Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Четвертичная соль фосфония — н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид  [(С6Н5)3Р+С16Н33]Br  — относится к III классу токсичности («умеренно опасные» вещества) и обладает высокой бактерицидной и антимикотической активностью в отношении Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis и Candida Albicans [1], что обусловливает перспективность применения данного биологически активного соединения как антисептического средства для местного применения.  Установлена  эффективность  0,05%-ной  мази  н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида на основе вазелина для лечения мастита (воспаления молочной железы) у коров, обеспечивающая выздоровление в течение 5 дней применения, что сопоставимо с интрацистернальным (внутривымянным) введением антисептических средств [7].

Цель исследования

Целью работы явилось изучение потенциальной флоготропной (про- или противовоспалительной) активности  н-гексадецилтрифенилфосфония бромида при наружном применении в форме мази.

Материалы и методы

Технология получения мазей н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида.  Мази н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида изготавливали на основе вазелина в   концентрациях  0,05% и 0,25% — перемешиванием биологически активного соединения (без предварительного измельчения) с основой при температуре  40 °С. Н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид растворяется в основе, образуя однородную мазь-раствор.

Исследование противовоспалительной активности. Эксперименты были проведены на 24 лабораторных беспородных крысах (самцах)  массой 320±33 г. Подопытных животных содержали в условиях вивария (с естественным режимом освещения; при температуре 22–24oC; относительной влажности воздуха 40–50%) с использованием стандартной диеты (ГОСТ Р 50258-92) [3]. Исследования проводили в соответствии с правилами качественной лабораторной практики (GLP) при проведении доклинических исследований в РФ, а также правилами и Международными рекомендациями Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1986) [4].

Каррагениновый отек лап крыс вызывали субплантарным введением (под подошвенный апоневроз) в заднюю правую лапу крыс 0,1 мл 1%-ного водного геля каррагенина [6], который готовили перед введением. Выраженность отека оценивали путем измерения объема лапы животных с помощью плетизмометра 37140 (Ugo Basile, Италия). Измерения производили до индукции отека (исходный объем), через 1, 2, 3, 4 и 24 ч после подподошвенного введения каррагенина, а далее 1 раз в день в течение 13 дней. Лапу животных погружали в камеру плетизмометра до тибиотарзального сустава. 

О противовоспалительной активности исследуемых соединений судили по уменьшению прироста объема лапы, выраженного в процентах к исходному объему по сравнению с группой контроля.

Объем лапы животного до введения каррагенина считали исходным и принимали за 100%.

% прироста объема лапы = [(объем после введения каррагенина в соответствующий момент времени – исходный объем) / исходный объем] *100.

Подопытные животные были разделены на 4 группы по 6 крыс, которым наносили мази на лапу 1 раз в сутки в течение 13 дней:

группа 1:   контроль – вазелин;  

группа 2: препарат сравнения — Тридерм® (Шеринг-Плау лабо Н.В., мазь) для наружного применения, содержащая в 1 г: бетаметазон 0,5 мг (в виде бетаметазона дипропионата 0,64 мг), клотримазол 10 мг, гентамицин 1 мг (1000 МЕ) [5];

группа 3:  0,05%-ная мазь н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида;  

группа 4: 0,25%-ная мазь н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Microsoft Office Excel 2010 с вычислением средней арифметической М, ее стандартного отклонения δ и стандартной ошибки m. Для оценки достоверности различий выборок, имеющих нормальное распределение, применяли параметрический t-критерий Стьюдента. За достоверное принимали различие при уровне вероятности 95 % и более (p ≤ 0,05).

Для максимально точной оценки интенсивности моделированной каррагенином воспалительной реакции и потенциального флоготропного действия разрабатываемых мазей рассчитывали площадь под кривой «Прирост объема лап – время» следующим образом. Вычисляли площадь под кривой с помощью стандартного метода численного интегрирования – метода трапеций, где площадь криволинейной трапеции заменяется площадью многоугольника, составленного из N трапеций, при этом кривая заменяется вписанной в нее ломаной. На каждом из частичных отрезков функция аппроксимируется прямой, проходящей через конечные значения, при этом площадь трапеции на каждом отрезке определяется по формуле :

Высота трапеций составляет небольшую величину, соответствующую отрезку
     При этом площадь под графиком функции можно вычислить как сумму площадей составляющих прямоугольных трапеций.

Результаты и обсуждение

Каррагениновый отек лап крыс

Воспалительная реакция, вызванная субплантарным введением 1%-ного геля каррагенина, развивалась в виде отека с увеличением объема лап крыс на 16–24 % от исходного объема. Максимальное развитие отека наблюдалось у животных контрольной группы через 3 ч после введения каррагенина, что соответствует литературным данным о развитии каррагенинового отека лап крыс [8, 9]. Тридерм проявил противовоспалительную активность на сроке 3 и 4 ч после введения каррагенина с подавлением отека на 62 % (р = 0,02). На сроке 4 ч после индукции отека наружное введение мази тридерма способствовало  подавлению отека лап крыс на 57 % (р = 0,02). На 3-е, 4-е, 5-е, 6-е и 7-е сутки (через 48, 72, 96, 120 и 144 ч после введения каррагенина) противовоспалительное действие тридерма проявилось в виде подавления отека лап крыс на 79, 80, 79, 85 и 95% (р= 0,002; 0,01; 0,01; 0,02 и 0,05) соответственно. На 7-й день эксперимента отек лап крыс под действием тридерма полностью исчезал.

