Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,737

ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ШИШКОЯГОД МОЖЖЕВЕЛЬНИКА ДЛИННОХВОЙНОГО

Писарев Д.И. 1 Новиков О.О. 1 Жилякова Е.Т. 1 Индина И.В. 1 Захаров О.В. 1 Казакова В.С. 1 Придачина Д.В. 1
1 ФГАОУ ВПО Белгородский государственный национальный исследовательский университет
Статья посвящена изучению полифенольных соединений можжевельника длиннохвойного. Можжевельник длиннохвойный – представитель флоры Кавказа, по своим фармакологическим свойствам близок к фармакопейному виду – можжевельнику обыкновенному. Известно, что терапевтическое действие можжевельников определяется не только эфирными маслами, но и полифенолами. В этой связи изучен состав полифенольных соединений можжевельника длиннохвойного. Для этого использовали высокоэф-фективную жидкостную хроматографию и масс-спектрометрию в варианте MALDI/TOF/MS. Хромато-графирование осуществляли в градиентном режиме элюирования. Масс-спектрометрию проводили в режиме образовании положительных ионов. В результате проведённых исследований установлено, что состав полифенольных соединений плодов можжевельника длиннохвойного представлен только флавоноидами. Показано, что среди флавоноидов оказались гликозиды четырёх агликонов, а именно апигени-на, лютеолина, кверцетина и скутелляреина. Кроме того, в плодах обнаружены бифлавоноиды, содержа-ние которых оказалось около 61,0% по отношению к другим флавоноидам.
масс-спектрометрия.
ОФ ВЭЖХ
флавоноиды
полифенольные соединения
можжевельник длиннохвойный
1. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное рас-тительное сырьё. / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1991. – 397 с.
2. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. – СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. – 663 с.
3. Исследование полифенольных соединений шишкоягод можжевельника обыкновенного (JuniperuscommunisL.) / Алтымышев А.А. [и др.] // Изв. АН КиргССР. – 1986. - №3. – С. 28 – 29.
4. Клюев Н.А. Использование масс-спектрометрии в структурном анализе компонентов эфирных масел / Н.А. Клюев, В.А. Замуреенко, Н.С. Евтушенко // Фармация. – 1987. - №5. – С. 69 – 75.
5. Писарев Д.И. Состав эфирных масел хвои и плодов можжевельника длиннохвойного / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко // Фармация. – 2005. - №1. – С. 12 – 14.

В настоящее время в отечественной научной медицине практическое применение находит можжевельник обыкновенный – JuniperuscommunisL., его плоды (шишкоягоды) включены в ГФ XI изд. в качестве диуретического средства. Использование плодов других видов можжевельников не предусмотрено документацией [1].

Наиболее важной в практическом отношении группой биологически активных веществ большинства представителей рода JuniperusL. является эфирное масло. Однако фармакологическое действие можжевельников проявляется не только за счёт эфирных масел, но и комплекса полифенолов. Среди флавоноидных структур, свойственных для этого рода, характерно присутствие 6-гидроксифлавонов, а также бифлавонов [3, 4].

В качестве объекта исследования нами выбран можжевельник длиннохвойный - JuniperusoblongaBieb. J. oblongaBieb.– представитель секции Oxycedrus. На Кавказе данный представитель используется подобно J. communisL. [5]. В официальной медицине настоящий объект не применяется по причине недостаточной химической и фармакологической изученности. Шишкоягоды его употребляются при болезнях почек, мочевого пузыря, дизурии и почечнокаменной болезни. Плоды проявляют сильное мочегонное действие, а также используются как противоцинготное средство [2].

Ранее нами изучен состав полифенолов плодов J. oblongaBieb. классическими методами анализа. Использование современных методов для анализа полифенолов данного объекта не применялось. Поэтому целью настоящего исследования является химическое изучение полифенолов шишкоягод J. oblongaBieb.

Хроматографические исследования полифенолов проводили на хроматографическом приборе «AgilentTechnologies 1200 Infinity». Детекцию осуществляли с помощью диодно-матричного детектора серии Agilent 1200 (диапазон длин волн от 190 до 950 нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; объемом 13 мкл), шаг сканирования - 2 нм.

Сумму полифенолов подвергали хроматографическому разделению в следующих условиях: подвижная фаза: 0,5%-ный водный раствор кислоты уксусной (А) – ацетонитрил (Б) в градиентном режиме элюирования; колонка: AscentisexpressC182,7μм × 100 мм × 4,6 мм; скорость подвижной фазы – 0,5 мл/мин; температура колонки +35 оС; объём вводимой пробы 1 μl. Детектирование осуществляли: для флавонов и флавонолов 360 нм, оксикоричных кислот 325 нм.

Состав подвижной фазы программировали в условиях, указанных в таблице 1.

