Апоптоз, по образному выражению А.Н. Маянского с соавт. (1995) является началом будущего, то есть прогнозирует предстоящие события в здоровье человека и, прежде всего, в его иммунной системе.
Апоптоз представляет собой весьма сложную комплексную систему, в процессе функциональной реализации которой, принимают участие многие клеточные факторы и механизмы (Ярилин А.А., 1997). Среди них наиболее важное значение имеют разные кластерные варианты лимфоцитов с их распознающими механизмами (NK или CD16), активационным назначением (CD25 и CD8) и сигнальной системы (CD95-FAS). Вспомогательную, а в ряде случаев основную роль играют некоторые цитокины ИЛ-1, ИЛ-2, ФНОα, ИНФγ.
Инициирующую функцию за счет распознания клеток-мишеней и их подготовки к апоптотическому финалу с помощью секретируемых ими порфиринов и энзимов с последующей активацией ферментов типа каспаз выполняют естественные или натуральные киллеры (NK или CD16). Сигнальная функция на всем протяжении апоптотической реакции и, особенно, на ее заключительном этапе принадлежит CD95 (FAS-апоптоз) лимфоцитам.
Совокупность перечисленных клеток и цитокинов ответственна за рост и дифференцировку клеток организма, распознавание и уничтожение трансформированных и отживших клеток. Иными словами, апоптоз-одна из важнейших иммунологических реакций, ведущих к изъятию ненужных клеточных элементов и обновлению тканевого ресурса. Состояние последнего для стареющего увядающего организма женщин, в котором одна за другой выходят из строя различные реактивные системы (гормональная, иммунная и др.) имеет важное не только медицинское, но и социально-экономическое значение, поскольку женщина ПМП продолжает трудиться и на производстве, и в быту, а в силу большей на 10-15 лет, продолжительности жизни по сравнению с мужчинами является одной из главных состовляющих производственных трудовых ресурсов.
Цель сообщения заключается в анализе и оценке состояния участников апоптозного клеточного и цитокинового комплекса у женщин постменопаузального возраста с климактерическим синдромом.
Материалы и методы: Под нашим наблюдением находилось 110 женщин в возрасте от 40 до 65 лет, страдающих климактерическим синдромом (КС). У 51 из них постменопаузальный период продолжался 1-5 лет, у 33-6-10 лет, особую группу составили 26 женщин с хирургической менопаузой. Контрольная группа состояла из 20 здоровых женщин от 38 до 50 лет, без КС.
В клиническом аспекте у больных чаще отмечалась гипертензия и гипертоническая болезнь (29%), несколько реже- (20%) нейро-циркуляторная дистония (НЦД), еще реже хронический панкреатит (15%), язвенная болезнь желудка (11:%) и ИБС (11%), несколько чаще (13%) стенокардия. Сахарный диабет выявлен у 6% обследованных. В 38,8% у женщин с КС обнаружены урогенитальные инфекции группы ИППП.
Тяжесть клинического течения КС была неоднозначной: в 48% она была тяжелой, в 36% - средней тяжести, в 16% - легкой.
В качестве материала для исследования служила кровь женщин постменопаузального возраста. Из полученного отцентрифугированного субстрата готовили мазки в 2х экземплярах и после фиксации одни из них окрашивали по Романовскому - Гимза, второй - обрабатывали флюоресцированной моноклональной иммунной сывороткой к CD- рецепторам лимфоцитов производства ООО «Препарат» (Н. Новгород), после чего подвергали простому микроскопическому и иммуно-флюоресцентному анализу. Общее количество лимфоцитов определяли традиционно, цитокины в сыворотках крови - методом твердофазного ИФА с набором диагностических систем «Веста» производства СПб и Новосибирска.
В материале (лимфоциты, сыворотки крови) определяли клетки, причастные к апоптозу - CD16 (NK), CD25, CD95 (FAS апоптоз), CD8. Из цитокинов были избраны ИЛ-1β, ИНФ-γ, ФНОα. При этом все данные анализировались с учетом возраста, продолжительности ПМП, тяжести КС, клинической формы заболеваний, при инфекционных дополнительно-вид возбудителей болезни. Этиология последних устанавливалась в специализированных лабораториях ПКДЦ и «Асклепий» методами ИФА и ПЦР.
