Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ АСКОСФЕРОЗА ПЧЕЛ И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО КУЛЬТУРАЛЬНО – МОРФОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

Шевченко Е.В. 1
1 ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина», аспирант, Омск, Россия (644122, Омск, ул. Октябрьская, 92)
Автором проведены экспериментальные исследования по выделению культуры гриба Ascosphaera apis. Гифы мицелия гриба – разветвленные, септированные, бесцветные, многоядерные клетки. Мицелий в местах соприкосновения выпускает короткие боковые гифы, на которых образуются многоядерные структуры гаметангии (половые органы), не дифференцированные на гаметы (половые клетки). Каждый из гаметангиев отделяется от гиф перегородкой. Женский и мужской гаметангии различаются по величине: мужской меньше, он переливает свое содержимое (ядра и протоплазму) в более крупный (женский). После слияния содержимого гаметангиев происходит кариогамия (слияние ядер), за этим следует множественное деление копуляционных ядер. В нутриоците, являющемся главной, быстрорастущей питательной частью женского гаметангия, вокруг образовавшихся ядер происходит формирование большого числа спор, склеенных в компактные массы – споровые шары, которых иногда называют асками или сумками. Зрелый нутриоцит (капсула сферической формы) называется цистой или спороцистой, со споровыми шарами имеет темно-коричневый или оливково-коричневый цвет, с возрастом чернеет. Установлены размеры споровых цист и спор, также установлен подвид гриба Ascosphaera apis: Ascosphaera apis var. аpis.
культура Ascosphaera apis
споровые цисты
микрофотосъемка
1. Жуков А.А. Биологические свойства гриба Ascosphaera apis и меры борьбы с аскосферозом пчел : автореф. дис. … канд. биол. наук ; Всерос. науч.-исслед. ин-т ветеринар. санитарии, гигиены и экологии. – М., 1995. – 20 с.
2. Клюев В.А. Распространение некоторых микроэлементов в почвах Белоруссии и их влияние на жизнь животных и человека // Сахаровские чтения 2003 года : экологические проблемы ХХΙ века : материалы междунар. конференции, Минск, 19-20 мая 2003. – Минск, 2003. – С. 224 - 225.
3. Лабораторные исследования в ветеринарии : справочник / Б.И. Антонов, В. Борисова, П.М. Волкова [и др.]. – М. : Агропромиздат, 1986. – 352 с.
4. Шепелев Д.С. Профилактика аскосфероза пчел // Экология и охрана пчелиных : сб. науч. докл. II междунар. науч.-практ. конф. – Саранск, 1998. – С. 250-252.
5. Glinski Z. Defense strategies of the honey to fungal infections // Annales universitatis Mariae Curiie – Skladowska. – Lublin, 2001. – Vol. 6. – S. 39-47.
Введение. Благодаря хорошей приспособляемости к различным условиям внешней среды микроскопические грибы успешно выдерживают конкуренцию с другими микроорганизмами и часто вытесняют их с того или иного субстрата. На данный момент известно более 500 тысяч видов микроскопических грибов, большинство которых представлено сапрофитами. Около 50 видов являются патогенными. Патогенные грибы многочисленные, а вызываемые ими заболевания человека, животных и насекомых разнообразны. Патогенными для медоносной пчелы являются грибы родов Ascosphaera, Mucor, Rhisopus, Aspergillus.

Стрессовые факторы, физические, химические, биологические, экстремальные температуры и высокая влажность, загрязнение окружающей среды, отравление пестицидами, бесконтрольное применение антибиотиков, паразитарные инвазии - вызывают снижение резистентности организма насекомого к микозам, нарушая иммунную систему, защитные барьеры оболочек тела, пищеварительного тракта, трахей и способствуя развитию грибковой инфекции [1; 2].

Из микозов, патогенных для пчел, значительное распространение повсеместно получил известковый расплод - аскосфероз. В пятидесятых годах прошлого столетия аскосфероз был зарегистрирован в США и Канаде на пчелах - листорезах и одиночных пчелах Antrophora pacifica, а уже через десять лет имел широкое распространение на пасеках мира.

Заболевание чаще наблюдается в активный период жизнедеятельности пчелосемьи, при наличии расплода. Заражение пчел грибами начинается с прорастания спор. Инвазивная гифа проникает через кутикулу механически и энзиматически, попадает в гемоцель, где быстро развивается и прорастает. Иногда заражение может начинаться от заглоченных спор грибов, которые прорастают в кишечнике. Вначале поражаются трутневые личинки. Из спор прорастает мицелий, который постепенно поражает все органы и ткани насекомого, прорастает на поверхность, покрывая головной конец личинки войлочным налетом [2; 3; 5].

Цель исследований: выделить чистую культуру гриба Ascosphaera apis.

Для этого необходимо:

  • изучить и дифференцировать с помощью электронной микроскопии два подвида этого гриба Ascosphaera apis var. apis, A. apis var. major, отличающихся размерами споровых цист и спор;
  • дифференцировать полученную культуру гриба путем микроскопического и микологического исследований, имея в виду аспергиллез и возможность развития на перге гриба Battsia alvei (Ascosphaera).

Материалы и методы

При проведении исследований использовались методические указания по лабораторной диагностике аскосфероза пчел и выделению возбудителя из пыльцы (перги); утвержденные 9 апреля 1986 года [4].

