Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ВОЗМОЖНОСТИ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИИ В ОЦЕНКЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК КРОВИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ

Скорняков С.Н. 1 Медвинский И.Д. 1 Бердюгина О.В. 2, 1 Павлов В.А. 1 Ершова А.В. 1 Сабадаш Е.В. 1
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Уральский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»
2 Федеральное бюджетное учреждение науки «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промышленных предприятий Ропотребнадзора»
Согласно современным представлениям фагоцит является ключевым звеном в защите организма от микобактерий туберкулеза. Целью работы стало изучение возможностей проточной цитофлюориметрии в оценке фагоцитарной активности клеток при туберкулезе легких. Обследовали 39 человек: 14 – с инфильтративной формой туберкулеза, 15 – с туберкуломой, 10 практически здоровых людей. В работе использовали прибор CoulterEpicsXL, реагенты Phagotest (Orpegen Pharma), BurstTestKit (Glycotope Biotechnology) и моноклональные антитела для определения субпопуляций лимфоцитов. Статистическая обработка проведена с использованием программы Statisticа. Установлено, что оценка фагоцитарной активности клеток является важным критерием определения активности туберкулеза легких на ранних стадиях наблюдения и в процессе лечения, проточная цитофлюориметрия позволяет быстро, точно и объективно оценить фагоцитарную активность клеток крови, маркеры ранней активации клетки могут отражать активность патологического процесса и использоваться для прогнозирования течения туберкулеза легких.
фагоцитарная активность моноцитов
фагоцитарная активность нейтрофилов
туберкулез
1. Аксенова, В. А. Диагностические возможности определения специфических изменений фагоцитарной активности лейкоцитов крови у детей при первичной вакцинации БЦЖ и туберкулезной инфекции [Текст] / В. А. Аксенова, И. П. Корюкина, Л. П. Санакоева, Л. А. Фокина // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2004. - № 4. - С.48-55. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=118257)
2. Аксенова, В. А. Новые возможности применения фагоцитарного теста во фтизиопедиатрии [Текст] / В. А. Аксенова, И. П. Корюкина, В. А. Черешнев, Л. П. Санакоева // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2004. - №6. - С.42-48. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=115868)
3. Вольф, С. Б. Показатели иммунорезистентности у больных туберкулезом с наличием факторов риска [Текст] / С. Б.Вольф, И. С.Гельберг, Е. Н. Кроткова [и др.] // Иммунопатология Аллергология Инфектология. - 2004. - №2. - С.105-110. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=111324)
4. Ерохин, В. В. Особенности макрофагальной формулы бронхоальвеолярного смыва у больных деструктивным туберкулезом легких [Текст] / В. В. Ерохин, Л. Н. Лепеха, О. В. Ловачева [и др.] // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2003. - №12. - С.17-21. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=107566)
5. Литвинов, В. И. Иммунология туберкулеза: современное состояние проблемы [Текст] / В. И. Литвинов, Б. В. Никоненко В. Я. Гергерт [и др.] // Вестник Российской Академии медицинских наук. - 1999. - №7. - С.8-11. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=36012)
6. Мамедбеков, Э. Н. Оценка специфичности и чувствительности предикторов послеоперационных осложнений у больных деструктивным туберкулёзом лёгких [Текст] / Э. Н. Мамедбеков, К. А. Алиев, Р. Р. Шукюрова //Туберкулёз и болезни лёгких. - 2010. - Т.87. - №12. - С.25-28.
7. Мишин, В. Ю. Особенности иммунологических показателей у больных с различными формами туберкулеза легких [Текст] / В. Ю. Мишин, Е. В. Костенко, В. А. Стаханов [и др.] // Иммунология. - 2005. - № 1. - С.45-49. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=120782)
8. Новицкий, В. В. Функциональная активность фагоцитирующих клеток крови при туберкулезе легких [Текст] / В. В. Новицкий, Т. А. Лукьянова, А. К. Стрелис [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - №1. - С.79-81. (http://www.fesmu.ru/elib/Article.aspx?id=142354)
Согласно современным представлениям во фтизиатрии, фагоцит является ключевым звеном в защите организма от микобактерий туберкулеза [5]. Многочисленные исследования последних лет посвящены роли фагоцитирующих клеток в механизмах устойчивости к туберкулезу [2, 4, 7, 8]. Однако многие вопросы, связанные с неполноценностью фагоцитарной защиты от микобактерий туберкулеза, разнонаправленностью иммунного ответа на инфекцию, так и остались открытыми.

