Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Махова Е.Г. 1 Выходцева Г.И. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России

Проведен анализ распространённости генетических полиморфизмов тромбофилии у детей с острыми гломерулонефритами с нефритическим синдромом и нефротическим синдромом. Показана значимость присутствия отдельных полиморфизмов в популяции для развития острого гломерулонефрита. Исследование установило, что при остром гломерулонефрите с нефротическим синдромом гетерозиготный полиморфный вариант 677 СТ гена MTHFR выявлялся чаще, чем в группе контроля. Гетерозиготный полиморфизм 66 АG гена MTRR чаще встречается у пациентов с нефротическим и нефритическим синдромом чем в контрольной группе. Проведенное исследование установило, что у детей с острым гломерулонефритом частота минорного варианта Т 677 гена MTHFR встречается чаще, чем у здоровых детей. Определена высокая частота носительства гетерозиготных генотипов 677 СТ гена MTHFR и 66 AG гена MTRR в группе детей с гломерулонефритом, и наличие данных вариантов генов является предиктором неблагоприятного исхода заболевания.

Статья в формате PDF

148 KB

тромбогенные полиморфизмы

гломерулонефрит

педиатрия

1. Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностики и контролируемая терапия нарушений гемостаза. – М.: «Ньюдиамед АО», 2001 – 296 с.

2. Игнатова М.С., Коровина Н.А. Диагностика и лечение нефропатий у детей: Руководство для врачей. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. – С. 91-142.

3. Козловская Н.Л., Боброва Л.А. Генетическая тромбофилия и почки. //

Клиническая нефрология. — 2009. - №.3. – С. 23-32.

4. Мовчан Е.А., Тов Н.Л., Лоскутова С.Н., Чупрова А.В. Роль системы гемостаза в прогрессировании острого гломерулонефрита. Тер. арх. 2001; 6: 41-43.

5. Момот А.П. Принципы и алгоритмы клинико-лабораторной диагностики нарушений гемостаза. – М., 2005 – 104 с.

6. Папаян А.В., Савенкова Н.Д. Клиническая нефрология детского возраста: Руководство для врачей. – СПб.: СОТИС, 1997. – 718 с.

7. Подчерняееа К.С., Меграбян М.Ф. et al. Принципы антитромботической терапии у детей. // Лечащий врач. – 2006. - №.7. – С. 52-56.

8. Строзенко Л.А. Распределение генов фолатного цикла в популяции подростков г. Барнаула Алтайского края /Л.А. Строзенко, В.В. Гордеев, Ю.Ф. Лобанов, А.П. Момот, Е.Н. Воронина // Мать и Дитя в Кузбассе. – 2015. - № 1 (60). – С. 29-34.

9. Чугунова О..Л., Козловкая Н..Л., Шумихина А.И., Гуревич А.И. Проблема наследсвенной тромбофилии в практике детского нефролога. // Педиатрия . – 2012. – Т. 91, №. 6. – С. 34-40.

10. Fodinger, M. Mutation (677 С to T) in the methyltetrahydrofolate reductase gene aggravates hyperhomocysteinemia in hemodialysis patients / M. Fodinger, C. Mannhalter, G. Wolfl et al. // Kidney International. – 1997. – Vol. 52. – P. 517-523.

В последние годы неуклонно возрастает интерес к изучению различных форм сосудистой патологии почек. По современным представлениям, нарушения в системе гемостаза по значимости мало уступают иммунному патологическому процессу в развитии нефритов. От характера и выраженности локальной и системной внутрисосудистой гиперкоагуляции, во многом зависят активность нефрита и скорость прогрессирования нефросклероза [1,2,4,5,6]. Тромбоз у детей с генетически обусловленными тромбофилиями в большинстве случаев возникает при воздействии дополнительных факторов риска. Но и пациенты с гетерозиготными формами мутации нуждаются в профилактической анитромботической терапии. К настоящему времени сложилось представление о тромбозе у детей как о мультифакторной патологии, что определяет его значение в качестве мультидисциплинарной проблемы, привлекающей внимание специалистов различного профиля [3,7]. Наиболее значимым среди наследственных механизмов, повышающих риск тромбозов, является наличие тромбогенных полиморфизмов [9]. Среди последних выделяют мутации G1691А в гене V фактора свертывания (Лейденская мутация), мутация G20210A в гене протромбина,  мутацию С677Т в гене метилентетрагидрофолатредуктазы (МТНFR). К настоящему времени выявлено более ста мутаций. Как правило, для возникновения тромбоза необходима не только генетическая предрасположенность - носительство тромбогенных аллельных полиморфизмов, но и наличие пусковых факторов, к которым относят катетеризацию сосудов, генерализованные инфекции и многое другое, в том числе воспалительный процесс при нефропатиях [8,10]. В настоящее время доказана связь тромбофилии и тромбоза вен, но имеются лишь единичные данные касающиеся связи наследственной тромбофилии и поражения почек [3,7,8,9].

