Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК КРЫС И ИХ ПОТОМСТВА ДО И ПОСЛЕ РОДОВ

Овсянников В.Г. 1 Абрамова М.В. 1 Алексеев В.В. 1 Лабушкина А.В. 1 Алексеева Н.А. 1 Бойченко А.Е. 1 Алексеева Н.С. 1
1 ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России
Исследование содержания с-реактивного белка имеет большое клиническое значение. Он исследован почти при всех патологических процессах и заболеваниях. На сегодняшний день физиологическая роль С-реактивного белка недостаточно изучена. Целью настоящего исследования явилось изучение содержания С-реактивного белка крыс и их потомства до и после нормальных родов и родов, которым предшествовало болевое воздействие. Боль при родах носит висцеральный и соматический характер. Острая боль моделировалась 3–4 степени интенсивности в соответствии с общепринятыми критериями. Содержание СРБ в крови определяли методом иммуноферментного анализа. Установлено, что беременность не сопровождалась увеличением содержания С-реактивного белка у крыс, которым производилась болевая стимуляция. У потомства крыс до и после рождения С-реактивный белок также не изменяется.
С-реактивный белок.
боль
роды
беременность
1. Вальдман А.В. Центральные механизмы боли / А.В. Вальдман, Ю.Д. Игнатов. – Л.: Наука, 1976. – 191 с.
2. Васильев Ю.Н. Анальгетические эффекты акупунктуры у крыс в свободном поведении и его изменение под влиянием морфина и налоксона/ Ю.Н. Васильев, Ю.Д. Игнатов, А.Г. Кочан и др. // Российский журнал боли. – 2010. – № 1. – С.11-14.
3. Зильбер А.П., Шифман Е.М. Акушерство глазами анестезиолога. – П.: ПГУ, 1997. – 397 с.
4. Клигуненко Е.Н. Соотношение про- и противовоспалительных цитокинов у беременных в третьем триместре / Е.Н. Клигуненко, А.О. Волков // Медицина неотложных состояний. – 2013. – № 6 (53). – С.162-164.
5. Лабораторные анализы. Сыворотка и плазма крови: краткий справочник. – Ростов-н/Д., 2012. – 113 с.
6. Наумов А.В. С-реактивный белок / А.В. Наумов, Л.Т. Арцименя, Е.Ю. Биндич, Н.В. Наумова // Журнал ГрГМУ. – 2010. – № 4. – С. 3-11.
7. Овсянников В.Г. Очерки патофизиологии боли. – Ростов н/Д.: Цветная печать, 2003. – 159 с.
8. Alt R., Willard D., Messer J. Marker proteins in inflammation. – 1982. – P.421-422.
9. Teran E., C-reactive protein during normal pregnancy and preeclampsia / E. Teran, C. Escudero, A. Calle // International Journal of gynecology and obstetrics, 2005. – Vol.89. – P.299-300.
С-реактивный белок (СРБ) занимает прочное место среди субстратов, имеющих большое клиническое значение. Он исследован практически при всех патологических процессах и заболеваниях, имеющих в своей основе тканевое повреждение. Но как справедливо замечают в своей обзорной статье Наумов А.В. с соавторами, физиологическая роль СРБ не выяснена до конца [6].

Имеются публикации, отражающие динамику СРБ и при физиологическом процессе – беременности.

            Установлено, что у здоровых беременных женщин уровень СРБ в крови возрастает с 16-ой до 28-ой недели, потом снижается. Вторая волна повышения содержания СРБ отмечается непосредственно перед родами [9]. Есть и иная точка зрения, что беременность не влияет на содержание СРБ [5].

Немногочисленны сведения о реакции СРБ на раздражители неантигенной природы, не приводящие к повреждению тканей, в частности на болевое раздражение.

Самостоятельный интерес представляет феномен боли при родах. Является ли боль тяжким испытанием или имеет в своей основе позитивное содержание, в частности, активацию факторов врожденного иммунитета?

            Цель исследования: изучение содержания СРБ крыс до и после нормальных родов, и родов, которым предшествовало алгогенное воздействие, а также у приплода, находящегося в утробе матери и после рождения, как в первой, так и во второй группе подопытных животных.

Материал и методы исследования

Боль при родах носит висцеральный и соматический характер [3]. Поэтому острую боль 3–4 степени интенсивности моделировали путем электрокожного раздражения рецепторной зоны корня хвоста крыс с одновременным раздражением прямой кишки через параллельно включенные электроды электрическим током, генерируемым электростимулятором ЭСУ-2 со следующими параметрами: частота тока – 100Гц; амплитуда тока – 30 В; длительность импульса – 500 мс; задержка импульса – 2 мс и время стимуляции – 2 минуты. Электростимуляцию проводили трижды с интервалом 3 часа на 21 день беременности.

На основании анализа поведенческих и вегетативных реакций подопытных животных оценивали интенсивность болевого раздражения в соответствии с общепринятыми критериями [1, 2, 7].