Мази н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида в концентрации 0,05% и 0,25% не проявили противовоспалительную активность в условиях эксперимента (таблица 1).

Таблица 1

Процент прироста объемов лап крыс на различных сроках после моделирования острого каррагенинового отека на фоне лечения мазью Тридерм,  0,05%-ной и 0,25%-ной мазями н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида   М±m (δ), Т-тест

Сроки   Группы	Группа-1 Контроль	Группа-2 Тридерм		Группа-3 Мазь 0,05%		Группа-4 Мазь 0,25%
		М±m (δ)	Ттест	М±m (δ)	Ттест	М±m (δ)	Ттест
1 ч	16,3±3,5 (8,6)	9,2±2,3 (5,8)	0,07	12,5±3,7 (9,7)	0,24	9,0±3,0 (6,7)	0,07
2 ч	21,3±5,2 (12,7)	14,0±3,2 (7,8)	0,14	16,0±5,0 (13,4)	0,25	16,9±3,2 (7,1)	0,24
3 ч	24,2±5,1 (12,4)	9,0±2,5 (6,1)	0,02	23,1±6,0 (15,9)	0,45	27,8±1,9 (4,3)	0,26
4 ч	22,6±4,9 (12,1)	9,7±3,2 (7,8)	0,03	25,5±6,0 (15,8)	0,37	33,1±5,5 (12,4)	0,10
24 ч	19,6±6,3 (15,3)	9,2±1,6 (3,9)	0,08	23,8±4,1 (11,0)	0,30	30,1±1,5 (3,4)	0,08
48 ч	21,2±4,2 (10,2)	4,5±1,9 (4,6)	0,004	26,7±2,6 (6,8)	0,15	24,7±4,6 (10,4)	0,29
72 ч	15,7±3,9 (9,7)	3,1±1,2 (3,0)	0,01	20,8±2,7 (7,2)	0,16	19,4±4,5 (10,0)	0,27
96ч	10,4±2,6 (6,4)	2,1±1,4 (3,4)	0,01	15,3±1,3 (3,4)	0,07	12,3±3,3 (7,3)	0,22
120ч	8,0±3,0 (7,5)	0		6,8±2,9 (7,6)	0,39	12,4±1,4 (3,1)	0,15
144ч	4,6±2,2 (5,4)	0		8,4±2,9 (7,8)	0,18	6,7±2,1 (4,7)	0,25
168ч	4,0±1,9 (4,7)	0		4,8±2,4 (6,3)	0,40	2,1±1,9 (4,4)	0,26
192ч	3,1±1,5 (3,7)	0		1,7±0,9 (2,4)	0,23	0,8±0,6 (1,4)	0,10
264ч	0	0		0		0

— Т-тест по сравнению с контрольной группой (0,05 г вазелин).

Однако при использовании 0,25%-ной мази н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида замечена тенденция к усилению величины воспалительного отека лап крыс, вызванного субплантарным введением 1%-ного водного геля каррагенина (рис. 1).

Рис. 1. Процент прироста объема лап крыс, вызванного субплантарным введением каррагенина, на фоне наружного лечебно-профилактического введения мази тридерма, мази н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида 0,05% и мази н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида 0,25%.

«Провоспалительный» эффект при увеличении концентрации н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида в мази может быть обусловлен тем, что н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид  является   амфифильным детергентом,  работающим как в водной, так и жировой фазе и  вследствие этого — пенетрирующим агентом, проникающим  через  биомембраны  [2], что может способствовать глубокому проникновению каррагенина в ткани и тем самым — усилению воспаления.

При вычислении площади под кривой «Прирост объема лап – время» мы не обнаружили различий в показателях контрольной группы и групп животных, которым использовали мази н-гексадецилтрифенилфосфония бромида, что позволяет нам делать заключение об отсутствии местно-раздражающих и истинно провоспалительных свойств у этого соединения (табл. 2 и рис. 2).

Таблица 2

Площади под кривой «Прирост объема лап – время» при моделировании отека у крыс субплантарным введением каррагенина, на фоне наружного лечебного применения мазей н-гексадецилтрифенилфосфония бромида и тридерма

Рис. 2. Площади под кривой «Прирост объема лап – время» при моделировании отека у крыс субплантарным введением каррагенина, на фоне наружного лечебного применения мазей н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида и Тридерм

Выводы

Н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид при наружном лечебном применении в течение 13 дней в форме мази (0,05% и 0,25%) на лапы крыс с моделированным каррагениновым отеком не оказывает флоготропного (ни противовоспалительного, ни провоспалительного) действия.

Рецензенты:

Зиганшин А.У., д.м.н., профессор, зав. кафедрой фармакологии фармацевтического факультета КГМУ, г. Казань;

Альберт А.Р., д.б.н., профессор, кафедра генетики, института фундаментальной медициы и биологии, КФУ, г. Казань.