Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

СОСТОЯНИЕ ТH2 КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ С И БЕЗ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ ЛЕГКИХ

БЕСТАЕВ Д.В. 1 НОВИКОВ А.А. 1 НАСОНОВ Е.Л. 1
1 ФГБНУ "НИИР им. В.А.Насоновой"
При ревматоидном артрите (РА) важной особенностью активации CD+4 Т- клеток является поляризация иммунного ответа по Th1-типу с преобладанием синтеза провоспалительных цитокинов над противовоспалительными Th2-цитокинами. Воспалительные медиаторы вносят значительный вклад в процесс инициации и прогрессирования легочного фиброза у больных РА с интерстициальным поражением легких (ИПЛ), при этом цитокины, продуцируемые Th1 и Th2-клетками обнаруживают противоположную активность в процессах фиброгенеза. Целью исследования являлось изучение уровней цитокинов, характеризующих Th2 – иммунный ответ у больных ревматоидным артритом с и без ИПЛ. Уровень ИЛ4, ИЛ5, ИЛ10, ИЛ13 сыворотки крови у больных РА с и без ИПЛ, а также здоровых доноров определяли с помощью мультиплексной технологии хМAР на анализаторе Bio-Plex200 (Вio-Rad, США). У больных РА с ИПЛ обнаружилась гиперсекреция Th2-цитокинов, которая определяет функциональное напряжение Th2-клеточного иммунитета. Возможно, дисрегуляция цитокинового обмена является ведущим фактором в патогенезе ИПЛ при РА.
анализатор Bio-Plex200.
технологии хМAР
Th2-клеточный иммунитет
ИПЛ
ревматоидный артрит
1. Насонов Е.Л., Каратеев Д.Е., Балабанова Р.М. Ревматоидный артрит. Насонов Е.Л., Насонова В.А. // Ревматология. Национальное руководство. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – С. 290-331.
2. McInnes I, Schett G. The pathogenesis of rheumatoid arthritis // New Engl JMed. – 2012. – №365. – Vol. 23. – 2205-19.
3. Raza K., Falciani F., Curnov S.J. et al. Early rheumatoid arthritis is characterized by a distinct and transient synovial fluid cytokine profile of T cell and stromal cell origin // Arhr Res Ther. – 2005. – Vol.7. – P. 784-795.
4. Fiocco U., Sfriso P., Oliviero F. et al. Co-stimulatory modulation in rheumatoid arthritis: the role of (CTLA4-Ig) abatacept. // Autoimmun Rev. – 2008. – № 8. – P. 76-82.
5. Новиков А.А., Александрова Е.Н., Насонов Е.Л. Протеомные исследования в ревматологии // Научно-практическая ревматология. – 2012. – 50(6). – С. 56-62.
6. Brennan F., Mclnnes I. Evidence that cytokines play a role in rheumatoid arthritis // J Clin Invest 2008. – №118. – Vol.11. – P. 3537-45.
7. Mori S., Cho I., Koga Y., et al. Comparison of pulmonary abnormalities on high-resolution computed tomography in patients with early versus longstanding rheumatoid arthritis // J Rheumatol. – 2008. – Vol. 35. – P. 1513–1521.
8. Wynn T.A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm // Nat. Rev. Immunol. – 2004. – Vol.4. – P. 583–594.
9. Jakubzick C., Choi E.S., Joshi B.H. et al. Therapeutic attenuation of pulmonary fibrosis via targeting of IL-4- and IL-13-responsive cells // J. Immunol. – 2003. – № 171. – P.2684-2693.
10. Fulkerson P.C., Fischetti C.A., Rothenberg M.E. Eosinophils and CCR3 regulate interleukin-13 transgene-induced pulmonary remodeling // Am. J. Pathol. – 2006. – № 169. – P. 2117-2126.
Ревматоидный артрит (РА) – аутоиммунное ревматическое заболевание неизвестной этиологии, при котором отмечается деструкция костной и хрящевой ткани суставов, формирование деформаций, а также широкий спектр системных проявлений (СП) [1]. По современным представлениям, развитие иммунопатологического процесса при РА характеризуется активацией клеток иммунной системы (Т- и В-лимфоциты, макрофаги, нейтрофилы, фибробласты), синтезом широкого спектра цитокинов, индуцирующих воспаление, деструкцию хряща и костной ткани. При РА выявляется дисбаланс между гиперпродукцией провоспалительных и противовоспалительных цитокинов с преобладанием синтеза первых над вторыми [1,2].