Большинство работ по изучению активности фагоцитов крови при туберкулезе проводились давно - в 70-е - 80-е годы прошлого века. Параметры фагоцитоза при этом оценивались на основании использования двух основных тестов. Первый позволял определять функциональную активность клеток по ее способности связывать на своей поверхности, поглощать и переваривать микробную тест-культуру [3], второй - характеризовал метаболические особенности клетки при выявлении продукции супероксиданиона в реакции с нитросиним тетразолием в двух вариантах: спонтанном и стимулированном стафилококком или частицами латекса [1]. Несмотря на широкую распространенность, недостатком обеих методик остается субъективность микроскопического учета результата, вопросы стандартизации условий проведения, необходимость работы с живой микробной культурой, а также небольшое количество клеток, исследуемое данным методом (обычно не более 100).

В последнее время появились новые методы определения состояния фагоцитов, позволяющие провести независимую оценку большого количества клеток - до миллиона - в ходе проведения одного анализа.

Целью данной работы стало изучение возможностей проточной цитофлюориметрии в оценке фагоцитарной активности клеток крови при туберкулезе легких.

Материал и методы исследования

Проведено проспективное исследование 39 человек, которые были распределены на три группы. Две из них проходили лечение в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Уральский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» города Екатеринбурга (директор - докт. мед. наук С. Н. Скорняков): I группа - 14 человек с впервые выявленным диагнозом инфильтративный туберкулез и локализацией процесса в пределах одной доли легкого, II группа - 15 пациентов с впервые выявленным диагнозом туберкулез легкого, сопровождавшийся формированием туберкуломы (ограниченный патологический процесс). В первой и второй группе заболевание вызывалось, в том числе лекарственно, устойчивыми штаммами микобактерий туберкулеза. На момент обследования пациенты не имели острой сопутствующей патологии, хроническая находилась в стадии ремиссии. III группа (контрольная) состояла из 10 практически здоровых людей - доноров крови. Все три группы были сопоставимы по возрасту (21 - 73 года) и гендерному распределению, а также прошли стандартное клинико-рентгенологическое и лабораторное обследование согласно порядку оказания медицинской помощи больным туберкулезом (Приказ Минздравсоцразвития России №1224н от 29 декабря 2010 г. «Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи больным туберкулезом в Российской Федерации»).

Кровь для анализа бралась однократно утром натощак из локтевой вены. В качестве антикоагулянта использовали ЭДТА (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), для оценки фагоцитарной активности использовали литий-гепарин. Экспрессия поверхностных антигенов и фагоцитарная способность клеток оценивались сразу после взятия крови.

Субпопуляции лимфоцитов определялись методом проточной цитофлюориметрии на приборе COULTER®Epics®XL (Beckman Coulter, USA), при помощи моноклональных антител той же фирмы. Лизис эритроцитов осуществлялся с использованием автоматической станции пробоподготовки Coulter® Q-Prep (Beckman Coulter, USA). Подсчет абсолютного числа клеток проводили с применением флуоросфер Flow-Count (Beckman Coulter, USA). Контроль качества осуществляли с помощью калибровочных частиц Flow-Check (Beckman Coulter, USA). Для исключения аутофлюоресценции образцов использовали изотипический контроль IgG1-FITC/IgG1-PE (Beckman Coulter, USA). Для детекции лейкоцитов применяли линейный дифференцировочный маркер CD45+ (кластер дифференцировки). Подсчитывали общее количество Т-лимфоцитов (CD45+CD3+), число Т-цитотоксических клеток (CD45+CD3+CD8+), Т-хелперов (CD45+CD3+CD4+), TNK-клеток (CD45+CD3+CD16+56+), определяли количество В- (CD45+CD19+) и NK-клеток (CD45+CD3-CD16+56+). Рассчитывали иммунорегуляторный индекс (CD4+/CD8+). На Т-лимфоцитах также оценивали экспрессию маркеров активации с использованием меток CD25+ и СD HLA-DR+. Поглотительную способность нейтрофилов и моноцитов оценивали методом проточной цитофлюориметрии согласно инструкциям, прилагаемым к наборам Phagotest® (производства ORPEGEN Pharma, BD Bioscience) и BurstTest Kit - PhagoBurst (Glycotope Biotechnology, GmbH), в состав которых входили FITC-меченые (флюоресцеин изотиоционат) опсонизированные бактерии (E. coli). Измерялось общее количество фагоцитирующих моноцитов и гранулоцитов (поглощение одной или более бактерий одной клеткой).

