Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Дубровин А.Н. 1 Михалев А.И. 1 Ухов С.В. 1 Коньшина Т.М. 1 Вахрина Н.И. 1 Махмудов Р.Р. 2

---

1 ГБОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития РФ

2 «Естественно научный институт» Пермского государственного национального исследовательского университета Министерства образования и науки РФ

Реакцией хлорангидрида 2-хлорцинхониновой кислоты с алкил- или ариламинами синтезированы ранее неизвестные замещенные амиды 2-хлорцинхониновой кислоты, которые при нагревании в уксусной кислоте в присутствии ацетата натрия (метод А) превращаются в соответствующие амиды 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты. Нагревание этилового эфира 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты с алкил- или ариламинами в этиленгликоле также ведет к образованию амидов 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты (метод Б). Строение синтезированных соединений подтверждено спектральными методами. По результатам биологических испытаний на животных выявлены вещества: 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновая кислота, аллиламид- и гексадециламид 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты, обладающие противовоспалительной и анальгетической активностью. В качестве эталонов сравнения биологической активности были использованы диклофенак натрия (ортофен), ацетилсалициловая кислота (аспирин) и метамизол натрия (анальгин). Дальнейший поиск биологически активных веществ в данных рядах соединений является перспективным.

Статья в формате PDF

128 KB

противовоспалительная и анальгетическая активность.

2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты

амиды 1

2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты

этиловый эфир 1

амиды 2-хлорцинхониновой кислоты

2-хлорцинхониновая кислота

1. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд. - Ленинград: Медгиз, 1963. - С. 81-106.

2. Колла В. Э., Сыропятов Б. Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. - М.: Медицина, 1998. - 263 с.

3. Михалев А. И., Зуева М. В., Закс А. С. Синтез и противовоспалительная активность замещенных амидов 2-хлорцинхониновой кислоты. Деп. в ВИНИТИ 17.07.96, № 2433-В96.

4. Михалев А. И.,. Коньшин М. Е, Коньшина Т. М. и др. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность замещенных амидов 1,2-дигидро-2-оксо- и 2-тиоцинхониновых кислот // Хим.-фарм. журн. - 1997. -Т. 31. - № 3. - С. 37-38.

5. Павлова М. В., Михалев А. И., Коньшин М. Е. и др. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-замещенных амидов цинхониновой кислоты // Хим.-фарм. журн. - 1999. - Т. 33. - № 8. - С. 18-19.

6. Прозоровский В. Б., Прозоровская М. П., Демченко В. М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и её ошибки // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т. 41. - № 4. - С. 497-502.

7. Рубцов М. В., Байчиков А. Г. Синтетические химико-фармацевтические препараты. - М.: Медицина, 1971. - 328 с.

8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общей ред. Хабриева Р. У. Изд. 2-е, перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - С. 695-709.

9. Сухова Н., Лукевиц Э. Новый антибактериальный препарат хинифурил // Хим.-фарм. журн. - 1991. - Т. 25. - № 12. - С. 75-77.

10. Сюбаев Р. Ф., Машковский М. Д., Шварц Г. Я., Покрышкин В. И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов // Хим.-фарм. журн. - 1986. - Т. 20. - № 1. - С. 33-39.

11. Ухов С. В., Коньшин М. Е. Синтез производных 2-ариламино-, 2-оксо-, и 2-хлорцин-хониновых кислот. Деп. в ВИНИТИ 19.03.96. № 837-В96.

Введение. Важным направлением фармацевтической науки является синтез новых биологически активных веществ, обладающих высокой эффективностью и малой токсичностью. Перспективным направлением является поиск соединений в ряду цинхониновой кислоты, среди которых выявлены вещества с различной активностью. В настоящее время в медицине используется N-(5-диэтиламинопентил-2)-2-[2¹-(5¹¹-нитрофурил-2¹¹-винил]-4-хинолинкар-боксамид под названием хинифурил в качестве антимикробного средства в виде мази [9].

В ранее проведённых исследованиях нами осуществлён синтез замещенных амидов 2-хлор- [3] и 2-оксоцинхониновой кислоты [4]. Установлено, что некоторые из апробированных соединений при биологических испытаниях на животных обладают противовоспалительной или анальгетической активностью.

Целью исследования является синтез новых биологически активных соединений в ряду производных цинхониновой кислоты, изучение их физико-химических свойств, анализ результатов биологических испытаний, установление взаимосвязи структура-активность.

В продолжение предыдущих работ, а также с целью поиска новых биологически активных веществ, представляло интерес осуществить синтез новых амидов 2-хлорцинхониновой кислоты и использовать их для получения соответствующих амидов 2-оксоцинхониновой кислоты. Изучить свойства и биологическую активность целевых продуктов в сравнении с препаратами эталонами.

