Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Курегян А.Г. 1

---

1 Пятигорский медико-фармацевтический институт – филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

Капсулы «Биоастин» – это биологически активная добавка к пище (БАД), содержащая астаксантин. Капсулы «Лютеин 100%» содержат каротиноид – лютеин. Предложена ТСХ-методика качественного определения астаксантина и лютеина в капсулах «Биоастин» и «Лютеин 100%» соответственно. В качестве подвижных фаз были использованы четыре системы растворителей: петролейный эфир — диэтиловый эфир — кислота уксусная (85:15:1); диэтиловый эфир — петролейный эфир (3:1); петролейный эфир — бензол (10:1); гексан — ацетон (6:2). Детекцию каротиноидов проводили по окраске зон адсорбции и после обработки хроматограмм проявляющим реактивом. В ходе исследования в образцах капсул «Биоастин» идентифицированы четыре каротиноида, заявленные производителем: астаксантин, лютеин, кантаксантин и β-каротин. Кроме того, в капсулах «Биоастин» дополнительно обнаружены два неидентифицированных каротиноида. В капсулах «Лютеин 100%» подтверждено содержание лютеина, дополнительно обнаружены β-каротин и два неидентифицированных каротиноида.

Статья в формате PDF

125 KB

качественный анализ

ТСХ

β-каротин

кантаксантин

лютеин

астаксантин

биологически активные добавки к пище

каротиноиды

1. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов. – М.: Мир, 1986. – 422 с.

2. Курегян А.Г., Печинский С.В. Способ получения каротиноидов из растительного сырья // Современная медицина актуальные вопросы: материалы ХХI междунар. заоч. науч.-практ. конф. 29 июля 2013 г. – Новосибирск: СибАК, 2013. – С. 94 –99.

3. Печинский С.В., Курегян А.Г. Влияние каротиноидов на иммунитет // Хим.-фармац. журн. – 2013.– Т. 47. – №10. – С. 3–8.

4. Печинский С.В., Курегян А.Г. Структура и биологические функции каротиноидов // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. – 2013. – № 9. – С. 4–15.

5. Федеральный реестр БАД [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://obad.ru (дата обращения 16 апреля 2015).

6. Britton G., Liaaen-Jensen S., Pfander H. Carotenoids Handbook. Basel AG.:Springer. 2004. – 646 р.

7. Delia B. Rodriguez-Amaya, Mieko Kimura Handbook for Carotenoid Analysis Washington.: Copyright HarvestPlus, 2004. – 59 р.

8. SandeshKamath B. Biotechnological production of microalgal carotenoids with reference to astaxanthin and evaluation of its biological activity // Dis. by D.Ph. – Department of Biotechnology of University of Mysore, Indian, 2007. – 208 p.

В настоящее время все кислородсодержащие производные каротиноидных углеводородов объединяют в подгруппу ксантофиллов. Наиболее распространенным из них является пигмент листьев – лютеин (рис. 1), который является дигидроксипроизводным α-каротина. Представителем бициклических кетокаротиноидов является астаксантин, который характерен для большинства гидробионтов и морских животных (рис. 1).

а) лютеин (β,ε-каротин,-3,3`-диол)

б) астаксантин (3,3`-дигидрокси-β,β-каротин-4,4`-дион)

Рис. 1. Структура лютеина (а) и астаксантина (б)

Следует отметить, что в природе каротиноиды могут находиться в различных состояниях: в свободном виде, в виде эфиров жирных кислот, а также в форме протеиновых комплексов. Млекопитающие не способны синтезировать каротиноиды, при этом эти соединения являются незаменимыми факторами питания человека.

Цель исследования – качественный анализ биологически активных добавок к пище (БАД) – капсул «Биоастин» и «Лютеин 100%» методом тонкослойной хроматографии.

Объекты и методы исследования

Объекты исследования

Капсулы «Биоастин» № 30, содержащие натуральный астаксантин от 4 до 5 мг/капс., серии 23.12.13 и 25.12.13, производитель – «CyanotechCorporation», США, фасовка – ООО «В-МИН», г. Сергиев Посад, Московская обл., РФ.

Капсулы «Лютеин 100%» № 60, серии 01.04.14 и 04.04.14, производитель – ЗАО «РеалКапс», пгт. Свердловский, Московская обл., РФ.

Методика ТСХ-анализа

Приготовление раствора стандартного образца (СО) астаксантина, лютеина, β-каротина. Около 0,01 г (точная навеска) или астаксантина, или лютеина, или β-каротина помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяли в 5–6 мл гексана и доводили объем раствора до метки тем же растворителем (раствор А).

5 мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем раствора до метки тем же растворителем (раствор Б).

Приготовление раствора испытуемого образца капсул «Биоастин». Содержимое одной капсулы количественно переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяли в 5-6 мл гексана и доводили объем раствора до метки тем же растворителем.

Приготовление раствора испытуемого образца капсул «Лютеин 100%». Содержимое одной капсулы количественно переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяли в 5–6 мл гексана и доводили объем раствора до метки тем же растворителем.

