Будра плющевидная - представитель семейства губоцветных, это многолетнее травянистое растение высотой до 60 см. Распространена по всей европейской части России (кроме Севера), на Кавказе, в Сибири (южная часть). Неприхотливое растение, обитает на влажных лугах, лесных опушках, полянах, по берегам рек и ручьёв в лесной и лесостепной зонах.
В народной медицине будра плющевидная используется в качестве отхаркивающего, мочегонного, желчегонного, противовоспалительного и болеутоляющего средства [2-4].
Целью настоящего исследования явилось обоснование возможности использования будры плющевидной в качестве перспективного источника флавоноидов и разработка на её основе лекарственной формы.
Для реализации поставленной цели в задачи настоящего исследования входило химическое изучение флавоноидов и получение лекарственной формы в виде гранул из суммарного полифенольного комплекса будры плющевидной.
Для установления химического состава сырьё - траву будры плющевидной экстрагировали пятикратно спиртом этиловым 70%-ным. Полученное извлечение фильтровали и сгущали на испарителе ротационном ИР-1М3 до густой консистенции. Сгущенную сумму разбавляли 4-кратным объёмом воды и оставляли на сутки в холодильнике. Выпавший после охлаждения смолистый осадок отфильтровывали. Фильтрат обрабатывали последователдьно хлороформом и этилацетатом. Этилацетатное извлечение сушили натрия сульфатом безводным, сгущали на ротационном испарителе и подвергали фракционированию на колонке с полиамидным сорбентом. Фракцию предварительно смешивали с небольшим количеством сорбента, загружали в колонку и элюировали водными спиртами в соотношениях 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1 и чистым спиртом этиловым. Фракции собирали по 10-15 мл. Состав элюата контролировали с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие одинаковые компоненты, объединяли и сгущали под вакуумом на водяной бане. После объединения были выделены вещества Х1-4, которые на основании качественных реакций и изучения хроматограмм отнесены к флавоноидам и оксикоричным кислотам.
Установление строения выделенных веществ проводили на основании анализа УФ- и масс-спектров. УФ-спектры регистрировали на приборе СФ-56, фотометрировали как чистые компоненты, так и с добавлением шифт-реактивов, позволяющих выявить расположение гидроксильных групп и место гликозидирования. Детекцию масс-спектров проводили на приборе масс-спектрометр «Autoflex II» «MALDI TOF/TOF» фирмы Bruker Daltonics.
Полученные результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Данные УФ- и масс-спектров выделенных компонентов
|
Вещество |
C2H5OH |
CH3COONa |
CH3COONa+ H3BO3 |
C2H5ONa |
AlCl3 |
AlCl3 + HCl |
m/z |
Иденти-фициро-вано |
|
Х1 |
337, 268 пл.
|
376,
274,
|
338, 302 пл.
|
392, 275, 324
|
384,
348, 301 |
381, 340, 299, 276 |
271 |
Апигенин |
|
ХII |
336, 268 |
- |
338, 268 |
392, 275 |
384, 276 |
381, 276 |
271, 453 |
Апигенин-7-глюкозид |
|
ХIII |
343, 257, 268 пл. |
401, 394, 329, 300, 268 |
372, 259 |
401, 394, 329, 300, 268 |
390, 355, 294, 275 |
343, 294, 273 |
287, 449 |
Лютеолин-7-глюкозид |
|
ХIV |
325, 305, 235 |
310, 280 |
320, 235 |
360, 310, 240 |
360, 290 |
325, 235 |
219 (180+39) |
Кислота кофейная |
Таким образом, на данном этапе исследований химического состава будры плющевидной удалось выделить и идентифицировать флавоноиды апигенин, апигенин-7-гликозид, лютеолин-7-гликозид, кофейную кислоту.
Поскольку основным компонентом полифенольного комплекса травы будры плющевидной является лютеолин-7-глюкозид, то стандартизацию сырья проводили в пересчёте на данный компонент.
Для этого навеску воздушно-сухого сырья массой 1,0 г помещали в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, заливали 20 мл спирта этилового 70%-ного, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 30 минут. После охлаждения фильтровали в мерную колбу объёмом 100 мл. Экстракцию вышеуказанным способом повторяли ещё 4 раза, собирая фильтрат в ту же мерную колбу. 5 мл полученного извлечения помещали в мерную колбу ёмкостью 25 мл, прибавляли 5 мл 10%-ного спиртового раствора алюминия хлорида и доводили спиром этиловым 96%-ным до метки. Спустя 40 минут измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали раствор, состоящий из 5 мл извлечения, 4-х капель кислоты хлористоводородной 0,1 н и доведённый спиртом этиловым 96%-ным до метки в колбе вместимостью 25 мл. Опыт повторяли семикратно, полученные результаты обрабатывали статистически.
Расчет количественного содержания проводили по формуле 1:
(1)
где: X - содержание флавоноидов, в пересчёте на лютеолин;
А - оптическая плотность исследуемого раствора;
m - масса навески сырья, г;
W - общий объем извлечения;
W1 - общий объём после разведения;
Va - объём аликвоты;
- удельный показатель поглощения, лютеолина-7-глюкозида, равный 145,0±2,3.
Результаты количественного определения флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в траве будры плющевидной представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Результаты количественного определения флавоноидов в траве будры плющевидной
|
|
|
|
Метрологические |
|
1,89 |
-0,06 |
0,0036 |
ε = 2,86% |
|
1,78 |
0,05 |
0,0025 |
|
|
1,75 |
0,08 |
0,0064 |
|
|
1,88 |
-0,05 |
0,0025 |
|
|
1,86 |
-0,03 |
0,0009 |
|
|
1,79 |
0,04 |
0,0016 |
|
|
1,87 |
-0,04 |
0,0016 |
|
|
|
|
|
1,83%
0,0191
0,021325
0,05225
По данным, полученным в ходе опыта, процентное содержание флавоноидов, в пересчёте на лютеолин-7-глюкозид, составило 1,83±0,05%. Ошибка единичного определения при доверительном интервале Р, 95%, составила 2,86%, что укладывается в норму, регламентируемую ГФ.