В иммунопатогенезе многих заболеваний существенную роль играет функциональная активность различных субпопуляций Т-клеток (Th1 и Th2 типов). Th1-клетки ответственны за клеточный иммунитет и участвуют в патогенезе аутоиммунных заболеваний, Th2-клетки поддерживают гуморальный иммунитет и развитие аллергических заболеваний [2].

Важной особенностью активации CD+4 Т- клеток при РА является поляризация иммунного ответа по Th1-типу с преобладанием синтеза провоспалительных цитокинов (ИЛ 12, ИФН γ, ФНО α, ИЛ1 β, ИЛ 7, ИЛ 17, ИЛ 18) над противовоспалительными Th2-цитокинами (ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 10, ИЛ 13) [1,2]. Th1-цитокины инициируют каскад иммунопатологических реакций, приводящих  к воспалению и костной деструкции. Роль Th2-иммунного ответа в развитии РА не ясна. Получены данные о транзиторном повышении концентрации Th2-цитокинов ИЛ 4 и ИЛ 13 в синовиальной жидкости больных ранним РА. Полагают, что Th2-цитокины могут препятствовать апоптозу синовиоцитов под действием оксида азота и тем самым способствовать персистированию заболевания [3].

          Применение передовых технологий, таких как мультиплексный анализ цитокинов, дает возможность изучения цитокинового профиля, новых механизмов патогенеза РА и его СП [4].  Изучение роли цитокинов в развитии СП при РА является актуальной задачей в связи с разработкой и внедрением в терапевтическую практику антагонистов их провоспалительного действия – генно-инженерных биологических препаратов [5].

          К СП РА относится интерстициальное поражение легких (ИПЛ). В зависимости от метода радиологического исследования легких (обзорной рентгенографии или компьютерной томографии высокого разрешения (КТВР) выявляемость ИПЛ при РА колеблется от 5 до 70 % [6].

          Развитие легочного фиброза (ЛФ) у больных РА с ИПЛ является актуальной проблемой патологии легких. Существует мнение о ключевой роли воспаления на начальном этапе развития ЛФ. Воспалительные медиаторы вносят значительный вклад в процесс инициации и прогрессирования ЛФ, при этом цитокины, продуцируемые Th1 и Th2-клетками, обнаруживают противоположную активность в процессах фиброгенеза. В литературе обсуж­дается важность оценки цитокинового профиля при ИПЛ, ассоциированного с РА. Изучение уровней цитокинов позволяет получать информацию о соотношении процессов активации Т-хелперов 1-го и 2-го типов, прояснить их роль в процессах фиброгенеза легких,  прогнозировать дальнейшее течение и исход заболевания, а также оптимизировать терапию [7]. Таким образом, цель нашего исследования – изучение уровней цитокинов, характеризующих Th2 – иммунный ответ у больных РА с и без ИПЛ.

Материал и методы. В исследование были включены 15 больных РА с признаками ИПЛ (первая группа), 15 пациентов РА без поражения легких (вторая группа), последовательно поступивших на лечение в клинику ФГБНУ «НИИР им. В.А. Насоновой» и 15 здоровых доноров – третья группа. Диагноз РА ставился на основании критериев Американской коллегии ревматологов – ACR - 1987. Все обследуемые были сопоставимы по полу и возрасту. Большинство больных были женского пола, среднего возраста с длительным течением РА, серопозитивными по ревматоидному фактору (РФ), антителам к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП), имели высокую воспалительную активность, II-III рентгенологическую стадию, преимущественно II функциональный класс. Активность РА определялась по индексу DAS28.

Клиническая характеристика больных представлена в таблице 1.          

 

Таблица 1

Клиническая характеристика больных РА с и без ИПЛ

 

Параметр

Больные РА с ИПЛ

n=15

Больные РА без ИПЛ   n=15

Р

Пол: мужчины/женщины,  n

4/11

4/11

 

Возраст,лет, M± σ

50,4 ± 9,4

49,8 ±10,1

НД

Длительность РА, лет,M± σ

12,6 ± 8,3

11,9 ±7,4

НД

Внесуставные проявления РА:

 

 

 

ревматоидные узлы, n

полиневропатия, n

синдром Шегрена, n

3(20%)

2(13%)

2(13%)

2(13%)

2(18%)

1(7%)

 

НД

DAS28: M± σ

5,53  ± 1,33

5,34 ± 1,52

НД

Стадия РА; n

 