Цель исследования: установить распределение тромбогенных аллельных полиморфизмов у детей с острым гломерулонефритом.

Материал и методы исследования

В качестве материала для проведения молекулярно-генетического исследования на носительство полиморфных вариантов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла использованы образцы ДНК 31 пациента (22 мальчиков и 9 девочек) в возрасте 2-15 лет, находящихся на стационарном  лечении в Алтайской краевой клинической детской больницы г. Барнаула с диагнозом острый гломерулонефрит с нефротическим и нефритическим синдромами.

Определение аллельных вариантов генов осуществлялось в лаборатории молекулярной генетики Алтайского краевого диагностического центра (г. Барнаул). В основе анализа лежал метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR) с использованием конкурирующих TagMan зондов. Проведено генетическое исследование шести протромботических полиморфных маркёров генов-кандидатов: фактора II протромбина (G20210А); фактора V Лейден (Arg506Gln); фактора VII свертывания крови (Arg353Gln); фактора XIII свертывания крови (Val134Leu); фибриногена G(-455)A; ингибитора активатора плазминогена PAI-1 4G(-675)5G и четырех полиморфных вариантов генов, ассоциированных с нарушениями фолатного цикла: метилентетрагидрофолатредуктазы - (MTHFR Ala223Val, С677Т, rs1801133 и MTHFR Е429А, А1298С, rs1801131), В12-зависимой метионин-синтазы - (MTR Asp919Gly, А2756G, rs1805087) и метионин-синтазы редуктазы - (MTRR  Ile22Met, A66G, rs1801394).

Для суждения о нормальном распределении в популяции генотипов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла обследовано 115 здоровых детей (контрольная группа) со сходными демографическими характеристиками.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета программ "STATIstica for Windows 5.0" (STATSoft). Для проверки гипотезы о нормальном распределении использовали критерий Шапиро-Уилка. Попарное сравнение частот аллелей и генотипических групп в разных популяциях проводили с помощью двустороннего точного критерия Фишера (ТКФ) и критерия Пирсона. Соответствие распределения генотипических частот равновесию Харди-Вайнберга проверяли посредством критерия χ2, используя при этом онлайн калькулятор (http://www.oege.org/software/hardy-weiberg.shtml). Различия сравниваемых величин считали статистически значимыми при p<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Гены-кандидаты предрасположенности к повышенному тромбообразованию в дебюте острого гломерулонефрита (ОГН) были исследованы у 22 (71,0%) мальчиков и 9 (29,0%) девочек, при этом отмечено достоверно значимое преобладание мальчиков (р=0,002) по отношению к девочкам при данной патологии.

В исследованной выборке детей с ОГН не было обнаружено гетерозиготных и гомозиготных (минорных аллелей) полиморфных вариантов гена FII G20210A и гена FV G1691A свертывающей системы крови, что не позволило включить данные генотипы в статистическую обработку и провести соответствующие расчеты.

В ходе исследования пациентов с острым гломерулонефритом были рассчитаны частоты аллелей изученных полиморфных вариантов генов системы гемостаза и фолатного цикла (табл. 1). При сравнении распределения частоты аллелей генов факторов свертывания крови у больных гломерулонефритом и контрольной группы, статистически значимых различий выявить не удалось (р>0,05). Однако, результаты генотипирования генов фолатного цикла показали, что частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR у больных с острым гломерулонефритом статистически значимо больше, чем в группе контроля (р=0,026). По данным исследования M. Fodinger и соавт. [98], установлено, что носительство мутантного аллеля Т 677 гена MTHFR у больных с гломерулонефритом сопряжено с высоким темпом утраты функционирующих нефронов и повышением риска развития почечной недостаточности.

Таблица 1

Распределение частот аллелей генов системы гемостаза (тромбогенных полиморфизмов) и фолатного цикла у детей с острым гломерулонефритом

Статистика: р - точный критерий Фишера (ТКФ); в скобках - %.

