Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ СОЛИ АДЕМЕТИОНИНА С ТОЛУОЛСУЛЬФОКИСЛОТОЙ

Морозов А.В. 1
1 Пятигорский медико-фармацевтический институт
Проведено изучение стабильности соли адеметионина. В первой серии субстанцию соли адеметионина герметично закрывали во флаконах и хранили при температуре 20 ± 2 °С. Вторую серию в герметично закрытых флаконах хранили в термостате при температуре 40 ± 1 °С. В каждой серии проводили количественное определение адеметионина с периодичностью в 60 дней – в первой серии и 30 дней – во второй. Количественное определение адеметионина проводили спектрофотометрическим методом. Содержание адеметионина рассчитывали по рабочему стандартному образцу, в качестве которого использовали субстанцию адеметионина. Изучение деструкции адеметионина во время хранения при 20 и 40 °С показало, что адеметионин сохраняет показатели качества в первом случае в течение 24 месяцев, во втором – 12 месяцев. В качестве второго метода контроля стабильности был использован метод ТСХ. Хроматографировали в системе этанол : вода : уксусная кислота (65:34:1). После высушивания хроматограммы проявляли в УФ-свете. В образцах, хранившихся 2 года при температуре 20 °С и при температуре 40 °С 12 месяцев, дополнительных пятен не появляется. Установлен оптимальный срок хранения соли – 2 года.
соль.
толуолсульфокислота
адеметионин
1. Регистр лекарственных средств России РЛС. Энциклопедия лекарств. - 19-й вып. / гл. ред. Г.Л. Вышковский. – М. : РЛС-МЕДИА, 2010. - С. 80.
2. Регистр лекарственных средств России РЛС. Энциклопедия лекарств. - 19-й вып. / гл. ред. Г.Л. Вышковский. – М. : РЛС-МЕДИА, 2010. - С. 963.
3. Aminosugar, glycosaminoglycan, and S-adenosylmethionine composition for the treatment and repair of connective tissue [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.google.ru/patents/US6271213.
4. Composition and use of ademetionine against ageing of the skin [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.google.com/patents/US4956173.
5. Sulphonic acid salts of S-adenosilmethionine [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.google.com/patents/US4057686.

Введение

Адеметионин (S - аденозил – L - метионин) играет важную роль в биохимических процессах в организме человека. Адеметионин производится человеческим организмом и присутствует практически во всех тканях организма. Он важен для образования глутатиона, водорастворимого пептида, помогающего организму бороться со свободными радикалами. Адеметионин также помогает при жировой дистрофии печени, а также играет роль в защите организма от сердечной недостаточности. Является донором метильных групп, что важно для метаболизма. В общем адеметионин повышает уровень функционирования остальных аминокислот в организме. Дефицит адеметионина может стать причиной дисфункции важного гормона – мелатонина, который играет роль в регулировании процесса сна и кардиоритме. Применяется адеметионин при внутрипеченочном холестазе, токсическом поражении печени, в т.ч. алкогольном, лекарственном, вирусном гепатите и т.п. [1].

Однако главным недостатком адеметионина является его неустойчивость при комнатной температуре. Основным продуктом распада адеметионина является метилтиоаденозин (МТА). Процесс распада адеметионина на метилтиоаденозин связан с нуклеофильной атакой карбоксильного углерода на аминокислотный гамма-метилен, который вступает в реакцию с соседним сульфонием. На стабильность адеметионина, помимо температуры, также влияет значение pН. Кислое значение pН предотвращает быстрое разрушение адеметионина до МТА. При высоком значении pН стабильность в растворе низкая и молекула быстро разлагается согласно различным механизмам [2-4].

Добавление растворов различных кислот, солей, а также полианионов и высокомолекулярных веществ к раствору адеметионина приводит к получению стабильных солей адеметионина [5].

В данной статье нами изучена стабильность соли адеметионина с толуолсульфокислотой.

Методики исследования

Субстанцию адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой получали биосинтетическим способом.

Для этого 150 г дрожжей, накопленных в среде Шленка, подвергали лизису, путем добавления 20 мл этилацетата и 100 мл 0,35 Н кислоты серной, перемешивали 2 ч. По окончании лизиса остатки дрожжей отделяли от лизата с помощью центрифугирования. К полученному лизату добавляли 50 мл 5%-ного водного раствора пикролоновой кислоты. Образующийся осадок отстаивали в течение 12 ч, после чего его промывали дважды водой. Полученный таким образом осадок растворяли в 40 мл смеси, состоящей из 0,1 н серной и 0,1 н п-толуолсульфокислоты. К полученному раствору добавляли 40 мл н-бутанола. После разделения органический слой отбрасывали, а к водному добавляли обесцвечивающий уголь и фильтровали. К фильтрату добавляли 80 мл этанола при перемешивании. Образующийся осадок отстаивали и отделяли декантацией. Полученный осадок растворяли в 5 мл 15%-ного раствора п-толуолсульфокислоты в метаноле. К полученному раствору добавляли изопропанол. Сразу образуется белый гигроскопичный осадок, очень легко растворимый в воде и практически не растворимый в основных органических растворителях.