Статистическая обработка результатов проведена с использованием программы Microsoft Excel 2007 (Microsoft® Windows® XP Professional, USA) и программы «STATISTICА» v. 6.0 (StatSoft, USA). Вычисляли основные статистические константы, совокупность данных представляли в виде среднего значения (1), 1 и 3 квартили (2), минимального (3) и максимального значения (4), а также медианы (5). Ввиду наличия малой выборки в исследовании проверку статистических гипотез осуществляли с использованием непараметрических методов (критерий Манна - Уитни, Колмогорова - Смирнова и Вальда - Вольфовица), уровень значимости принимался равным р<0,001.

Результаты исследования и их обсуждение

Известно, что микобактерии туберкулёза не выделяют какой-либо экзотоксин, который мог бы стимулировать фагоцитоз, поэтому реакция микро- и макрофагов отмечается, когда концентрация возбудителя увеличивается значительно [6]. В таких условиях она не является адекватной, так как бактерицидный потенциал клеток недостаточно высокий. Подобное снижение числа нейтрофильных гранулоцитов отмечалось нами у больных, как с инфильтративной формой туберкулеза, так и у пациентов с туберкуломами (табл. 1).

Таблица 1

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ОБСЛЕДОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ

Группы больных

Гранулоциты, %

Гранулоциты, 109

Фаготест

Бурсттест Е.соli

Фагоцитирующие гранулоциты, %

Фагоцитирующие гранулоциты, 109

Фагоцитирующие гранулоциты, %

Фагоцитирующие гранулоциты, 109

I группа

n=14

60,571

(57,20-69,80)2

34,383

71,794

61,005

р<0,0001

4,44

(3,29-5,75)

1,62

7,24

4,26

р<0,0001

74,02

(59,20-92,10)

28,80

96,80

84,40

р<0,0001

3,25

(1,88-4,88)

0,60

5,90

3,04

р<0,0001

97,03

(96,35-97,35)

96,10

98,70

96,80

р<0,001

4,86

(3,63-5,69)

1,90

9,31

4,84

р<0,0001

II группа

n=15

57,15

(51,04-62,75)

41,69

72,08

54,88

р<0,0005

3,57

(2,70-4,34)

1,76

6,94

3,64

р<0,0001

72,87

(61,00-93,20)

8,10

99,70

84,00

р<0,0001

2,78

(1,77-3,88)

0,23

5,83

2,84

р<0,0001

60,87

(31,30-93,80)

24,10

98,20

61,70

р<0,0001

2,20

(0,99-3,50)

0,67

4,74

1,72

р<0,0001

III группа n=10

 

59,13

(53,74-65,25)

44,00

70,00

59,35

4,54

(3,15-5,49)

2,33

8,48

3,66

90,38

(85,73-96,98)

72,70

97,60

93,95

4,10

(2,65-5,14)

2,19

7,08

3,49

72,59

(46,80-97,58)

17,10

99,60

88,40

3,45

(1,84-4,50)

0,53

8,45

3,04

Где 1 - среднее значение, 2 - 1 и 3 квартили, 3 - минимальное значение, 4 - максимальное значение, 5 - медиана.

