

5,2

3,0

Lycoperdon utriforme

10-57

1,03±0,38*

0,53±0,07@

4,5

2,7

Lycoperdon umbrinum

10-58

0*

0@

5,5

3,3

Примечание: М - среднее арифметическое, I95 - ошибка среднего, n - число опытов; * - титр вируса B/ Novosibirsk/91k/2011 в опытах достоверно отличается от титра вируса в контроле (без экстрактов) (5,5 ± 0,4 lg ТЦД50/мл) по t-критерию Стьюдента при р ≤ 0,05;   @  - титр вируса B/ Novosibirsk/SJ/2011 в опытах достоверно отличается от титра вируса в контроле (без экстрактов) (3,25 ± 0,38 lg ТЦД50/мл) по t-критерию Стьюдента при р ≤ 0,05.

Заключение

Таким образом, водные экстракты плодовых тел гастеромицетов малотоксичны для линии клеток MDCK и лабораторных мышей, а также способны ингибировать репликацию вирусов гриппа А и В как штаммов прошлых лет, так и недавно выделенных изолятов от больных, на культуре клеток MDCK, а также частично защищать лабораторных животных от заражения летальной дозой вируса гриппа. Это позволяет говорить о хорошей перспективе использования водных экстрактов высших грибов - гастеромицетов как основы для разработки противогриппозных препаратов.

Таблица 3

Протективные свойства экстрактов гастеромицетов в отношении вируса гриппа  А/Aichi/2/68 (H3N2) в экспериментах на лабораторных мышах

Образец

Показатели защиты животных при

(n=10)

 лечебно-профилактической схеме

экстренно профилактической  схеме

Наименование

№№

Выживаемость, %

КЗ, %

СПЖ, сутки

(М± Sm)

Выживаемость, %

КЗ, %

СПЖ,

сутки

(М± Sm)

Lycoperdon pеrlatum

10-47

83,4*

33,4

 

10,5±0,8

 

61,0$

36,9

13,5±0,3§

Battarrea phalloides

10-49

66,8*

 

16,8

10,0±0,8

44,0$

 

19,9

10,6±0,6

 

Dictyophora duplicate

10-50

н.и.

 

н.и.

 

н.и.

60,0$

35,9

10,8±0,5

Lycoperdon umbrinum

10-54

н.и.

 

н.и.

 

н.и.

35,0

10,9

10,0±0,6

 

Lycoperdon umbrinum

10-58

49,8

 

-

-

40,0$

 

15,9

10,3±1,3

 

Тамифлю (контроль)

-

100,0*

50,0

14,0#

100,0$

75,9

14,0§

Контроль вируса

(без препарата)

-

50,0

-

9,2±1,0

24,1

-

9,7±0,7

Примечание: М - среднее арифметическое, Sm - стандартное отклонение, n-число животных в группе; КЗ - коэффициент защиты; СПЖ - средняя продолжительность жизни; н.и. - не исследовали; * и $ - отличие от соответствующего контроля по критерию χ2; # и § - отличие от соответствующего контроля по U-критерию Манна-Уитни при p≤0,05.

Рецензенты:

  • Трошкова Галина Павловна, д.б.н., профессор, заведующая сектором биохимии отдела профилактики и лечения ООИ, Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, г. Кольцово.
  • Белявская Валентина Александровна, д.б.н., профессор, заведующая сектором отдела научно-методической подготовки персонала по работе с возбудителями ООИ, Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, г. Кольцово.

Библиографическая ссылка

Макаревич Е.В., Ибрагимова Ж.Б., Косогова Т.А., Курская О.Г., Мазурков О.Ю., Ильичева Т.Н., Теплякова Т.В., Мазуркова Н.А. ИММУНОГЕННЫЕ И ПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТОВ ВЫСШИХ ГРИБОВ ГРУППЫ ПОРЯДКОВ ГАСТЕРОМИЦЕТЫ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСОВ ГРИППА А И В // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 4. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=6823 (дата обращения: 27.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074