С целью получения сыворотки крови декапитировались интактные животные, интактные беременные животные накануне родов, и после болевой стимуляции накануне родов, а также на первые, третьи и пятые сутки после родов, а также особи приплода, находящиеся в чреве матери, новорожденные крысята на первые, третьи и пятые сутки после рождения от самок обеих подопытных групп. В связи с дефицитом крови у плодов крыс и новорожденных крысят, кровь собиралась в одну пробирку от всех особей одного помета.

Содержание СРБ в крови определяли методом иммуноферментного анализа, с помощью наборов фирмы BD Biosciences (USA). Растворы стандартов конъюгата промывочного буфера приготавливали по инструкции, прилагаемой к набору. Во все лунки рабочего планшета, покрытого моноклональными кроличьими антителами к СРБ крыс, вносили по 100 мкл стандартных растворов и предварительно разведенных образцов сыворотки крови крыс (1:4000). Планшет накрывали, инкубировали при комнатной температуре 30 минут. По окончании инкубации лунки планшета промывали пять раз промывочным буфером с помощью устройства MULTIWASH  LABSYSTEMS (Finland). После промывки во все лунки планшета вносили по 100 мкл конъюгата и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Далее во все лунки вносили по 100 мкл ТМБ субстратного раствора, инкубировали 10 минут в темноте при комнатной температуре, останавливали цветную реакцию добавлением в каждую лунку по 100 мкл раствора фосфорной кислоты. Измерение оптической плотности опытных проб 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTISCAN MS LABSYSTEMS (Finland). В компьютерное обеспечение прибора вводили численное значение концентрации СРБ в стандартных растворах и после измерения и пересчета в соответствии разведением 1:4000 получили концентрацию исследуемого вещества в опытных пробах нг/мл.

            Статистическая обработка данных проводилась с помощью пакетов программ MS Office Excel 2010 Pro, STATISTICA 8.0. Числовые данные представлены в виде средних значений со стандартной ошибкой среднего (М±m). Для сравнения двух независимых выборок использовался критерий Манна – Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05.

 

Рис. 1. Структура эксперимента

 

Результаты исследования и их обсуждение

Содержание С-реактивного белка у интактных крыс, не получавших болевую стимуляцию до родов и после них

Содержание С-реактивного белка в крови интактных не беременных крыс составляет 442,400±28,310 нг/мл.

У беременных самок в крови накануне родов содержание С-реактивного белка составляет 433,800±20, 631 нг/мл.

Статистический анализ показал, что сам факт беременности у крыс не вызывает существенного изменения в содержании С-реактивного белка. По литературным данным у женщин к концу беременности содержание СРБ повышается [9]. Не исключено, что сохранение содержания СРБ стабильным является особенностью крыс.

Первые сутки после родов ознаменовались некоторым увеличением содержания СРБ у самок. Его уровень составил 529,200±23,316 нг/мл (0,05<р<0,1). Такое различие не является существенным, тем не менее статистическая обработка материала позволяет говорить о тенденции повышения изученного субстрата.

На третьи сутки содержание СРБ составило 575,200±19,218 нг/мл, имеется очевидное увеличение определяемого протеина (р<0,05), которое является значимым.

На пятые сутки содержание СРБ составляет 402,400±16,233 нг/мл. Это самое низкое значение из всех определенных, тем не менее расценивать его как снижение СРБ оснований нет, (р>0,05) по отношению к контрольной группе. Статистический анализ показывает, что содержание СРБ возвращается к контрольным значениям.

Содержание С-реактивного белка у стимулированных крыс до родов и после них.

Как было описано выше, содержание    С-реактивного белка у интактных не беременных крыс составляет 442,400±28,310 нг/мл.

После болевой стимуляции накануне родов содержание С-реактивного белка в крови беременных крыс составляет 438,800±18,552 нг/мл (р>0,05).

Таким образом, накануне родов содержание СРБ как у стимулированных крыс, так и у не стимулированных остается неизменным.

На первые сутки после родов отмечается увеличение уровня СРБ до 556,200±20,727 нг/мл. Прирост подтверждается статистически, он значим (р<0,05).

На третьи сутки после родов присутствие С-реактивного белка в крови животных достигает 629,200±20,727 нг/мл. Это увеличение по сравнению с контрольными значениями статистически значимо (р<0,05).

На пятые сутки отмечается «обвальное» снижение исследуемого субстрата. Уровень СРБ составил 356,800±26,645 нг/мл – это снижение очевидно по отношению к значениям зарегистрированных на первые и третьи сутки после родов. По отношению к значениям контрольной группы, это снижение следует расценивать лишь как тенденцию (р<0,05<0,1).

Таким образом, полученный фактический материал и сравнение его результатов между группой интактных беременных крыс и группой крыс, испытавших алгогенное воздействие накануне родов, свидетельствует о том, что сам факт беременности не сопровождается нарастанием содержания СРБ в периферической крови вне зависимости от того, получили ли беременные крысы болевую стимуляцию или нет.

После же родов, при сохранении вектора реакции в обеих группах сравнения, следует отметить, что у стимулированных крыс содержание С-реактивного белка нарастает на первые сутки, тогда как у интактных крыс намечается лишь тенденция этого увеличения.