В исследованиях использовали следующие материалы:

  • образцы сотов (соты) размером 10×15 см с больными и погибшими личинками, куколками;
  • предметное стекло, 50%-ный водный раствор глицерина для микроскопического исследования. Исследование проводили при малом увеличении микроскопа (7×10);
  • питательная среда - агар Сабуро для получения чистой культуры гриба из патологического материала;
  • микрофотосъемку гистологических препаратов проводили на микроскопе Axio Scope 40 (Carl Zeiss) и Axio Star (Carl Zeiss) с встроенным ТV-адаптером и цифровой видеокамерой Carl Zeiss Imager, A1, окуляр W-PI 10x/23, объективы: Achroplan 20х/0,45, 40x/0,60, 63x/0,80 и 100x/1,25 oil.

Микрофотосъемку гистологических препаратов проводила кандидат ветеринарных наук М.Н. Гонохова. ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина», Омск, Россия (644122, г. Омск, ул. Октябрьская, 92).

Результаты исследований и их обсуждение

Для получения чистой культуры гриба из патологического материала (1-2 трупов пораженных личинок и 10%-ной эмульсии пыльцы (перги) на стерильном физиологическом растворе) делали посев на питательную среду агар Сабуро.

Рис. 1. Посев на питательную среду агар Сабуро.

Перед посевом питательный агар расплавляли в водяной бане и после охлаждения до 45-50 °С добавляли в него антибиотики (пенициллин 50 ЕД и стрептомицин 100 ЕД на 1 мл среды) для подавления сопутствующей бактериальной микрофлоры.

Пораженные личинки извлекали из ячеек, помещали в стерильную чашку Петри, разламывали их с помощью препаровальной иглы. Затем частицы размером не более 1 мм и эмульсию пыльцы помещали при помощи бактериологической петли в чашки Петри с одной из питательных сред в 3-5 точек (по одной частице в каждую точку). Посевы выдерживали при 26-30 °С и наблюдали за ними в течение 10 сут., имея в виду, что в процессе развития гриба на поверхности среды на 3-5-е сут. появляются белые пушистые колонии, которые в дальнейшем могут приобретать вид зеленовато-серого, войлокообразного налета.

Рис. 2. культура гриба Ascosphaera apis.

Чистую культуру гриба Ascosphaera apis получили путем дополнительного пересева культуры с периферии колоний, характерных для данного гриба.

Рис. 3. Пересев культуры гриба Ascosphaera apis.

Мазки из культуры исследовали под микроскопом. При положительном результате обнаружили многоклеточный септированный мицелий с многоядерными клетками, ветвистые гифы, споровые шары, которые, в свою очередь, заключены в шаровидную цисту. Споры мелкие, эллиптические, гладкие.

Рис. 4. В поле зрения гифы, споровые цисты.

Встречаются два подвида этого гриба: Ascosphaera apis var. Apis и Ascosphaera apis var. major, отличающиеся размерами споровых цист и спор.

Ascosphaera apis var. apis имеет размеры спор 3-3,8 × 2,3 мкм и диаметр споровых цист 32-99 мкм (в среднем 65,8 мкм), а A. apis var. major имеют размеры спор 3,3-4,2 × 2,5 мкм и диаметр споровых цист 88.4-168 мкм (в среднем 128,4 мкм).

Рис. 5. В поле зрения немногочисленные споровые цисты Ascosphaera apis var. apis. Размер споровых цист 39,41 мкм.

Одновременно дифференцировали полученную культуру гриба (аспергиллез) и возможность развития на перге гриба Battsia alvei (Ascosphaera), отличающегося от возбудителя аскосфероза пчел тем, что он не поражает расплод пчелиных семей, а часто поражает ячейки с пыльцой (пергой) осенью и весной, так как лучше растет при температуре до 20 °С. Гриб Battsia alvei не образует внутри спороцисты споровых шаров, и аскоспоры лежат свободно в спороцисте.

Лабораторный диагноз на аскосфероз устанавливали на основании положительных результатов микроскопического и микологического исследований.

Срок лабораторного исследования до 10 дней. При выделении из пыльцы (перги) гриба Ascosphaera apis ее нельзя использовать в качестве белковой подкормки пчелиным семьям.

Выводы

Из микозов, патогенных для пчел и наносящих большой ущерб пчеловодству на пасеках Омской области, получил распространение известковый расплод - аскосфероз.

В ходе проведенных исследований:

  1. выделена культура гриба Ascosphaera apis;
  2. изучены и дифференцированы с помощью электронной микроскопии два подвида этого гриба Ascosphaera apis var. apis, Ascosphaera apis var. мajor;
  3. дифференцирована полученная культура гриба путем микроскопического и микологического исследований (аспергиллез) и возможность развития на перге гриба Battsia alvei (Ascosphaera).

Рецензенты

  • Рудаков Н.В., д.мед.н., профессор, директор Омского научно-исследовательского института природноочаговых инфекций, г. Омск.
  • Бажин М.А., д.вет.н., профессор Всероссийского НИИ бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии, г. Омск.

Библиографическая ссылка

Шевченко Е.В. ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ АСКОСФЕРОЗА ПЧЕЛ И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО КУЛЬТУРАЛЬНО – МОРФОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 4. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=6579 (дата обращения: 25.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074