Интересно, что частота минорного аллеля G 66 гена MTRR определялась достоверно чаще в группе контроля (р<0,001) по сравнению с больными ОГН. Выявленные изменения  можно объяснить данными Л.А. Строзенко и соавт., что в популяции здоровых подростков г. Барнаула наблюдается высокий процент гомозиготного генотипа 66 GG (41,8%) и частоты аллеля G 66 гена MTRR (56,9%), что дает основание предположить адаптивное преимущество полиморфизма А66G гена MTRR в процессе эволюции или возможный «эффект основателя». По остальным частотам аллелей в исследованных полиморфных вариантах генов факторов свертывания крови и фолатного метаболизма статистически значимых различий не наблюдалось.

Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма у детей проверено на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (табл. 2).

Таблица 2

Распределение полиморфных вариантов генов факторов свертывания крови

и генов системы фолатного цикла у детей с ОГН

Примечание. N.O. - наблюдаемые частоты генотипов; N.E. - ожидаемые частоты генотипов; критерий χ2 оценка соответствия равновесию Харди-Вайнберга; число степеней свободы; Ho±S.E. и He±S.E. - соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность с ошибкой.

Обнаружено, что распределение частот генотипов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма соответствует равновесию Харди-Вайнберга.

Как видно из таблицы 2, наблюдаемое распределение генотипов протромботических генов согласуется с ожидаемыми частотами распределения. Высокий уровень ожидаемой гетерозиготности по полиморфным вариантам генов факторов свертывания крови был определен нами для трех генов: G(-455)A гена FGB (0,337); G226A гена FXIII (0,408); 4G(-675)5G гена PAI-1 (0,498). В том числе, выявлен высокий уровень теоретической гетерозиготности по полиморфизмам генов фолатного метаболизма (от 0,467 до 0,490). 

Анализ частоты встречаемости тромбогенных аллельных полиморфизмов у пациентов с ОГН показал (табл. 3) отсутствие достоверно значимых различий в распределении генов системы гемостаза у больных и детей контрольной группы (р>0,05). Однако, в группе детей с ОГН гетерозиготный вариант 677 СТ гена MTHFR и гетерозиготный вариант 66 AG гена MTRR достигали уровня статистической значимости (р=0,007) по сравнению с контрольной группой. Вместе с тем, гомозиготный вариант (мажорный аллель) 677 СС гена MTHFR и гомозиготный вариант (минорный аллель) 66 GG гена MTRR значимо чаще определялись в группе здоровых детей (р=0,015).

Таблица 3

Распределение частот генотипов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла у детей с ОГН

Статистика: р - точный критерий Фишера (ТКФ); в скобках - %

Большой интерес представляло изучение распределения тромбогенных аллельных полиморфизмов у детей ОГН с нефритическим и нефротическим синдромами. Исследование позволило установить, что при ОГН с нефротическим синдромом гетерозиготный полиморфный вариант 677 СТ гена MTHFR выявлялся достоверно чаще, чем в группе контроля (60,0% против 33,9% контрольной группы, (р<0,05)). Напротив, гомозиготный вариант (частый аллель) 677 СС гена MTHFR с большей частотой определялся в группе контроля (57,4% против 35,0% детей с ОГН нефротическим синдромом, (р<0,05)). Следует отметить, что при ОГН с нефритическим синдромом и у детей контрольной группы статистически значимой разницы в распределении гетерозиготного полиморфизма 677 СТ гена MTHFR не обнаружено. Интересно, что гетерозиготный полиморфизм 66 АG гена MTRR с достоверной частотой зафиксирован у пациентов с нефротическим и нефритическим синдромом по сравнению с контрольной группой (р<0,05)). В распределении полиморфных вариантов генов системы гемостаза при ОГН с нефротическим синдромом достоверных различий с группой здоровых детей не было выявлено. Вместе с тем, показано, что гомозиготный вариант (частый аллель) (-675) 5G/5G  гена  PAI-1 значимо чаще выявлен в группе пациентов с ОГН нефротическим синдромом (р<0,05) по сравнению с контролем (40,0% против 17,4% контрольной группы, (р<0,05)).

Заключение. Таким образом, проведенное исследование позволяет сделать вывод о том, что у детей с ОГН частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR встречается с большей частотой, чем среди здоровых лиц. Установлена высокая частота носительства гетерозиготных генотипов 677 СТ гена MTHFR и 66 AG гена MTRR  в группе больных детей, вероятно, наличие данных полиморфных вариантов генов можно рассматривать в качестве предикторов неблагоприятного исхода заболевания. При этом выявлен высокий уровень ожидаемой гетерозиготности по полиморфным вариантам генов фолатного цикла.

Лобанов Ю.Ф., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой педиатрии №2 Алтайского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Барнаул;

Клименов Л.Н., д.м.н., профессор кафедры педиатрии №2 Алтайского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения Российской Федерации,              г. Барнаул.

Библиографическая ссылка