I

2 (13%)

2(13%)

НД

II

7 (47%)

8(53%)

НД

III

5 (33%)

4(27%)

НД

IV

1(7%)

1(7%)

НД

ФК; n

I

II

III

 

9

5

1

 

10

4

1

 

Серопозитивные по РФ, n

12(80%)

11(73%)

НД

Серопозитивные по АЦЦП, n

13(87%)

12(80%)

НД

НД – статистическая недостоверность различий

 

Уровень ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 10, ИЛ 13 сыворотки крови у больных РА с и без ИПЛ, а также здоровых доноров определяли с помощью мультиплексной технологии хМAР на анализаторе Bio-Plex200 (Вio-Rad, США).

Для выявления признаков ИПЛ у больных РА проводилась компьютерная томография высокого разрешения на спиральном компьютерном томографе GE «Light Speed VCT» (с толщиной  среза 0,65 мм).

Статистическую обработку данных проводили с использованием программы Statistica 6.0 (StatSoft, США), включая общепринятые методы параметрического и непараметрического анализа. При сравнении параметров с нормальным распределением применялся парный t-тест для независимых выборок. Для параметров, распределение которых отличалось от нормального, при сравнении двух групп использовали критерий Манна – Уитни, а при сравнении трех и более групп – критерий Краскела – Уоллеса, результаты представлены в виде медианы (Ме) с интерквартильным размахом (ИР) [25-й;    75-й процентили]. Корреляционный анализ проводили по методу Спирмена. Различия считались достоверными при p<0,05.

Результаты и обсуждение. В результате проведенного исследования выявлено статистически достоверное повышение концентраций ИЛ 5, ИЛ 10 у больных РА с и без ИПЛ по сравнению со здоровыми донорами (табл. 2). Концентрация ИЛ4 у пациентов РА с ИПЛ оказалась выше, чем у обследуемых из других групп, однако статистической достоверности разница достигала только по сравнению со здоровыми донорами (р = 0,04). У больных РА с и без ИПЛ концентрация ИЛ 13 оказалась ниже, чем у здоровых доноров          (р > 0,05) (табл.2).

Таблица 2

 

Концентрация цитокинов в сыворотках крови у больных  РА с и без ИПЛ и здоровой контрольной группы, Ме [25-й; 75-й процентили], пг/мл

 

Цитокин

Гр.1 Здоровые

Гр.2

Больные РА без поражения легких

Гр.3.

Больные РА

 с ИПЛ

                              Р              

гр.1/гр.2

гр.1/гр.3

гр.2/гр.3

ИЛ4

2,4 [0,2; 5,6]

3,6 [2,4; 5,4]

4,8 [3,3; 6,7]

0,2

0,04

0,5

ИЛ5

1,6 [0,3; 5,2]

8,5 [3,9; 19,2]

8,7 [2,3; 20,9]

0,002

0,0001

1,0

ИЛ10

12,9 [5,6; 43,6]

354 [18,7; 1002,8]

1161,2[774,2;

1632,]

0,0007

0,0001

0,008

ИЛ13

16,2 [8,6; 21,4]

7,3 [4,9; 15,7]

6,9 [5,7; 15,2]

0,1

0,4

1,0

 

Для определения чувствительности и специфичности Тh2-цитокинов у больных РА с ИПЛ проведен ROC-анализ. Построение ROC-кривой дало возможность оценить диагностическую значимость показателей и сравнить их информативность между собой. Наиболее значимые показатели чувствительности и специфичности у больных с ИПЛ при РА обнаружили  ИЛ 5, ИЛ 10 (табл. 3).

Площадь под ROC-кривой оказалась следующей: у ИЛ 5-0,78[ДИ95 % 0,70-0,87], ИЛ 10-0,76 [ДИ95 % 0,66-0,84] (рисунок).

ил10

ил5

 

 

ROC-кривые для цитокинов

 

Специфичность и чувствительность ИЛ 5 составила 55 и 86 %, а ИЛ 10  – соответственно 63 и 70 % (табл. 3).

Таблица 3

 

Данные ROC-анализа Тh2-цитокинов у больных РА с ИПЛ

 

Цитокин

Чувствительность

%

Специфичность

%

Точка

 разделения

Площадь под                ROC-кривой

Р

ИЛ5

 

86

55

2,34

0,78

[ДИ95% 0,70-0,87]

0,001

ИЛ10

70

63

23,90

0,76

[ДИ95% 0,66-0,84]

0,001

 

Проведен корреляционный анализ базальных концентраций цитокинов с клинико-лабораторными проявлениями у пациентов РА с ИПЛ (табл. 4).