В частности, у пациентов II группы число нейтрофилов снижалось на 57,1 %, при инфильтративном туберкулезе - на 49,8 %. Понижался также фагоцитарный потенциал клеток: число фагоцитирующих нейтрофилов у пациентов II группы уменьшалось в 2,5 раза в фаготесте и в 4,9 раза в бурсттесте. Похожая картина отмечалась и у пациентов с инфильтративным туберкулезом: число фагоцитирующих нейтрофилов в фаготесте было ниже в 2,3 раза, в бурсттесте - в 1,7 раза в сравнении с данными у здоровых людей (табл. 1).

Вторым этапом взаимодействия между микобактериями туберкулеза и организмом является участие в патологическом процессе макрофагов (табл. 2).

Таблица 2

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ МОНОЦИТОВ ОБСЛЕДОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ

Группы больных

Моноциты, %

Моноциты, 109

Фаготест

Бурсттест Е.соli

Фагоцитирующие моноциты, %

Фагоцитирующие моноциты, 109

Фагоцитирующие моноциты, %

Фагоцитирующие моноциты, 109

I группа

n=14

8,971

(7,02-10,45)2

5,793

13,384

8,805

0,65

(0,47-0,81)

0,18

1,18

0,60

р<0,0001

55,65

(45,80-61,50)

30,40

76,30

59,70

р<0,0001

0,36

(0,19-0,43)

0,12

0,70

0,39

р<0,0001

55,63

(51,30-68,20)

13,00

72,50)

54,50

р<0,0001

0,34

(0,24-0,42)

0,13

0,71

0,29

р<0,01

II группа

n=15

8,53

(7,34-9,54)

4,49

14,50

8,19

0,51

(0,41-0,60)

0,26

0,83

0,48

р<0,01

55,63

(41,60-68,50)

22,00

99,00

55,30

р<0,0001

0,28

(0,19-0,33)

0,11

0,65

0,26

р<0,0001

48,96

(20,95-75,85)

12,10

93,90

49,50

р<0,0001

0,23

(0,12-0,34)

0,06

0,44

0,23

р<0,0001

III группа

n=10

 

6,91

(5,95-10,00)

2,00

10,00

7,00

0,51

(0,36-0,85)

0,16

0,85

0,45

65,12

(57,20-76,55)

39,30

81,80

63,80

0,34

(0,22-0,46)

0,09

0,69

0,29

64,22

(55,43-91,70)

29,80

91,70

65,80

0,35

(0,17-0,50)

0,09

0,71

0,30

Где 1 - среднее значение, 2 - 1 и 3 квартили, 3 - минимальное значение, 4 - максимальное значение, 5 - медиана.

Синтез микобактериями сульфатов и факторов вирулентности приводит к нарушению функций лизосом, что вызывает поврежедния макрофагов. В отличие от ранее описанной реакции нейтрофильных фагоцитов, число которых понижалось, количество моноцитов у больных туберкулезом, напротив, увеличивалось (табл. 2). В большей степени такая картина отмечалась у пациентов I группы - в среднем на 33,0 %, но была выявлена и при ограниченном процессе (6,5 %). По данным фаготеста и бурсттеста отмечались однонаправленные изменения у пациентов с туберкуломами - в фаготесте регистрировалось снижение количества фагоцитирующих клеток на 11,5 %, в бурсттесте - на 24,8 %. Другая картина при оценке фагоцитоза была выявлена у больных с инфильтративным туберкулезом: увеличение фагоцитарной активности наблюдалось в 1,3 раза в фаготесте и снижение на 17,2 % в бурсттесте (табл. 2). Вполне вероятно, что обнаруженные различия связаны со стадией патологического процесса.

Следующими в развитие патологического процесса вовлекаются лимфоциты (табл. 3). Интерлейкин-1, выделяемый активированными макрофагами, инициирует Т-лимфоциты, прежде всего Т-хелперы (CD4+), которые вместе с цитотоксическими Т-лимфоцитами (CD8+) сенсибилизируются, выделяя хемотоксины, гамма-интерферон и интерлейкин-2, стимулирующие миграцию макрофагов, их бактерицидную активность и увеличивая популяцию B-лимфоцитов.