Материалы и методы исследования

Структура полученных соединений подтверждена спектральными методами анализа. ИК спектры сняты на приборах ИК-Фурье спектрофотометре (ФСМ-1201) и SPECORD М-80 (Германия) для пасты соединений в вазелиновом масле. ЯМР ¹Н-спектры записаны на Фурье-спектрометре ЯМР Tesla BS-567А (100 МГц) в растворе ДМСО-d₆, внутренний стандарт - ГМДС. Ход реакций и чистоту соединений контролировали методом ТСХ на пластинах Silufol UV-254 в системе изопропиловый спирт-ацетон-аммиак (3:2:1), пятна детектировали парами йода. Данные элементного анализа синтезированных веществ соответствуют вычисленным значениям. 2-Хлор- (I) и 2-оксоцинхониновая кислота (II) получены по известному в литературе методу [7]. Этиловый эфир 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты (III) получен по методу, приведенному в работе [11].

Биологические испытания синтезированных соединений проведены на мышах согласно «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологичес-ких веществ» [8] в сравнении с препаратами эталонами: диклофенаком натрия (ортофеном), ацетилсалициловой кислотой (аспирином) и метамизолом натрия (анальгином).

Общая методика получения замещенных амидов 2-хлорцинхониновой кислоты (1-7)

К 2,08 г (0,01 моль) 2-хлорцинхониновой кислоты (I) прибавляют 30-40 мл тионилхлорида и нагревают на водяной бане 3 часа. Избыток тионилхлорида отгоняют в вакууме, к охлажденной реакционной массе добавляют 0,01 моль раствора соответствующего амина в бензоле и 3-5 мл триэтиламина, затем нагревают на водяной бане в течение 1 часа. Бензол и летучие продукты отгоняют с водяным паром. Остаток обрабатывают 10 % раствором

NaHCO₃, отфильтровывают и перекристаллизовывают соединения из диоксана. Выходы продуктов реакций составляют 71-92 %.

Общая методика получения замещенных амидов 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхо-ниновой кислоты 8,10, 12-16 (метод А)

Смесь 0,01 моль амида 2-хлорцинхониновой кислоты и 10 мл 10% хлороводородной кислоты кипятят в течение 4 часов, охлаждают, выливают в холодную воду, нейтрализуют раствором аммиака. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают водой и перекристаллизовывают из ДМФА.

Общая методика получения замещенных амидов 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты 8-16 (метод Б)

Смесь 2,17 г (0,01 моль) этилового эфира 1,2-дигидро-2-оксоцинхониновой кислоты [11] и (0,01 моль) соответствующего алкил-, ариламина в 10 мл этиленгликоля, нагревают при 170-180 ^оС в течение 4 часов, охлаждают, разбавляют водой. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из ДМФА.

Таблица 1. Характеристики замещенных амидов 2-хлорцинхониновой кислоты (1-7)

Таблица 2. Характеристики замещенных амидов 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты (8-16)

* в системе изопропиловый спирт-ацетон-аммиак (3:2:1)

Таблица 3. Спектральные характеристики синтезированных соединений

Результаты и их обсуждение

В ходе проведенных опытов реакцией хлорангидрида 2-хлорцинхониновой кислоты с алкил-, ариламинами были получены соответствующие замещенные амиды 1-7 с выходами 71-92 %.

Исследования показали, что замещенные амиды 2-оксоцинхониновой кислоты 8-16 образуются при кипячении амидов с разбавленной хлороводородной кислотой (метод А) или при нагревании этилового эфира 2-оксоцинхониновой кислоты с алкил-, ариламинами в этиленгликоле (метод Б). Химические превращения показаны на схеме:

1-16 R = (СН₂)₂OH (1); R = (СН₂)₃OH (2); R = (СН₂)₂N(C₂H₅)₂ (3); R = CН₂С₆Н₅ (4);

R = C₆H₄CH₃-4 (5); R = C₆H₄NHCOCH₃-4 (6); R = (СН₂)₁₅CH₃ (7); R = (СН₂)₂OH (8);

R = СН₂СН=СН₂ (9); R = (СН₂)₃OH (10); R = С₆Н₁₁-цикло (11); R =CH₂N(C₂H₅)₂ (12);

R = CН₂С₆Н₅ (13); R = C₆H₄CH₃-4 (14); R = NHСОСН₃ (15); R = (СН₂)₁₅СН₃ (16)

Полученные соединения 1-16 - это бесцветные кристаллические вещества, не растворимые в воде и растворимые при нагревании в диоксане и ДМФА (табл. 1, 2). Структура соединений подтверждена данными ИК- и ЯМР Н¹-спектров.

ИК спектры амидов (1-7), снятые в вазелиновом масле, содержат полосы валентных колебаний ν, см-¹: 1630-1660 (СО), 3140-3340 (NH-амид). В спектрах соединений 8-16 имеются

полосы при 1560-1672 карбонильных групп, NH-амидных групп и NH-хинолинового кольца при 3128-3228 см^-1.

В спектрах ЯМР Н¹ соединений 1-7 имеются сигналы протонов δ, м.д.: NH-амидной группы при 8,72-12,90, ароматических и гетероциклических протонов в области 7,27-8,83.