На третьи сутки в обеих группах подопытных животных зарегистрирован очевидный прирост содержания СРБ. На пятые сутки у интактных крыс содержание СРБ не отличается от контрольных значений, а у стимулированных животных отмечается даже тенденция к падению уровня СРБ по сравнению с контрольными значениями.

Общее заключение сводится к двум позициям.

Первая  беременность не сопровождается увеличением содержания СРБ.

Вторая, имеет место увеличение содержания СРБ после родов. У интактных животных это увеличение менее интенсивно и к пятым суткам возвращается к исходным значениям. У стимулированных крыс прирост наблюдается более стремительно, а к пятым суткам отмечено снижение содержания СРБ ниже конкретных значений.

Содержание С-реактивного белка у приплода, рожденного от крыс, не получавших болевую стимуляцию накануне родов

У приплода, находившегося в чреве матери, накануне родов содержание С-реактивного белка составило 29,60±7,66 нг/мл.

Вопреки сведениям, опубликованным в литературе, это почти на порядок ниже, чем у взрослых животных. Принято считать, что печень как новорожденных, так и взрослых особей одинаково подготовлена к биосинтезу С-реактивного белка [8]. В наших экспериментах это не нашло подтверждения, во всяком случае для потомства крыс.

В первые сутки после рождения уровень СРБ выше, чем перед родами, и составляет 60,00±27,90 нг/мл. Казалось бы, это очевидное увеличение показателя, но оно не находит своего статистического подтверждения. Различия незначимы (р>0,05).

На третьи сутки после родов содержание СРБ в крови новорождённых несколько снижается. Оно равно 49,10±20,62 нг/мл (р>0,05). На пятые сутки цифровые значения содержания СРБ выше контрольных и предыдущих. Они составляют 121,60±44,99 нг/мл, но и в том и другом случае различие по сравнению с контрольными значениями не существенно (р>0,05).

Таким образом, у приплода, рожденного интактными животными, статистически значимых колебаний в уровне СРБ как во внутриутробном состоянии, так и после родов не отмечено.

Содержание С-реактивного белка у приплода, рожденного от крыс, получивших накануне родов болевую стимуляцию

Содержание С-реактивного белка в крови приплода, находящегося в чреве матери до ее электроболевой стимуляции, составляет 29,60±7,66 нг/мл. У приплода, матери которых непосредственно перед родами получили электроболевую стимуляцию, содержание С-реактивного белка в крови повысилось до 56,40±17,96 мг/мл, однако, статистический анализ этот факт не подтверждает (р>0,05).

В первые сутки после родов у крысят в крови содержится 56,00±15,06 мг/мл исследуемого субстрата, что также не является его увеличением по сравнению с контрольными значениями (р>0,05).

На третьи сутки содержание СРБ составляет 59,60±26,39 мг/мл, т.е. в течение трех суток после родов значения содержания СРБ достаточно монотонны.

 На пятые сутки содержание СРБ у новорожденных крысят составило 145,800±47,691 мг/мл, что втрое выше, чем в контрольной группе. Считать это реакцией прироста нельзя, так как различие не является статистически значимым (р>0,05).

Результаты исследования содержания СРБ у пятисуточных крысят выявило крайнюю неоднородность показателей, различие достигало двух порядков, что и повлияло на результат статистического анализа.

Таким образом, ни болевое сопровождение родов, ни нормальные роды не повлияли на содержание С-реактивного белка у приплода, его следует считать стабильным. Обращает на себя внимание тот факт, что на пятые сутки отмечается мозаичность показателей, что делает ряд наблюдений неоднородным и не позволяющим сделать сколько-нибудь определенного заключения.

В процессе беременности, судя по научной литературе, уровень ИЛ-6 – индуктора выработки СРБ, остается неизмененным, с этим очевидно связан монотонный уровень содержания СРБ до родов и сразу после них.

Следует упомянуть относительно недавно появившееся сообщение о том, что у женщин со сроком беременности 37 и более недель повышается уровень ИЛ-6 в сыворотке крови [4]. По логике это должно приводить к нарастанию уровня СРБ, ни тот, ни другой показатель в нашей версии эксперимента статистически значимо не изменялся.

Выводы:

1. Изменение содержания СРБ у интактных самок и получивших накануне родов электроболевую стимуляцию существенных отличий не имеет.

2. У приплода до родов и после рождения содержание СРБ не меняется вне зависимости от того, получали или не получали их матери накануне родов электроболевую стимуляцию.  

Рецензенты:

Рымашевский А.Н., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии №1 ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России, г. Ростов на Дону;

Харсеева Г.Г., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой микробиологии и вирусологии №2 ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России, г. Ростов на Дону.



Библиографическая ссылка

Овсянников В.Г., Абрамова М.В., Алексеев В.В., Лабушкина А.В., Алексеева Н.А., Бойченко А.Е., Алексеева Н.С. С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК КРЫС И ИХ ПОТОМСТВА ДО И ПОСЛЕ РОДОВ // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 6. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=23204 (дата обращения: 22.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074