Таблица 3

ОСНОВНЫЕ СУБПОПУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ ОБСЛЕДОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ

Группы больных

Лейкоциты, 109

Лимфоциты, %

Лимфоциты, 109

Т-тимфоциты

(CD45+СD3+), %

Т-тимфоциты

(CD45+СD3+), *109

B-лимфоциты (CD45+СD19+), %

B-лимфоциты (CD45+СD19+), *109

NK-клетки

(СD3-СD(16+56)+), %

NK-клетки

(СD3-СD(16+56)+), *109

I группа

n=14

7,171

(6,10-8,70) 2

2,903

10,304

7,405

р<0,0001

30,43

(24,00-33,20)

17,49

51,62

30,39

р<0,0001

2,08

(1,82-2,26)

0,80

3,45

2,04

р<0,0001

73,83

(72,60-77,40)

49,80

86,50

74,80

р<0,0009

1,50

(1,44-1,68)

0,61

2,15

1,48

р<0,0001

9,75

(6,70-11,50)

3,30

22,80

7,60

р<0,0001

0,20

(0,13-0,23)

0,07

0,51

0,17

р<0,0001

16,62

(9,00-19,60)

4,90

43,00

16,20

р<0,0001

0,39

(0,16-0,43)

0,06

0,15

0,32

р<0,0001

II группа

n=15

6,25

(4,80-7,40)

3,20

10,60

6,50

р<0,0001

34,27

(29,15-40,25)

19,69

52,08

34,09

р<0,0001

2,17

(1,26-3,03)

0,97

3,32

2,22

р<0,0001

80,00

(76,58-84,98)

61,40

88,10

81,05

1,60

(0,88-2,44)

0,75

2,92

1,27

р<0,0001

9,70

(5,03-13,80)

2,50

16,20

10,70

р<0,0001

0,17

(0,11-0,20)

0,06

0,43

0,15

р<0,0001

11,09

(7,55-12,65)

0,70

31,70

9,60

р<0,01

0,22

(0,10-0,33)

0,08

0,47

0,22

р<0,01

III группа

n=10

7,47

(5,83-8,63)

5,30

12,40

6,00

32,96

(28,00-37,47)

18,00

48,00

33,00

2,34

(1,98-2,80)

1,46

2,80

2,31

77,54

(69,30-83,60)

65,20

85,20

82,40

1,82

(1,45-2,04)

1,11

2,63

1,95

11,86

(8,80-15,80)

4,20

19,80

10,30

0,28

(0,18-0,32)

0,11

0,52

0,26

11,02

(6,80-25,20)

3,80

25,20

9,40

0,26

(0,12-0,36)

0,08

0,50

0,22

Где 1 -среднее значение, 2 - 1 и 3 квартили, 3 - минимальное значение, 4 - максимальное значение, 5 - медиана.

 

Очевидно, что в нашем случае, при недостаточной активации макрофагов фагоцитоз становится неэффективным. Клетки не контролируют размножение микобактерий, нарушается баланс в иммунной защите (табл. 3). В частности, отмечалось снижение числа лимфоцитов у больных с туберкуломами на 3,9 %, при инфильтративном туберкулезе - на 11,7 %, регистрировалось значительное уменьшение количества Т- и В-лимфоцитов (соответственно в I группе на 24,1 % и 34,6 %, во II группе - на 34,9 % и 42,2 %). Среди Т-лимфоцитов наиболее значимым оказалось снижение CD4+ и CD8+-клеток - в среднем на 24-25 % у всех больных (табл. 4).

Таблица 4

ОСНОВНЫЕ СУБПОПУЛЯЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ ОБСЛЕДОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ

Группы больных

Т-хелперы (СD3+СD4+), %

Т-хелперы (СD3+СD4+), 109

Т-цитотоксические клетки (СD3+СD8+), %

Т-цитотоксические клетки (СD3+СD8+), 109

Т-NK клетки СD3+СD(16+56)+, %

Т-NK клетки СD3+СD(16+56)+, 109

Иммунорегуляторный индекс CD4+/CD8+, отн. ед.

