Существуют единичные работы, в которых пытаются дать объяснение появления тех или иных синдромов у новорожденных. Однако многие клинико-лабораторные показатели становятся неэффективными для ранней диагностики переходных состояний, которые впоследствии развиваются в синдромы новорожденных [6]. Особенно проблематично прогнозировать развитие дисиндромов, когда у новорожденного к одному из характерных синдромов присоединяется дополнительные синдромы. Возникающие при этом сложности во многом связаны, с отсутствием надёжных критериев предикторного характера. Для их поиска следует принять во внимание присутствие гипоксических расстройств как типового патологического процесса в патохимии любого синдрома новорожденных. На клеточном уровне гипоксия провоцирует изменения редокс-потенциала клетки с последующим развитием оксидативного стресса, который приводит к повреждению наиболее важных полимеров - нуклеиновых кислот, белков и липидов с образованием радикалов соответствующих биомолекул. Образование перекисей липидов быстро и резко меняет их свойства. Повреждение мембраносвязанных ферментов, ингибирование их активности, изменение свойств мембранных белков-переносчиков являются дополнительным механизмом патологического эффекта перекисного окисления липидов (ПОЛ) [8,9].
На сегодняшний день бесспорным является лабораторный феномен, что у всех новорожденных - транзиторная активация ПОЛ. Это адаптивная реакция в условиях резкой перестройки кислородного режима организма. Определение первичных, вторичных и конечных продуктов ПОЛ при разной патологии у новорожденных используется довольно широко [6,10]. К сожалению, до сих пор возникают трудности в прогнозировании развития сочетаний синдромов (дисиндромов) у новорожденных, вследствие того, что не изучены особенности оксидативного стресса при данных состояниях.
Цель исследования: определить уровень содержания молекулярных продуктов ПОЛ при моно- и дисиндромах в гептановую и изопропанольную фазы и изучить возможность использования полученных показателей липопероксидации в качестве прогностических в развитии дисиндромов на фоне синдрома асфиксии у новорожденных.
Материалы и методы исследования. Обследовано 285 новорожденных, родившихся от здоровых матерей доношенными через естественные родовые пути. Среди обследованных 48 новорожденных выписаны с диагнозом «здоров», которые составили контрольную группу. Остальные новорожденные распределены по группам: синдром срыгивания - 56, синдром гипервозбудимости - 38, болевой синдром - 58, синдром асфиксии - 50. Сочетание двух синдромов (дисиндромы): асфиксия+болевой - 9, асфиксия+гипервозбудимость - 15, срыгивание+ асфиксия - 11.
Для исследования использовали пуповинную кровь, забор которой выполняли сразу после рождения, со стабилизатором - 1,5 % раствор ЭДТА в физ. растворе из расчета 0,1 мл стабилизатора на 2 мл крови.
Содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемых тканей по методике Волчегорского И. А. и др. (1989) [4]. Результаты выражали в единицах индекса окисления (едИО). Конечные продукты ПОЛ (Шиффовы основания) определяли спектрофотометрическим методом по Львовской Е. И. с соавт. (1991) и выражали в единицах оптической плотности (едОП) [7].
Обработку полученных результатов исследования проводили общепринятым методом вариационной статистики. Вычисляли среднюю арифметическую величину (М), ошибку среднего (m). Различия между сравниваемыми группами считали достоверными при р<0,05. Достоверность различий между средними величинами параметров определяли с помощью критерия значимости (t) Стьюдента. Проверку гипотезы о равенстве генеральных средних в двух сравниваемых группах проводили с помощью непараметрического критерия U-критерия Манна - Уитни. Статистическая обработка материала проведена с использованием лицензированных программ «Statistiсa 6.0» и Excel [2].
Результаты исследования и их обсуждение. Данные, полученные в ходе нашего исследования, представлены в таблице 1 и 2. Как показывают таблицы, в некоторых случаях увеличение содержания одних молекулярных продуктов ПОЛ сочеталось со снижением других. В наибольшей степени это проявлялось при асфиксии, где на фоне повышенного содержания гептан-растворимых и изо-пропанол растворимых Шиффовых оснований, гептан-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов и изо-пропанол растворимых диеновых конъюгатов, наблюдалось снижение содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов, а также изо-пропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов. Так, при болевом синдроме повышение содержания всех категорий гептан-растворимых продуктов ПОЛ и изо-пропанол растворимых диеновых конъюгатов и Шиффовых оснований сочеталось со снижением содержания изо-пропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов. При синдроме «гипервозбудимость» отмечено увеличение всех категорий молекулярных продуктов ПОЛ, кроме изо-пропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов, содержание которых не претерпело статистически значимых изменений по сравнению с контролем. Для синдрома «срыгивание» повышение содержания всех категорий гептан-растворимых продуктов ПОЛ и изо-пропанол растворимых диеновых конъюгатов, а также Шиффовых оснований сочеталось со снижением содержания изо-пропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов.