Таблица 4

 

Корреляционный анализ базальных уровней цитокинов и клинико-лабораторных проявлений ИПЛ при РА (коэффициент корреляции Пирсона – r ) (р<0,05)

АНАЛИЗИРУЕМЫЙ

ПРИЗНАК

КОРРЕЛЯЦИИ

DAS28

нет

ДЛИТЕЛЬНОСТЬ

нет

СИСТ. ПР.

ИЛ10 (-0,5)

СРБ мг/л

нет

R-СТАД

ИЛ 13(0,5)

РФ МЕ/мл

ИЛ 5(0,5)

АЦЦП ед/мл

ИЛ4 (-0,6)

КТВР

нет

 

 

 

 

 

 

 

Обнаружены статистически значимые положительные корреляции: ИЛ 13 с рентгенологической стадией РА, ИЛ 5 с РФ и обратные корреляции ИЛ 4  с АЦЦП, ИЛ 10 с системными проявлениями РА. При этом не было выявлено статистически достоверной корреляции уровней цитокинов и индекса активности РА DAS28.

Th-2 цитокины   ИЛ 4, И 5 и ИЛ 13 вовлечены в процесс фиброзирования при различных системных воспалительных заболеваниях, в том числе при РА [8]. ИЛ4 способствует продукции фибробластами проколлагенов и фибронектина. ИЛ4 служит фактором хемотаксиса для фибробластов, стимулирует их пролиферацию и продукцию ими цитокинов. По выраженности стимулирующего влияния на синтез фибробластами коллагена ИЛ 4 не уступает трансформирующему фактору роста b1 (TGFb1), цитокину, обладающему мощным профиброзным действием. ИЛ 5 может способствовать фиброзообразованию в легких посредством рекрутирования эозинофилов, вырабатывающих TGF b1, тромбоцитарный фактор роста и ИЛ 13. Повышенные уровни ИЛ 13 выявляются в жидкости бронхоальвеолярного лаважа больных идиопатическим фиброзом легких. Экспрессия как ИЛ 13, так и его рецептора первого типа ИЛ 13Rα1 коррелирует с тяжестью заболевания. В дополнение к экспрессии рецептора сигналинга ИЛ 13, фибробласты экспрессируют рецептор ИЛ 13Rα2, который подавляет ИЛ13/ИЛ13Rα1-индуцируемый ответ, включая ЛФ [9,10].  Наше исследование выявило активацию Th-2 иммунного ответа. Уровни  ИЛ 4, ИЛ 5 у больных РА с ИПЛ оказались выше, чем у обследуемых в других группах, и в то же время концентрация ИЛ 13 оказалась ниже у больных РА с и без ИПЛ, по сравнению со здоровыми лицами. Низкие уровни ИЛ 13, вероятно, связаны с гиперэкспрессией рецептора ИЛ 13Rα2, которую может индуцировать ИФНγ.

Проведение ROC-анализа позволило выделить значимые Тh2-цитокины у больных РА с ИПЛ. Наиболее важными из цитокинов, обладающими высокой чувствительностью и специфичностью, оказались ИЛ 5, ИЛ 10.

Заключение. Таким образом, у больных РА с ИПЛ обнаруживается гиперсекреция Th2-цитокинов, которая определяет функциональное напряжение Th2-клеточного иммунитета. Возможно, дисрегуляция цитокинового обмена является ведущим фактором в патогенезе ИПЛ при РА. Выявленная активация регуляторов «гуморального» антигенспецифического иммунного ответа свидетельствует о необходимости проведения исследований по изучению эффективности и безопасности анти-В-клеточной терапии у больных РА с ИПЛ.

Рецензенты:

Белов Б.С., д.м.н., ФГБНУ НИИР им. В.А. Насоновой, г. Москва;

Сатыбалдыев А.М., д.м.н., ФГБНУ НИИР им. В.А. Насоновой, г.Москва.


Библиографическая ссылка

БЕСТАЕВ Д.В., НОВИКОВ А.А., НАСОНОВ Е.Л. СОСТОЯНИЕ ТH2 КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ С И БЕЗ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ ЛЕГКИХ // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 3. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=18422 (дата обращения: 19.05.2022).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074