Среди офтальмопатологии имеются нозологические формы, которые развиваются незаметно, но в итоге приводят к полной потере зрения. Классический пример - глаукома.
Глаукома (от греч. - цвет морской воды, лазурный) - тяжелое заболевание органа зрения, получившее название от зеленоватой окраски, которую приобретает расширенный и неподвижный зрачок в стадии наивысшего развития болезненного процесса - острого приступа глаукомы. Отсюда же происходит и второе название этого заболевания - «зеленая вода» или «зеленая катаракта» (от нем. «Grun Star»).
В настоящее время отсутствуют единые представления о причинах возникновения и механизмах развития этой болезни, встречаются определенные сложности даже в самой попытке определить понятие «глаукома».
Это хроническое заболевание глаза, при котором повышается внутриглазное давление. Если глазное давление вовремя не снизить до нормы, гибнет зрительный нерв, что приводит к необратимой слепоте. Глаукома - довольно распространенное заболевание: по статистике 14-15% всех слепых на земном шаре потеряли зрение именно по этой причине.
Известно, что ферменты метаболизма ксенобиотиков (ФМК) помимо деградации молекул экзогенного происхождения также активно участвуют в метаболизме эндогенных веществ и что сбой в их работе может приводить к развитию значительного количества заболеваний. Этой проблеме посвящены многочисленные исследования отечественных и зарубежных авторов. Вместе с тем гены ФМК только в последние годы стали объектом подобных исследований, и на сегодняшний день существует достаточно противоречивая информация об их роли в отношении развития патологических состояний. Так, при катаракте наблюдается ассоциация делеционного варианта частоты гена GSTM с тяжестью заболевания. В то же время наблюдается выше частота делеционного варианта гена GSTT при катаракте в сравнении с контролем. Также выявлена взаимосвязь с риском развития полинейропатии у курящих индивидов, имеющих делеционный вариант гена GSTT. Установлено, что при сахарном диабете увеличена частота делеционного варианта гена GSTT и уменьшена частота делеционного варианта гена GSTM. В связи с этим в данной работе проведен анализ частот встречаемости полиморфных вариантов генов глутатионовых S-трансфераз - GSTT1 (делеция) и GSTM1 (делеция) у жителей Курской области.
Материалы и методы исследования
В качестве объекта исследования была взята выборка больных глаукомой (210 индивидов). Контрольную группу составили индивиды, не родственные между собой и не имеющие по результатам клинического исследования глаукомы (232 индивида). Выделение тотальной ДНК осуществляли из цельной венозной крови стандартным методом фенол-хлороформной экстракции. Типирование делеционных полиморфизмов генов GSTM1 и GSTT1 осуществлялось с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) согласно протоколу, описанному M. Arand с соавторами, на программируемом термоциклере МС2 ("ДНК-технология"). В качестве положительного контроля амплификации использовали фрагмент Р-глобинового гена. Продукты амплификации разделяли в 2%-агарозном геле с этидиумбромидом и визуализировали в проходящем УФ-свете с применением компьютерной видеосъемки на приборе GDS-8000 (UVP, США). Электрофоретическое разделение продуктов ПЦР гена представлено на рисунке 1.
Учитывая, что гетерозиготы и гомозиготы по нормальному аллели не дифференцируются с помощью использованного метода генотипоирования, в проведенном исследовании носителей этих генотипов объединили в одну группу.
Рис. 1. Разделение асплифицированных фрагментов генов GSTT1 и GSTM1 на 2%-агарозном геле. Обозначения: Фрагмент гена GSTM1 амплифицировался размером 215 п.н. (верхние фрагменты), гена GSTT1 - размером 480 п.н. (нижний фрагмент). Фрагмент р-глобина - размером 350 п.н. использовался в качестве положительного контроля амплификации (средний фрагмент). Гомозиготы GSTT1 del/del обозначены тремя стрелками сверху. Гомозиготы GSTM1 del/del обозначены двумя стрелками снизу. (А.В. Полоников)
Статистическая обработка данных проводилась на персональном компьютере с использованием программного пакета Statistica 8.0. Разницу в распределении частот генотипов и их сочетаний между группами рассчитывали с помощью критерия χ2 c поправкой Йейтса. Различия рассматривали как достоверные при уровне значимости p<0.05.
Результаты исследования и их обсуждение
Изучение генотипов контрольной выборки показало, что в случае гена GSTM1 распределение генотипов было практически равным: генотипов с делеционным вариантом было 41,81%, а вариантов генотипов GSTM+ - 58,19%. Несколько иная картина наблюдалась в случае гена GSTT1. Здесь преобладали генотипы GSTT+ в отличие от делеционных. Похожая картина наблюдалась и в группе больных глаукомой. Сравнительный анализ частот генотипов между контрольной группой и группой больных глаукомой не выявил статистически значимых различий (таблица 1).
Таблица 1 Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов в выборке больных с глаукомой и контрольной группе
|
|
Ген |
Полиморфизм |
Генотипы1 |
Частоты генотипов |
χ2 |
р2 |
|||
|
n |
Больные |
n |
Контроль |
||||||
|
1 |
GSTM1 |
del/+ |
del |
210 |
0,448 |
232 |
0,418 |
0,28 |
0,60 |
|
+ |
0,552 |
0,582 |
|||||||
|
2 |
GSTT1 |
del/+ |
del |
210 |
0,305 |
232 |
0,349 |
0,79 |
0,37 |
|
+ |
0,695 |
0,651 |
|||||||
|
1 Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркёров. 2 уровни значимости р-частот аллелей между группами (*р<0,05) |
|||||||||
Таким образом, проведенный анализ частот встречаемости полиморфных вариантов генов глутатионовых S-трансфераз у жителей Курской области больных глаукомой не выявил значимых отличий по сравнению со здоровыми индивидами. Тем не менее, вполне вероятно наличие связей полиморфных вариантов рассматриваемых генов с клиническими проявлениями представленной патологии.
Рецензенты:
- Ляпустин Виктор Николаевич, доктор биологических наук, старший научный сотрудник, заведующий отделением криогенного хранения культур клеток и коллекционных штаммов вирусов ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН, Московская обл.
- Варгин Виктор Викторович, доктор медицинских наук, доцент, ведущий научный сотрудник ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН, Московская обл.