I группа

n=14

top 4,49

46,381

(39,70-51,40)2

35,003

57,404

74,305

р<0,0005

0,95

(0,81-1,08)

0,39

1,37

0,94

р<0,0001

25,60

(22,60-32,00)

13,50

39,90

25,80

р<0,002

0,52

(0,44-0,63)

0,21

0,94

0,47

р<0,0001

16,62

(9,00-19,60)

4,90

43,00

16,20

р<0,0005

0,39

(0,16-0,43)

0,06

1,52

0,32

р<0,0001

2,02

(1,30-2,40)

0,90

4,10

1,90

II группа

n=15

49,42

(43,15-56,53)

30,40

64,40

50,45

р<0,002

0,99

(0,57-1,31)

0,45

1,96

0,87

р<0,0001

27,86

(20,80-31,93)

16,20

40,60

28,25

р<0,0001

0,57

(0,30-0,91)

0,17

1,20

0,46

р<0,0001

11,09

(7,55-12,65)

0,70

31,70

9,60

р<0,01

0,22

(0,10-0,33)

0,01

0,47

0,22

р<0,01

1,98

(1,28-2,43)

0,90

3,90

1,85

III группа

n=10

46,30

(45,50-49,30)

32,10

60,20

46,40

1,07

(0,89-1,29)

0,68

1,32

1,16

29,60

(23,50-32,50)

18,50

45,50

31,50

0,71

(0,51-0,83)

0,36

1,41

0,62

11,02

(6,80-11,90)

3,80

25,20

9,40

0,26

(0,12-0,36)

0,08

0,50

0,22

1,69

(1,40-2,10)

0,80

2,60

1,60

Где  1 - среднее значение, 2 - 1 и 3 квартили, 3 - минимальное значение, 4 - максимальное значение, 5 - медиана.

 

Воспалительная реакция приобретала распространённый характер - лейкоцитоз увеличивался у больных с инфильтративной формой туберкулеза - в 1,3 раза (табл. 3).

Важной особенностью наблюдаемого явления стало увеличение числа NK- и TNK-клеток (табл. 3, 4). При этом у больных I группы нарастание касалось в одинаковой степени обеих популяций этих клеток - повышение отмечалось в среднем в 1,5 раза. У пациентов II группы в меньшей степени это касалось NK-клеток - повышение составило 2 % - и  в большей TNK-клеток - 1,7 раза.

В оценке маркеров активации Т-клеток нами было установлено, что большая роль принадлежала CD25+клеткам. Их количество соответственно увеличивалось в группах I и II в 4,9 и в 1,9 раза в сравнении с контрольной группой. Преобладание активированных клеток отмечалось при инфильтративной форме туберкулеза в пределах одной доли легких, что не может не отражать активности патологического процесса и, как следствие, может быть использовано для прогнозирования течения туберкулеза (табл. 5).

Маркеры поздней активации в сравнении с контрольной группой экспрессировались на клетках реже на 28 % у пациентов с туберкуломами и на 44 % - у больных с инфильтративным туберкулезом, что могло являться одной из причин снижения миграции фагоцитов в зону повреждения, так как только активированные клетки являются источником продукции медиаторов межклеточных взаимодействий (табл. 5). Эти данные также сопоставимы с результатами, характеризующими субпопуляционный состав лейкоцитов (табл. 3,4).