Для полученной субстанции определяли сроки хранения.

В первой серии субстанцию соли адеметионина с толуолсульфокислотой герметично закрывали во флаконах и хранили при температуре 20±2 °С. Вторую серию в герметично закрытых флаконах хранили в термостате при температуре 40 ± 1 °С. В каждой серии проводили количественное определение адеметионина с периодичностью в 90 дней.

Количественное определение адеметионина проводили спектрофотометрическим методом. Спектр поглощения адеметионина в 0,1 M растворе кислоты хлористоводородной приведен на рисунке 1.

Рис. 1. Спектр поглощения раствора адеметионина в 0,1 M растворе кислоты хлористоводородной.

В спектре поглощения адеметионина имеется одна широкая полоса поглощения с максимумом при 256 нм. Толуолсульфокислота в этой области не имеет светопоглощения и не мешает определению адеметионина. Содержание адеметионина рассчитывали по рабочему стандартному образцу, в качестве которого использовали субстанцию, соответствующую ФС.

Точную навеску соли массой около 0,1 г растворяли в мерной колбе вместимостью 100 мл в 0,1 М кислоте хлористоводородной и доводили до метки той же кислотой. Аликвоту 25 мл переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили до метки 0,1 М кислотой хлористоводородной. Оптическую плотность полученного раствора регистрировали при длине волны 256 нм. Параллельно измеряли оптическую плотность РСО с концентрацией 0,001%.

Расчет содержания адеметионина проводили по формуле:

где:

,- значение оптической плотности исследуемого и стандартного растворов;

����т - концентрация раствора РСО, %;

а – масса навески исследуемого образца.

Результаты анализа адеметионина, полученные в период хранения, приведены в таблице 1.

Таблица 1. Изменение содержания адеметионина (%) в процессе хранения

t, дни

T °С

90

180

270

360

450

540

630

720

20 °С

41,2

41,15

41,17

41,15

41,14

41,15

41,13

41,11

40 °С

41,2

41,18

41,15

41,12

40,90

40,70

40,55

40,15

Приведенные результаты показывают, что при нормальной температуре соль адеметионина с толуолсульфокислотой сохраняет стабильность на протяжении всего срока хранения. Срок наблюдения был 2 года. При температуре 40 °С через 360 суток наблюдается тенденция к снижению содержания адеметионина.

В качестве второго метода контроля стабильности был использован метод ТСХ. Для выявления возможных продуктов деструкции адеметионин был подвержен термическому разложению. Образец субстанции метионина помещали в термостат и выдерживали в течение часа при 100 °С. Далее проводили хроматографирование всех образцов адеметионина: подвергшийся термическому разложению; образцы, заложенные на хранение; фармакопейный образец.

Из всех образцов готовили водные растворы с концентрацией около 0,1%. Хроматографировали в системе этанол : вода : уксусная кислота (65:34:1). После высушивания хроматограммы проявляли в УФ-свете. На хроматограммах проявляется четкое пятно адеметионина с =0,3. В образце, подвергнутом термическому разложению, проявляется дополнительное пятно с =0,65. В образцах, хранившихся 2 года при температуре 20 °С и при температуре 40 °С 12 месяцев, дополнительных пятен не появляется. Однако при температуре 40 °C после хранения 13-15 месяцев появляется дополнительное пятно с ����=0,62.

Эти результаты показывают, что соль адеметионина с толуолсульфокислотой стабильна не менее 2 лет.

Выводы.

1. Проведено изучение деструкции адеметионина во время хранения при 20 °С и при 40 °С и показано, что адеметионин сохраняет показатели качества в процессе хранения в первом случае в течение 24 месяцев во втором случае – в течение 12 месяцев.

2. Методом ТСХ показано, что после хранения в течение 24 месяцев при 20 °С и 12 месяцев при 40 °С могут появляться продукты деструкции адеметионина.

3. На основании исследования стабильности можно установить срок хранения соли адеметионина с толуолсульфокислотой – 2 года.

Рецензенты:

Компанцев В.А., д.фарм.н., профессор кафедры неорганической химии Пятигорского медико-фармацевтического института, филиала ГБОУ ВПО «ВолгГМУ», г. Пятигорск.

Кодониди И.П., д.фарм.н., доцент кафедры органической химии Пятигорского медико-фармацевтического института, филиала ГБОУ ВПО «ВолгГМУ», г. Пятигорск.


Библиографическая ссылка

Морозов А.В. ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ СОЛИ АДЕМЕТИОНИНА С ТОЛУОЛСУЛЬФОКИСЛОТОЙ // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 6. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=10976 (дата обращения: 02.12.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074