Методика проведения испытания

На линию старта хроматографической пластинки 10х15 см «Sorbfil» наносили по 5 мкл растворов испытуемых образцов капсул «Биоастин» и «Лютеин 100%» и растворов Б СО астаксантина, лютеина, β-каротина.

Образцы хроматографировали восходящим способом в соответствующей подвижной фазе.

Составы подвижных фаз: I – петролейный эфир — диэтиловый эфир — кислота

уксусная (85:15:1);

II – диэтиловый эфир — петролейный эфир (3:1);

III – петролейный эфир — бензол (10:1);

IV – гексан — ацетон (6:2).

После продвижения подвижной фазы до края пластинки пластинку вынимали и сушили.

Детекцию проводили визуально по окраске зон адсорбции. Далее опрыскивали пластинки 10%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты с последующим нагреванием до 60°С в течение 2 мин. Зоны адсорбции всех каротиноидов окрашивались в ярко-синий цвет.

Идентификацию каротиноидов осуществляли по величинам коэффициентов подвижности, сравнивая их с опубликованными в периодической литературе [4-9] коэффициентами подвижности для использованных в эксперименте хроматографических условий и по СО астаксантина, лютеина и β-каротина.

Результат и их обсуждение

Для подтверждения наличия астаксантина в образцах капсул «Биоастин» был проведен хроматографический анализ образцом методом ТСХ в четырех системах растворителей. В ходе предварительных исследований было оптимизировано количество испытуемых и СО образцов, которое необходимо наносить на линию старта хроматографической пластинки.

В результате проведенного эксперимента были получены хроматограммы образцов капсул «Биоастин» серий 23.12.13 и 25.12.13, рассчитаны коэффициенты подвижности для всех зон адсорбции. Результаты ТСХ-анализа испытуемых образцов капсул «Биоастин» представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты анализа капсул «Биоастин» методом ТСХ

По результатам анализа установлено, что качественный состав анализируемых серий капсул «Биоастин» идентичен. В ходе исследования с использованием СО астаксантина, лютеина, β-каротина и систем растворителей I, II были обнаружены шесть каротиноидов, среди них идентифицированы астаксантин, кантаксантин, лютеин и β-каротин. Все эти четыре каротиноида заявлены производителем как компоненты капсул «Биоастин». Кроме того, использование систем растворителей I и II позволило обнаружить дополнительно два неидентифицированных соединения. Эти вещества были отнесены к классу каротиноидов, так как их зоны адсорбции были окрашены в красный и оранжевый цвета, а после обработки 10%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты окрасились в синий цвет.

Следует отметить, что зоны адсорбции на хроматограммах образцов капсул «Биоастин», соответствующие астаксантину, находились на одном уровне с зонами адсорбции СО астаксантина (табл. 2)

Таблица 2

Результаты идентификации астаксантина в капсулах «Биоастин»

Таким образом, в капсулах «Биоастин» методом ТСХ были идентифицированы четыре каротиноида, заявленные производителем, и обнаружены два неидентифицированных каротиноида.

С целью идентификации каротиноидов капсул «Лютеин 100%» был проведен ТСХ-анализ двух серий этой БАД. Данные результатов исследования образцов капсул «Лютеин 100%» методом ТСХ в четырех системах растворителей приведены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты анализа капсул «Лютеин 100%» методом ТСХ

Как показали результаты ТСХ-анализа с использованием СО лютеина и β-каротина и систем растворителей I, II и IV, в капсулах «Лютеин 100%» присутствуют эти каротиноиды. Кроме того, эти системы позволили установить наличие одного неидентифицированного каротиноида в капсулах. С помощью подвижной фазы III в сравнении с СО β-каротина был идентифицирован только β-каротин, остальные каротиноиды остались на линии старта.

Выводы:

1. Методом ТСХ в капсулах «Биоастин» идентифицированы четыре каротиноида, заявленные производителем: астаксантин, кантаксантин, лютеин и β-каротин. Подвижная фаза состава петролейный эфир — диэтиловый эфир — кислота уксусная (85:15:1) позволила обнаружить в образцах капсул «Биоастин» обеих серий два неидентифицированных соединения, которые были отнесены к классу каротиноидов.

2. ТСХ-анализ капсул «Лютеин 100%» показал наличие в них лютеина и β-каротина. Подвижные фазы I, II, IV позволили обнаружить один неидентифицированный каротиноид в капсулах «Лютеин 100%».

3. Подвижная фаза III, состоящая из петролейного эфира и бензола в соотношении 10:1, не дает возможности идентифицировать лютеин в капсулах «Биоастин» и «Лютеин 100%».

4. Все четыре подвижные фазы позволили идентифицировать β-каротин во всех проанализированных сериях капсул «Биоастин» и «Лютеин 100%».

Рецензенты:

Степанова Э.Ф., д.фарм.н., профессор, профессор кафедры технологии лекарств Пятигорского медико-фармацевтического института – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск;

Кайшева Н.Ш. д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической и токсикологической химии Пятигорского медико-фармацевтического института – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск.

Библиографическая ссылка