На современном этапе развития фармацевтической науки исследователи, изучающие природные соединения и лекарственные средства на их основе, имеют возможность решать любые аналитические задачи, применяя современные физико-химические методы. Как правило, на предварительном этапе разделения суммы каротиноидов на индивидуальные вещества применяют тонкослойную хроматографию(ТСХ) [1-4].
При проведении ТСХ-анализа каротиноидов отечественные исследователи идентифицируют эти БАВ по величине коэффициента подвижности или по величине относительного коэффициента подвижности в случае наличия стандартных образцовиндивидуальных каротиноидов [5-9].
Цель исследования- сравнительный качественный анализ каротиноидовобразцов облепихового масла методом ТСХ.
Объекты и методы исследования
Объектами исследования являлись экспериментальные образцы облепихового масла, полученные по различным технологическим схемам, - образец 1, образец 2, образец 3 и образцы облепихового масла производства ЗАО «Алтайвитамины»- образец 4 и ЗАО «Вифитех»- образец 5, реализуемые в розничной аптечной сети.
Методика ТСХ-анализа каротиноидов.
Приготовление испытуемого раствора. Навеску каждого образца облепихового масла 0,100 г растворяли в 50 мл гексана в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводили объем раствора до метки тем же растворителем.
Приготовление растворовстандартных образцов (СО) β-каротина, лютеина, ликопина. Точную навеску СО β-каротина 0,10000 г помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 50 мл гексана и доводили объем раствора до метки тем же растворителем.
Точную навеску СО лютеина - 0,10000 г помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 50 мл гексана и доводили объем раствора до метки тем же растворителем.
Точную навеску СО ликопина - 0,10000 г помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 50 мл гексана и доводили объем раствора до метки тем же растворителем.
Методика проведения испытания. На хроматографическую пластинку 10х15 см «Sorbfil» наносили по 10 мкл растворов образцов облепихового масла и по 10 мкл растворов СО образцов β-каротина, лютеина, ликопина.
Образцы хроматографировали восходящим способом в соответствующей подвижной фазе. Составы подвижных фаз: I - гексан-ацетон (6:2);
II - петролейный эфир-диэтиловый эфир-кислота уксусная (85:15:1);
III - диэтиловый эфир-петролейныйэфир (3:1);
IV - петролейный эфир-бензол (10:1).
После продвижения подвижной фазы до края пластинки, пластинку вынимали и сушили.Детекцию зон адсорбции проводили визуально по их окраске. Далее хроматографические пластинки опрыскивали 10% раствором фосфорно-молибденой кислоты с последующим нагреванием до 60°С в течение 2 мин. Зоны адсорбции всех каротиноидов окрашивались в ярко синий цвет.
Идентификацию каротиноидов проводили по сравнению со СО β-каротина,лютеина и ликопина. Остальные каротиноиды идентифицировали по величинам коэффициентов подвижности, сравнивая их с опубликованными в периодической литературе [1, 5, 6, 7] коэффициентами подвижности для данных хроматографических условий.
Результаты и их обсуждение
ТСХ-анализ с использованием подвижной фазы I показал, что образец облепихового масла 1 содержит 6 соединений класса каротиноидов, которые были идентифицированы как виолаксантин (Rf=0,114), зексантин (0,314), лютеин (0,371), β-криптаксантин (0,614), ликопин (0,800) и β-каротин (0,971) [1, 2, 10-14].
В образце облепихового масла 2 было подтверждено наличие зеаксантина (0,300), лютеина (0,357), β-криптоксантина (0,600), ликопина(0,829) и β-каротина (0,957). Виолакантин в этом образце идентифицирован не был [1, 2, 10 - 14].
Установлено, что образец облепихового масла 4 содержит зеаксантин (0,300), ликопин (0,800), β-каротин (0,929) и один не идентифицированный каротиноид. При этом для этого образца облепихового масла не было подтверждено присутствие виолаксантина илютеина. Экспериментальные данные согласуют с данным Г. Бриттона [10], который констатирует, что эта система растворителей неспособна разделять лютеин и зеаксантин. Вероятно, что неидентифицированная зона адсорбции со значением Rf=0,675 соответствует сумме нескольких каротиноидов.
