Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

THE GENE’S POLYMORPHISM OF GLUTATHIONE S-TRANSFERASES AT PATIENT WITH GLAUCOMA IN KURSK POPULATION

Stabrovskaya N.V. 1, 2 Ivanov V.P. 1, 2 Trubnikova E.V. 1, 2 Brezhnev A.Yu. 2 Kokhtenko E.V. 1 Belous A.S. 1 Neskorodova N.Yu. 1 Khramtsov A.V. 1 Vinnikov V.I. 2
1 Kursk State University
2 Kursk state medical university
Known, that the enzymes of xenobiotic’ metabolism take part in metabolism of endogenic matters. That is why if they work wrong there is development of any diseases a lot. In this investigation we research frequency of the gene’s polymorphisms of glutathione s-transferases – GSTT1 and GSTM1 in Kursk population. Established, frequency of genotypes GSTM1+ and GSTM1 del/del is equal in concerned samplings (glaucoma and control). Also frequency of genotype GSTT1+ is more than frequency of genotype GSTT1 del/del. Those, realized analysis of frequency of the gene’s polymorphisms of glutathione s-transferases in Kursk population with glaucoma doesn’t show differences compared with healthy persons. Probably, there are contacts of the gene’s polymorphisms GSTT1 and GSTM1 with some clinical evidences of this pathology.
glaucoma
glutathione s-transferases
polymorphism
Введение

Среди офтальмопатологии имеются нозологические формы, которые развиваются незаметно, но в итоге приводят к полной потере зрения. Классический пример - глаукома.

Глаукома (от греч. - цвет морской воды, лазурный) - тяжелое заболевание органа зрения, получившее название от зеленоватой окраски, которую приобретает расширенный и неподвижный зрачок в стадии наивысшего развития болезненного процесса - острого приступа глаукомы. Отсюда же происходит и второе название этого заболевания - «зеленая вода» или «зеленая катаракта» (от нем. «Grun Star»).

В настоящее время отсутствуют единые представления о причинах возникновения и механизмах развития этой болезни, встречаются определенные сложности даже в самой попытке определить понятие «глаукома».

Это хроническое заболевание глаза, при котором повышается внутриглазное давление. Если глазное давление вовремя не снизить до нормы, гибнет зрительный нерв, что приводит к необратимой слепоте. Глаукома - довольно распространенное заболевание: по статистике 14-15% всех слепых на земном шаре потеряли зрение именно по этой причине.

Известно, что ферменты метаболизма ксенобиотиков (ФМК) помимо деградации молекул экзогенного происхождения также активно участвуют в метаболизме эндогенных веществ и что сбой в их работе может приводить к развитию значительного количества заболеваний. Этой проблеме посвящены многочисленные исследования отечественных и зарубежных авторов. Вместе с тем гены ФМК только в последние годы стали объектом подобных исследований, и на сегодняшний день существует достаточно противоречивая информация об их роли в отношении развития патологических состояний. Так, при катаракте наблюдается ассоциация делеционного варианта частоты гена GSTM с тяжестью заболевания. В то же время наблюдается выше частота делеционного варианта гена GSTT при катаракте в сравнении с контролем. Также выявлена взаимосвязь с риском развития полинейропатии у курящих индивидов, имеющих делеционный вариант гена GSTT. Установлено, что при сахарном диабете увеличена частота делеционного варианта гена GSTT и уменьшена частота делеционного варианта гена GSTM. В связи с этим в данной работе проведен анализ частот встречаемости полиморфных вариантов генов глутатионовых S-трансфераз - GSTT1 (делеция) и GSTM1 (делеция) у жителей Курской области.

Материалы и методы исследования

В качестве объекта исследования была взята выборка больных глаукомой (210 индивидов). Контрольную группу составили индивиды, не родственные между собой и не имеющие по результатам клинического исследования глаукомы (232 индивида). Выделение тотальной ДНК осуществляли из цельной венозной крови стандартным методом фенол-хлороформной экстракции. Типирование делеционных полиморфизмов генов GSTM1 и GSTT1 осуществлялось с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) согласно протоколу, описанному M. Arand с соавторами, на программируемом термоциклере МС2 ("ДНК-технология"). В качестве положительного контроля амплификации использовали фрагмент Р-глобинового гена. Продукты амплификации разделяли в 2%-агарозном геле с этидиумбромидом и визуализировали в проходящем УФ-свете с применением компьютерной видеосъемки на приборе GDS-8000 (UVP, США). Электрофоретическое разделение продуктов ПЦР гена представлено на рисунке 1.

Учитывая, что гетерозиготы и гомозиготы по нормальному аллели не дифференцируются с помощью использованного метода генотипоирования, в проведенном исследовании носителей этих генотипов объединили в одну группу.

Рис. 1. Разделение асплифицированных фрагментов генов GSTT1 и GSTM1 на 2%-агарозном геле. Обозначения: Фрагмент гена GSTM1 амплифицировался размером 215 п.н. (верхние фрагменты), гена GSTT1 - размером 480 п.н. (нижний фрагмент). Фрагмент р-глобина - размером 350 п.н. использовался в качестве положительного контроля амплификации (средний фрагмент). Гомозиготы GSTT1 del/del обозначены тремя стрелками сверху. Гомозиготы GSTM1 del/del обозначены двумя стрелками снизу. (А.В. Полоников)

Статистическая обработка данных проводилась на персональном компьютере с использованием программного пакета Statistica 8.0. Разницу в распределении частот генотипов и их сочетаний между группами рассчитывали с помощью критерия χ2 c поправкой Йейтса. Различия рассматривали как достоверные при уровне значимости p<0.05.

Результаты исследования и их обсуждение

Изучение генотипов контрольной выборки показало, что в случае гена GSTM1 распределение генотипов было практически равным: генотипов с делеционным вариантом было 41,81%, а вариантов генотипов GSTM+ - 58,19%. Несколько иная картина наблюдалась в случае гена GSTT1. Здесь преобладали генотипы GSTT+ в отличие от делеционных. Похожая картина наблюдалась и в группе больных глаукомой. Сравнительный анализ частот генотипов между контрольной группой и группой больных глаукомой не выявил статистически значимых различий (таблица 1).

Таблица 1 Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов в выборке больных с глаукомой и контрольной группе

 

Ген

Полиморфизм

Генотипы1

Частоты генотипов

χ2

р2

n

Больные

n

Контроль

1

GSTM1

del/+

del

210

0,448

232

0,418

0,28

0,60

+

0,552

0,582

2

GSTT1

del/+

del

210

0,305

232

0,349

0,79

0,37

+

0,695

0,651

1 Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках

 соответствующих ДНК-маркёров.

2 уровни значимости р-частот аллелей между группами (*р<0,05)

Таким образом, проведенный анализ частот встречаемости полиморфных вариантов генов глутатионовых S-трансфераз у жителей Курской области больных глаукомой не выявил значимых отличий по сравнению со здоровыми индивидами. Тем не менее, вполне вероятно наличие связей полиморфных вариантов рассматриваемых генов с клиническими проявлениями представленной патологии.

Рецензенты:

  • Ляпустин Виктор Николаевич, доктор биологических наук, старший научный сотрудник, заведующий отделением криогенного хранения культур клеток и коллекционных штаммов вирусов ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН, Московская обл.
  • Варгин Виктор Викторович, доктор медицинских наук, доцент, ведущий научный сотрудник ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН, Московская обл.