Таблица 1
Содержание гептан-растворимых молекулярных продуктов ПОЛ плазмы при синдромах асфиксии, болевом, гипервозбудимости и срыгивания, а также при дисиндромах, развившихся на фоне асфиксии у новорожденных
|
Показатель |
Диеновые конъюгаты(Ед.ИО) |
Кетодиены и сопряжённые триены (Ед.ИО) |
Шиффовы основания (ЕД.ОП) |
|
Контроль |
2,25±0,025 n=40 |
0,134±0,08 n=40 |
0,075±0,005 n=40 |
|
Асфиксия |
1,755±0,14 n=50 P1,2=0,0017U |
0,162±0,015 n=50 |
0,209±0,028 n=50 P1,2=0,0024U |
|
Болевой синдром |
3,11±0,15 n=49 P1,3=0,0011U |
0,205±0,018 n=49 P1,3=0,0018U |
0,19±0,017 n=49 P1,3=0,0018U |
|
Гипервозбудимость |
3,45±0,25 n=38 P1,3=0,0013U |
0,169±0,009 n=38 P1,3=0,0018U |
0,180±0,016 n=38 P1,3=0,0018U |
|
Срыгивание |
2,95±0,124 n=50 P1,3=0,0017U |
0,31±0,015 n=50 P1,3=0,0024U |
0,156±0,01 n=50 P1,3=0,0024U |
|
Асфиксия+болевой синдром |
3, 13±0,255 n=9 |
0,403±0,02 n=9 |
0,137±0,03 n=9 |
|
Асфиксия+ гипервозбудимость |
3,13±0,54 n=8 |
0,583±0,01 n=8 Р3,4 < 0,05 t |
0,10±0,02 n=8 p3,4=0,015U |
|
Асфиксия+ срыгивание |
2,87±0,22 n=11 |
0,196±0,01 n=11 |
0,173±0,02 n=11 |
Примечание: n - количество новорожденных; U - критерий Манна - Уитни; t - критерий Стьюдента; р - статистически значимые различия по сравнению с группой «Контроль».
Таблица 2
Содержание изопропанол-растворимых молекулярных продуктов ПОЛ плазмы при синдромах асфиксии, болевом, гипервозбудимости и срыгивания, а также при дисиндромах, развившихся на фоне асфиксии у новорожденных
|
Показатель |
Диеновые конъюгаты (Ед.ИО) |
Кетодиены и сопряжённые триены (Ед.ИО) |
Шиффовы основания (ЕД.ОП) |
|
Контроль |
0,557±0,008 n=48 |
0,252±0,06 n=48 |
0,142±0,005 n=48 |
|
Асфиксия |
0,699±0,036 n=20 P=0,008U |
0,2±0,007 n=20 P=0,0024U |
0,412±0,043 n=20 P=0,0024U |
|
Болевой синдром |
0,764±0,038 n=58 P=0,0013U |
0,148±0,08 n=58 P=0,0018U |
0,166±0,03 n=58 |
|
Гипервозбудимость |
0,787±0,042 n=38 P=0,0013U |
0,267±0,011 n=38 P=0,0018U |
0,166±0,016 n=38 |
|
Срыгивание |
0,91±0,045 n=56 P=0,008U |
0,051±0,004 n=56 P=0,0024U |
0,631±0,01 n=56 P=0,0024U |
|
Асфиксия+ срыгивание |
0,568±0,014 n=11 p3,4=0,015U |
0,252±0,008 n=11 p3,4=0,015U |
0,198±0,077 n=11 р2,4=0,017U p3,4=0,015U |
|
Асфиксия+болевой синдром |
0,793±0,038 n=9 |
0,311±0,066 n=9 Р3,4=0,004U |
0,203±0,028 n=9 |
|
Асфиксия+ гипервозбудимость |
0,799±0,058 n=15 |
0,312±0,066 n=15 |
0,172±0,028 n=15 р2,4=0,017U p3,4=0,015U |
Примечание: n - количество новорожденных; U - критерий Манна - Уитни; t - критерий Стьюдента; р - статистически значимые различия по сравнению с группой «Контроль».