В образцах облепихового масла 3 и 5 был идентифицирован только β-каротин с коэффициентом подвижности 0,929.
Результаты анализа образцов облепихового масла в системе растворителей гексан - ацетон (6:2) показали, что наиболее разнообразный состав каротиноидов имеет образец 1, близким к нему по составу является образец 2. Для промышленного образца производства ЗАО «Алтайвитамины» подтверждено присутствие 3 каротиноидов. Промышленный образец облепихового масла 5 и экспериментальный образец 3 имеют идентичный качественный состав каротиноидов.
При изучении образцов облепихового масла с использованием подвижной фазы II установлено, что каротиноидный состав образца 1 представлен виолаксантином (0,180), зеаксантином (0,410), лютеином (0,484), ликопином (0,672), β-каротином (0,746). Последовательность расположения зон адсорбции виолаксантина, зеаксантина и лютеина дополнительно подтверждается данными литературы. В частности согласно данным Г. Бриттона [10] зеаксатин, подставляющий собой β,β-каротин-3,3΄-диол, имеет большее сродство к неподвижной фазе и прочнее удерживается на ней, чем лютеин (β,ε-каротин-3,3΄-диол). Кроме того, зексантин является менее полярным соединением, чем виолаксантин и имеет большее сродство в подвижной фазе, следовательно, его зона адсорбции (около 0,410) ожидаемо находится выше зоны адсорбции виолаксантина (около 0,2). Дополнительно в образце было установлено присутствие одного неидентифицированного каротиноида с коэффициентом подвижности 0,098. Природа соединения не вызывает сомнений, т.к. зона адсорбции была изначально окрашена в желты цвет, а после ее обработки проявителем, окрасилась в синий цвет. Кроме того, хроматографическая подвижность этого соединения позволяет предположить, что это - производное каротина, т.к. зона около 0,2 соответствует производным три- и тетрагидрокартиноидам [1, 2].
В образце 2 были идентифицированы лютеин (0,475) и β-каротин (0,738) и дополнительно детектированы два неидентифицированных каротиноида с коэффициентами подвижности 0,09 и 0,631.
На хроматограмме образца 3 нанесенная проба осталась на линии старта хроматографической пластинки.
После хроматографированияобразца 4 в нем были идентифицированызеаксантин (0,410), лютеин (0,492), ликопин (0,658) и β-каротин (0,732). Пятый неидентифицированный каротиноидимелкоэффициент подвижности около 0,08.
Как показали данные эксперимента, каротиноидный состав образца облепихового масла 5 представлен тремя соединениями: β-каротином(0,746) и двумя не идентифицированнымикаротиноидами с коэффициентами подвижности 0,110 и 0,630.
Таким образом, ТСХ-анализ пяти образцов облепихового масла в системе растворителей петролейный эфир-диэтиловый эфир-кислота уксусная (85:15:1) свидетельствует, что наиболее широкий каротиноидный состав у экспериментальных образцов 1 и 2 - это 6 и 4 соединения соответственно. Промышленный образец облепихового масла 4 содержит 5 каротиноидов, качественный состав образца 5 представлен 3 веществами этого класса. Отсутствие зон адсорбции на хроматограмме образца 3 позволяет предположить, что в данных хроматографических условиях разделить каротиноиды этого образца не представляется возможным.
Анализ образцов облепихового масла в системе растворителей IIIпозволил установить, что образец масла 1 содержит наибольшее количество идентифицированных каротиноидов: β-криптоскантин (0,197), лютеин (0,620), ликопин (0,660) и β-каротин (0,756), кроме того в этом образце в отличии от образца 2 идентифицирован зеаксантин (0,399). Один каротиноид с коэффициентом подвижности 0,087 не был идентифицирован.
Шесть веществ из класса каротиноидов были обнаружены в образце 2. При этом идентифицированы β-криптоскантин (0,203), лютеин (0,630), ликопин (0,659) и β-каротин (0,761), кроме того, в образце присутствуют два вещества с коэффициентами подвижности 0,123 и 0,464.