В спектрах соединений 8-16 (табл. 3) присутствуют сигналы протонов δ. м.д.: 6,32-7,73 группа линий ароматических и гетероциклических протонов (м, ArH, HetH); сигнал 8,48-10,49 (NH-амид), 11,59-11,84 (1Н, с, NH-хинолинового цикла).

Исходя из данных ЯМР Н¹-спектров (ДМСО-d₆) можно сделать заключение, что синтезированные соединения 8-16 существуют в оксо-форме в которых сигнал -NH- хинолинового цикла имеется в области 11,59-11,84 м. д., в данном растворителе.

Определена острая токсичность 2-оксоцинхониновой кислоты и полученных соединений по экспресс-методике Прозоровского В. Б. на белых мышах массой 22-24 г при внутрибрюшинном способе введения [6] в сравнении с ортофеном, аспирином и анальгином [2]. Установлено, что ЛД₅₀ 2-оксоцинхонининовой кислоты составляет > 600 мг/кг, а ЛД₅₀ соединений 9 и 16 > 1000 мг/кг. Апробированные соединения менее токсичны, чем препараты сравнения - ортофен и аспирин (табл. 4).

Изучена противовоспалительная и анальгетическая активность 1,2-дигидро-1Н-2-оксо-цинхониновой кислоты и амидов 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты в сравнении с препаратами - эталонами: ортофеном [5], аспирином и анальгином.

Противовоспалительная активность (ПВА) соединений (II, 9, 16) и аспирина изучена на белых крысах обоего пола массой 180 - 220 г на каррагениновой модели воспаления, создаваемой субплантарным введением в заднюю лапу крыс 0,1 мл 1 % водного раствора каррагенина [7]. Предварительно измеряли исходный объем (мл) задней лапы опытных и контрольных крыс с помощью онкометра. Исследуемое вещество в дозе 25 мг/кг, а аспирин 50 мг/кг вводили внутрибрюшинно в 2 % крахмальной слизи за один час до моделирования воспаления. Прирост объёма воспалённой стопы оценивали онкометрически через 3 и 5 часов после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отёка к контролю. Проведено 5 опытов в каждой группе было 6 животных. Результаты обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента, результаты считали достоверными при р < 0,05 [1].

Анальгетическая активность соединений (II, 9, 16) и анальгина изучена на модели «уксусных корчей» на беспородных белых мышах-самцах массой 22-24 г. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75 % водный раствор уксусной кислоты из расчета 0,25 мг на 10 г массы животного и подсчитывали количество корчей в течение 10 минут. Исследуемые вещества в дозе 25 мг/кг вводили внутрибрюшинно в виде взвеси в 2 % крахмальной слизи дозе за 30 мин до внутрибрюшинного введения уксусной кислоты, а препарат сравнения анальгин - в дозе 55 мг/кг, соответствующей ED₅₀ по тесту «уксусных корчей» [10]. Результаты оценивали по способности тормозить количество корчей по сравнению с контрольными животными, получавшими растворитель. В каждой группе было по 5 мышей. Данные опытов обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности. Разницу считали достоверной при р < 0,05 [1].

Таблица 4. Острая токсичность, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-оксо- (II) и амидов 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты (9,16)

*-р <0,05; **-p 0,02; ***-р< 0,01; ****-р< 0,001 по сравнению с контролем.

Исследования показали, что апробированные соединения II, 9 и 16 при внутрибрюшинном пути введения в дозе 25 мг/кг проявляют противовоспалительное действие несколько ниже, чем ортофен в этой же дозе, и превышают активность аспирина в дозе 50 мг/кг (таблица 4).

Установлено, что апробированные соединения II, 9, 16 обладают анальгетической активностью в дозе 25 мг/кг и более активны, чем анальгин в дозе 55 мг/кг. Соединения II и 16 оказывают более сильное анальгезирующее действие, чем ортофен в дозах 25 мг/кг. Таким образом, в результате исследований получено 16 ранее неизвестных соединений, строение которых установлено спектральными методами. Некоторые из полученных соединений в опытах на животных показали наличие противовоспалительной и анальгетической активности.

Выводы

1. В ходе проведенного исследования установлено, что соответствующие амиды 1,2-дигидро-1Н-2-оксоцинхониновой кислоты образуются при взаимодействии амидов 2-хлорцинхониновой кислоты с хлороводородной кислотой (методА) или при нагревании этилового эфира 2-оксоцинхониновой кислоты с алкил- или ариламинами в этиленгликоле (метод Б).
2. На основании данных ИК-, ЯМР Н¹-спектров установлено, что полученные соединения существует в оксо-форме.
3. По результатам скрининга синтезированных соединений на животных выявлены вещества, обладающие противовоспалительной или анальгетической активностью при низкой токсичности.

Рецензенты:

• Хомов Ю. А., д. фарм. н., профессор, профессор каф. фармацевтической химии ФДПО и ФЗО ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития РФ, г. Пермь.
• Игидов Н. М., д. фарм. н., доцент, профессор каф. органической химии ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития РФ, г. Пермь.

Библиографическая ссылка