Таким образом, среди рассмотренных моносиндромов ни в одном случае не наблюдалось увеличения содержания изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов. Однако эта категория продуктов ПОЛ была повышена по сравнению с контролем у новорожденных при сочетании синдрома асфиксии с болевым синдромом на 23 %. Между тем оба этих синдрома, взятые по отдельности, характеризуются сниженным уровнем именно этой категории молекулярных продуктов ПОЛ. Кроме того, при данном дисиндроме по сравнению с контролем остаются повышенными и все остальные категории продуктов ПОЛ как в гептановую фазу, так и в изопропанольную. Увеличение содержания изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов наблюдалось и при дисиндроме «асфиксия+гипервозбудимость» в сравнении с контролем на 23 %. В то же время данная категория продуктов ПОЛ при моносиндроме «гипервозбудимость» статистически не изменена. Содержание остальных молекулярных продуктов ПОЛ как в гептановую, так и в изопропанольную фазы при дисиндроме «асфиксия+гипервозбудимость» увеличено. В случае дисиндрома «срыгивание+асфиксия» в сравнении с контрольной группой наблюдалось увеличение содержания всех исследованных молекулярных продуктов ПОЛ, за исключением изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов, их содержание не отличалось статистически значимо от контрольных значений.
При сравнении дисиндрома «срыгивание+асфиксия» и синдрома «срыгивание» наблюдается снижение содержания гептан-растворимых и изопропанол-растворимых диеновых коъюгатов, гептан-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов и изопропанол-растворимых Шиффовых оснований при одновременном увеличении содержания гептан-растворимых Шиффовых оснований. Такое статистически значимое снижение компенсируется пятикратным увеличением содержания кетодиенов и сопряженных триенов. Иная ситуация отмечена при сравнении групп «срыгивание+асфиксия» и «асфиксия». Наблюдается статистически значимое увеличение содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов, гептан-растворимых и изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов, при одновременном снижении содержания изопропанол-растворимых диеновых коъюгатов и гептан-растворимых и изопропанол-растворимых Шиффовых оснований.
Выводы
- При изученных моносиндромах и дисиндромах, развивишихся на фоне синдрома асфиксии у новорожденных, установлено увеличение содержания всех молекулярных продуктов ПОЛ в гептановую фазу, за исключением синдрома асфиксии. При данном моносиндроме отмечено снижение гептан-растворимых диеновых конъюгатов, при одновременном увеличении содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов и Шиффовых оснований. Таким образом, наслоение на синдром асфиксии других моносиндромов приводит к усилению липопероксидации за счет повышения содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов. Что дает право считать данный показатель прогностическим в развитии рассматриваемых дисиндромов.
- При моносиндромах и дисиндромах, возникших на базе синдрома асфиксии у новорожденных, отмечено увеличение конечных молекулярных продуктов ПОЛ в изопропанольную фазу. Кроме того, выявлено увеличение содержания и изо-пропанол-растворимых диеновых конъюгатов, за исключением дисиндрома «асфиксия+срыгивание», здесь их уровень статистически не изменен. Среди рассмотренных моносиндромов ни в одном случае не наблюдалось увеличения содержания изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов. Тогда как в случае сочетания синдрома асфиксии с синдромом гипервозбудимости и болевым синдромом установлено увеличение липопероксидации за счет повышения уровня последних. Таким образом, по уровню содержания изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов можно прогнозировать развитие данных дисиндромов.
В целом, исходя из наших данных, можно судить о целесообразности использования показателей липопероксидации в качестве прогностических в развитии дисиндромов, возникших на фоне синдрома асфиксии.
Поддержано грантом РФФИ № 11-04-01378-а и ГК № 2012055-Г316.
Рецензенты:
- Шаповалов П. Я., доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой гигиены с основами экологии, ГБОУ ВПО Тюменская государственная академия Минздравсоцразвития России, г. Тюмень.
- Соловьев В. Г., доктор медицинских наук, профессор кафедры биохимии ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А. И. Евдокимова» Минздрава РФ, г. Москва.