Далее нами разработана лекарственная форма - гранулы на основе полифенольного комплекса будры плющевидной.
На первом этапе исследований был получен полупродукт - экстракт густой из травы будры плющевидной.
Густой экстракт получали методом циркуляционной экстракции.
Для получения густого экстракта воздушно-сухое сырьё травы будры плющевидной загружали в экстрактор, соединяли с колбой - испарителем - сборником и холодильником, заливали спиртом этиловым 70%-ным и экстрагировали до истощения растительного материала.
Далее из полученной вытяжки отгоняли растворитель под вакуумом с помощью ротационного испарителя ИР-1 до получения густого экстракта.
Полученный продукт представлял собой коричневую массу со слабым специфическим ароматным запахом. Растворим в воде, медленно в спирте этиловом, нерастворим в эфире, хлороформе.
Технологическая схема производства экстракта густого будры плющевидной представлена на рисунке 1.
Рис. 1. Технологическая схема производства экстракта густого травы будры плющевидной.
Потерю в массе при высушивании полученного экстракта определяли методом высушивания по методике ГФ XI [1], которая составила 19,56%.
Поскольку основным компонентом в траве будры плющевидной является лютеолин-7-глюкозид, поэтому стандартизацию густого экстракта проводили в пересчёте на данный компонент.
Для этого точную навеску экстракта в количестве 0,1 г растворяли в спирте этиловом 96%-ном в мерной колбе вместимостью 100 мл. 5 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 5 мл спиртового 10%-ного раствора алюминия хлорида и несколько капель соляной кислоты 0,1 М. Через 40 минут измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм (рис. 2). В качестве раствора сравнения использовали раствор, состоящий из 5 мл извлечения, 4-х капель кислоты хлористоводородной 0,1 н и доведённый спиртом этиловым 96%-ным до метки в колбе вместимостью 25 мл. Опыт повторяли семикратно, полученные результаты обрабатывали статистически.
Рисунок 2. УФ-спектр количественного определения флавоноидов в траве будры плющевидной.
Расчет количественного определения проводили по формуле 1.
По данным, полученным в ходе опыта, было установлено, что процентное количество флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид составляет 1,445±0,059%.
Результаты статистической обработки представлены в таблице 3.
Ошибка единичного определения при доверительном интервале Р, 95% составляет 4,08%, что укладывается в норму, регламентируемую ГФ.
Таблица 3 - Результаты количественного определения флавоноидов в экстракте густом травы будры плющевидной
|
|
|
|
Метрологические |
|
1,341 |
0,104 |
0,0108 |
ε = 4,08% |
|
1,534 |
-0,089 |
0,0079 |
|
|
1,424 |
0,021 |
0,00044 |
|
|
1,401 |
0,044 |
0,0019 |
|
|
1,478 |
-0,033 |
0,00108 |
|
|
1,492 |
-0,047 |
0,0022 |
|
|
1,451 |
0,006 |
0,000036 |
|
|
|
|
|
Для получения гранул нами использован метод влажного гранулирования с помощью сита с размером ячейки 1,0 мм.
Для получения данной лекарственной формы использовали наполнители и связывающие вещества.
В ходе эксперимента нами была разработана модельная смесь следующего состава, которая не включала в себя густой экстракт:
лактоза - 10,0 - использовалась нами в качестве наполнителя;
Na-КМЦ 3% массой 3,21 - в качестве связывающего вещества.
Лактозу необходимой массы измельчали в ступке и добавляли раствор полимера, смешивали до получения однородной пластичной массы, после чего полученную массу протирали через сито и полученный гранулят подсушивали при комнатной температуре. Высушенный гранулят повторно протирали через сито с размером ячейки 1,0 мм. Полученные гранулы просеивали через сито с размером ячейки 0,315 мм для отделения пыли.
При использовании данного состава выход гранул составляет 73,72%.
Вторая модельная смесь включала в себя густой экстракт и состояла из:
лактозы - 10,0;
Na-КМЦ 3% - 1,38;
экстракта густого будры плющевидной - 0,2;
спирта этилового 70% - 0,28.
В ступку помещали 0,2 густого экстракта и растворяли в спирте этиловом 70%-ном до образования густой пастообразной консистенции. После чего небольшими частями вводили измельченную лактозу и перемешивали пестиком до однородной массы, затем добавляли необходимое количество раствора Na-КМЦ 3%-ного и перемешивали до образования однородной пластичной массы, которую переносили на сито с размером ячеек 1,0 мм и протирали. Полученный гранулят оставляли при комнатной температуре до высыхания и повторно протирали через то же сито. После чего просеивали полученные гранулы через сито с размером ячеек 0,315 для отделения пыли.
В данном случае выход гранул составил 86,23%.
Таким образом, в ходе исследования установлен химический состав травы будры плющевидной, проведена её стандартизация по содержанию флавоноидов, а также разработана лекарственная форма на основе экстракта густого в виде гранул. Полученные данные могут использоваться для дальнейших фармакологических испытаний и разработки нормативной документации на исследованный вид сырья.
Рецензенты
- Шормаков В.К., д.ф.н., профессор кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.
- Сипливая Л.Е., д.б.н., профессор, заведующая кафедрой фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.