Следует отметить, что для образцов 4 и 5 было установлено содержание γ-каротина (0,725) иоба образца показали наличие β-каротина - 0,754 и 0,761, соответственно. Кроме того, образец 4 содержит не идентифицированный каротиноид с коэффициентом подвижности около 0,130.
Данные хроматографические условия позволили зафиксировать наличие β-криптоскантин (0,210), лютеин (0,620) и ликопин (0,670) в экспериментальном образце облепихового масла 3.
Результаты анализа доказывают сходство основного каротиноидного состава экспериментальных образцов облепихового масла 1 и 2. Оба промышленных образца облепихового масла 4 и 5 содержат γ- и β-каротин.
В результате хроматографического анализа образцов облепихового масла в системе растворителей IV установлено, что образец 1 характеризуется присутствием β-каротина(0,028; ярко-оранжевая окраска пятна), ликопина (0,056; красно-розовая окраска пятна), β-криптоксантина (0,066; зелено-желтая окраска пятна), рубиксантина (0,151; розовая окраска пятна). Два соединения не были идентифицированы, однако окраска зон адсорбции до обработки проявительным реактивом - желтая и желто-оранжевая, а после- синяя, позволяют предположить, что это производные каротина (0,189; 0,208). Кроме того,хроматографическая подвижность этих соединений в данной системе растворителей, которая является специфической для каротиноидов, позволяет отнести эти вещества к этому классу БАВ.
Для образца 2 установлено присутствие β-каротина(0,028; ярко-оранжевая окраска пятна), β-криптоксантина (0,063; зелено-желтая окраска пятна), лютеина (0,179; ярко розовая окраска пятна), виолаксантина (0,198; розово-желтая окраска пятна) и зеаксантина (0,340; оранжевая окраска пятна).
Анализ образца 3 показал наличие в нем 3 каротиноидов: β-каротина (0,02; ярко-оранжевая окраска пятна), ликопина (0,058; красно-розовая окраска пятна), виолаксантина (0,197; розово-желтая окраска пятна).
Промышленные образцы 4 и 5 имеют сходный состав, представленный идентифицированными каротиноидами: β-каротином (0,028; ярко-оранжевая окраска пятна), ликопином (0,057; красно-розовая окраска пятна), рубиксантином (0,151; розовая окраска пятна) и зеаксантином (0,340; оранжевая окраска пятна). Кроме того образец 4 дополнительно содержит лютеин(0,170; ярко розовая окраска пятна) и виолаксантин (0,198; розово-желтая окраска пятна), которые не были обнаружены в образце 5. Образец облепихового масла 5 содержит не идентифицированный каротиноид с коэффициентом подвижности 0,189.
ТСХ-анализ в системе растворителей петролейный эфир - бензол (10:1) образца 1 показал присутствие 6каротиноидов, в образце 2 - наличие 5 производных каротина, в образце 3 - наличие 3 каротиноидных соединений. Кроме того, анализ в этой подвижной фазе подтвердил сходный основной качественный состав промышленных образцов 4 и 5.
Выводы:
1. Максимально широкий качественный каротиноидный состав имеют образцы облепихового масла 1 и 2, полученные по экспериментальным технологиям.
2. Промышленные образцы 4 и 5 имеют сходный качественный состав каротиноидов.
3. Наиболее эффективными для качественного анализа каротиноидов методом ТСХ можно считать подвижные фазы I , II, IV.
4. Предварительно в качестве оптимальных можно выбрать экспериментальные технологии, по которым были получены образцы облепихового масла 1 и 2.
Рецензенты:Компанцев В.А., д.фарм.н., профессор, профессор кафедры неорганической химии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск;
Кайшева Н.Ш.,д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической и токсикологической химии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск.
Библиографическая ссылка
Курегян А.Г., Печинский С.В., Карандеева Е.А. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КАРОТИНОИДОВ ОБЛЕПИХОВОГО МАСЛА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 2-2. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=23071 (дата обращения: 14.09.2024).