Таблица 5

АКТИВИРОВАННЫЕ Т-ЛИМФОЦИТЫ ОБСЛЕДОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ

Группы больных

Т-клетки с рецептором к IL-2 (СD3+СD25+), %

Т-клетки с рецептором к IL-2 (СD3+СD25+), 109

Т-клетки активированные (СD3+СDHLA-DR+), %

Т-клетки активированные (СD3+СDHLA-DR+), 109

I группа

n=14

4,641

(3,00-5,60)2

1,303

12,604

3,705

р<0,001

0,09

(0,05-0,12)

0,04

0,23

0,07

р<0,0001

2,98

(2,40-3,80)

0,60

5,40

3,00

р<0,03

0,06

(0,03-0,08)

0,01

0,12

0,07

р<0,0001

II группа

n=15

1,96

(1,05-1,80)

0,00

10,20

1,45

0,04

(0,01-0,05)

0,00

0,20

0,03

р<0,0001

0,78

(0,23-0,60)

0,00

5,10

0,45

р<0,0001

0,02

(0,01-0,02)

0,00

0,15

0,09

р<0,0001

III группа

n=10

 

0,83

(0,63-0,98)

0,20

2,00

0,75

0,02

(0,01-0,03)

0,01

0,04

0,02

1,12

(0,35-0,83)

0,00

5,70

0,50

0,03

(0,10-0,15)

0,00

0,18

12,50

Где 1 - среднее значение, 2 - 1 и 3 квартили, 3 - минимальное значение, 4 - максимальное значение, 5 - медиана.

Таким образом, получены данные, позволяющие сделать заключение о следующем. Изменения у больных с инфильтративным туберкулезом сопровождаются выраженной воспалительной реакцией, снижением числа нейтрофилов (в 2 раза), со значительным понижением фагоцитарной активности этих клеток (до 2,3 раза), выраженной моноцитарной реакцией (повышение на 33 %), угнетением клеточного звена иммунной системы - снижением числа Т- (на 24 %) и В- (на 35 %) клеток, активацией клеток-киллеров (NK- и TNK-клеток), что выражается в повышении их количества в 1,5 раза, отмечается выраженное увеличение числа Т-активированных клеток (СD25+) в 5 раз.

Изменения у пациентов с туберкуломами характеризуются отличительным снижением количества фагоцитирующих нейтрофилов (до 4,9 раз) и фагоцитирующих моноцитов, что наблюдается на «фоне» пониженного количества В-лимфоцитов (на 42 %) и Т-лимфоцитов (на 35 %). Участие клеточных механизмов в развитии туберкуломы отражают разнонаправленные отклонения субпопуляций Т-лимфоцитов: снижение CD4+, CD8+ и CD HLA-DR+ клеток на 25 %, и увеличение CD25+ и TNK-клеток в 1,7-1,9 раза.

Выводы

  1. Проточная цитофлюориметрия позволяет быстро, точно и объективно оценить фагоцитарную активность клеток крови человека.
  2. Оценка фагоцитарной активности клеток является важным критерием определения активности туберкулеза легких на ранних стадиях наблюдения и в процессе лечения.
  3. Туберкулез легких, сопровождающийся формированием туберкуломы, характеризуется значительным снижением числа нейтрофильных фагоцитов в 2,5 раза в фаготесте и в 4,9 раза в бурсттесте, выраженным уменьшением количества Т- и В-клеток, увеличением TNK-клеток.
  4. Инфильтративная форма туберкулеза в пределах одной доли легких сопровождается значительной воспалительной реакцией (лейкоцитоз), снижением количества Т- и В- клеток, преобладанием клеток с маркерми ранней активации (CD25+), разнонаправленными изменениями фагоцитарной активности моноцитов - увеличением в фаготесте и снижением в бурсттесте.
  5. Маркеры ранней активации клетки (CD25+) могут отражать активность патологического процесса и использоваться для прогнозирования течения туберкулеза легких.

Рецензенты:

  • Гусев Е. Ю., доктор медицинских наук, главный научный сотрудник лаборатории иммунологии воспаления Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской Академии наук»,    г. Екатеринбург.
  • Голубев Д. Н., доктор медицинских наук, профессор кафедры фтизиатрии и пульмонологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации», г. Екатеринбург.
0,22

Библиографическая ссылка

Скорняков С.Н., Медвинский И.Д., Бердюгина О.В., Павлов В.А., Ершова А.В., Сабадаш Е.В., Бердюгина О.В. ВОЗМОЖНОСТИ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИИ В ОЦЕНКЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК КРОВИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 4. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=6674 (дата обращения: 19.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074