Таблица 1 - Условия градиентного элюирования полифенолов плодов

J. oblongaBieb.

Время, мин

А,%

Б,%

0

90

10

10

80

20

20

70

30

30

50

50

40

10

90

Хроматографический анализ полифенолов плодов J. oblongaBieb.методом ОФ ВЭЖХ показал присутствие исключительно толькофлавоноидов (рисунок 1).

Описание: E:\Juniper\juniper 340 nm.jpg

Рисунок 1 - Хроматограмма разделения флавоноидовJ. oblongaBieb.

Критерии пригодности хроматографической системы, рассчитанные по результатам хроматографирования, представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Показатели пригодности хроматографической системы для определения полифенолов J. oblongaBieb.

tR

S

N

HETP

Rs

Tf

Wb

13,344

796

137776

1,08

5,6

1,128

0,1438

15,87

3095

339795

0,44

3,3

0,833

0,1089

16,233

803

323851

0,46

3,2

0,941

0,1141

17,968

3063

375425

0,4

2,04

0,727

0,1173

tR- абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок, HETP - высота, эквивалентная теоретической тарелке, Rs- коэффициент разделения пиков, Tf - коэффициент асимметрии, Wb - ширина пика на базовой линии

Данные таблицы 2 свидетельствуют, что данная хроматографическая система подходит для анализа полифенолов J. oblongaBieb., поскольку все критерии пригодности (N>5000, Rs>1,5, Tf<2) лежат в пределах допустимых значений.

Компонентный состав полифенольного комплекса плодов J. oblongaBieb. по результатам диодно-матричного детектирования представлен в таблице 3.

Таблица 3 - Компонентный состав полифенолов плодов J. oblongaBieb.

Время удерживания, мин

УФ-спектр

Содержание в сумме, %

Идентифицированный компонент

9,479

Описание: F:\Juniper\Juniper 9.479.jpg

15,8

Бифлавоноид

9,71

Описание: F:\Juniper\Juniper 9.713.jpg

2,4

Кверцетин-3-глюкозид

9,91

Описание: F:\Juniper\Juniper 9.913.jpg

3,1

Лютеолин-6-С-глюкозид

12,45

Описание: F:\Juniper\Juniper 12.453.jpg

40,7

Бифлавоноид

14,09

Описание: G:\Juniper 13891.jpg

8,0

Лютеолин-7-глюкозид

15,45

Описание: F:\Juniper\Juniper 15.453.jpg

21,4

Скутелляреин-8-О-глюкозид

16,92

Описание: F:\Juniper\16.926.jpg

1,0

Апигенин-7-глюкозид

Результаты анализа таблицы 3 свидетельствуют, что полифенолы плодов J. oblongaBieb.представлены исключительно флавоноидами. Их процентное распределение представлено на рисунке 2.

Рисунок 2 - Процентное распределение флавоноидов J. oblongaBieb.

На представленной диаграмме видно, что преобладающими группами флавоноидов являются бифлавоноиды (61,0%) и гликозиды скутелляреина (24,0%).

Масс-спектры полифенолов фиксировали на приборе «AutoflexII» «MALDITOF/TOF» фирмы BrukerDaltonicsGmbH производства Германии. В качестве матрицы использовали α-цианокоричную кислоту, регистрацию спектров вели с помощью программы «FlexControl», обработку данных осуществляли в программе «FlexAnalis», в отражённом режиме при положительной полярности (ReflexPositive).

В масс-спектре полифенольного комплекса плодов J. oblongaBieb наблюдаются интенсивные пики молекулярных ионов гликозидов флавоноидов с m/z = 435, 449 и 465, фрагментирующиеся с образованием агликонов, имеющих пики молекулярных ионов с m/z = 271 287 и 303, принадлежащие апигенину, лютеолину и скутелляреину (рисунок 3).

Рисунок 3 - Масс-спектр суммы полифенолов J. oblongaBieb.

В ходе проведённых экспериментов изучен химический состав плодов J. oblongaBieb. Установлено, что полифенольный состав представлен исключительно флавоноидами, а именно гликозидами апигенина, лютеолина, кверцетина, скутелляреина и бифлавоноидами. Основная масса флавоноидов приходится на бифлавоноиды (61,0%) и скутелляреин (24,0%).

Рецензенты:

Шомаров В.К., д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, г .Курск.

Будко Е.В., д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, г .Курск.


Библиографическая ссылка

Писарев Д.И., Новиков О.О., Жилякова Е.Т., Индина И.В., Захаров О.В., Казакова В.С., Придачина Д.В. ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ШИШКОЯГОД МОЖЖЕВЕЛЬНИКА ДЛИННОХВОЙНОГО // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 5.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=10480 (дата обращения: 26.08.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252