Результаты и их обсуждение
Проводимый анализ первоначально включал временные параметры - возраст обследуемых и продолжительность климактерического синдрома. Особое положение занимала хирургическая менопауза, которая устанавливалась оперативно и полностью исключала адаптивные периоды. Результаты исследования влияния фактора времени на клеточное обеспечение апоптоза и общая кластерная характеристика лимфоцитов, участвующих в нем либо опосредовано как источник цитокинов, либо в виде исполнителей, представленных в табл. 1
Так, уровень инициаторов апоптотических реакций-клеток CD16 (NK) были во все возрастные периоды ближе к нижнему пределу нормы за исключением самого старшего возраста, в 60 и более лет, а так же в 50-55 лет. Этот контингент имел их в предельно низкой концентрации, правда, не выходящей за ее границу. Однако, в промежуток 55-60 лет этот показатель был довольно высоким, но верхней границы нормы не достигал.
Уровни клеток CD25, активированные ИЛ-2, в возрасте 45-60 лет колебались в пределах нормы, а в самой старшей группе резко снизились, (9,8±4,0%), даже не достиг нижней границы нормы.
Наибольшее благополучие было отмечено в концентрации CD95 (FAS-апоптоз). Она ни разу не опустилась ниже нормы, а у лиц 55-60 лет лишь несколько отставала от нее.
Подобная направленность в изменении уровня участников апоптоза, реализующих апоптозную реакцию организма, но с меньшей выраженностью обнаружены и при разной продолжительности ПМП. Однако этого следовало ожидать, так как временные параметры сдвигаются синхронно.
Более существенные сдвиги отмечены в зависимости от формы патологии - соматической и инфекционной. Это отражено в табл. 2.
Таблица 1. Клеточный спектр обеспечения общего иммунитета лимфоцитами - участниками апоптоза у женщин в ПМП с учетом временных параметров - возраста и длительности КС
|
Показатели |
Апоптоз |
||
|
СД16 |
СД25 |
СД95 |
|
|
Возраст в годах |
|||
|
45 - 50 |
15,3±5,0* |
17,8±3,7*** |
24,4±5,0 |
|
50 - 55 |
14,4±4,5 |
14,7±7,0 |
18,5±7,2 |
|
55 - 60 |
18,2±3,7 |
14,5±7,0 |
36±3,7 |
|
60 и более |
13±4,2 |
9,8±7,0 |
14,2±4,2 |
|
Средний уровень |
15,2±4,3 |
14,2±6,2 |
23,2±5,0 |
|
Длительность ПМП в годах |
|||
|
1-5 |
14,8±4,9 |
15,4±5,0 |
23,7±5,9 |
|
6-10 |
11,8±4,5** |
6,2±4,1 |
21,3±7,1 |
|
Хирургическая менопауза |
16,2±7,2 |
16,6±7,3 |
20,2±7,8 |
|
Средний уровень |
14,3±5,5 |
12,7±5,5 |
21,7±6,9 |
|
Норма |
10-23 |
10-28 |
10-45 |
Разница с нормой: *-р<0,05;**-р<0,01, ***р<0,05
Таблица 2. Клеточный спектр общего иммунитета и участников апоптоза у женщин в ПМП с разными видами патологии.
|
Показатели |
Апоптоз |
|||
|
СД16 |
СД25 |
СД95 |
||
|
Соматическая патология |
||||
|
Гипертоническая болезнь |
12,8±5,9 |
11,5±5,6 |
18,8±6,9 |
|
|
Нейро-циркуляторная дистония |
8,5±5,4* |
7,8±5,2* |
8,8±5,5* |
|
|
Хрон. панкреатит |
14,6±7,4 |
12,4±7,0 |
25,4±9,3 |
|
|
Сахарный диабет |
18,5±15,9 |
16,0±15,0 |
39,7±5,5 |
|
|
Язвенная болезнь желудка |
11,4±9,1 |
9,9±8,6* |
13,6±3,6 |
|
|
ИБС (стенокардия) |
10,2±8,7 |
7,7±7,7* |
18,9±1,0 |
|
|
Средний уровень |
12,7±3,1 |
10,8±3,1 |
20,8±8,9 |
|
|
Инфекционная патология |
|
|||
|
Уреаплазмоз |
16,2±4,5 |
12,7±8,1 |
16,4±8,2 |
|
|
Хламидиоз |
14,4±7,5 |
14,0±7,4 |
16,0±7,8 |
|
|
Гарднереллез |
13,0±12,7 |
10,4±9,2 |
19,2±14,8 |
|
|
Кандидоз |
19,0±15,0 |
14,6±2,65 |
26±16,5 |
|
|
Герпес |
19,6±18,6 |
19,3±18,7 |
30,5±23,0 |
|
|
Средний уровень |
16,4±11,7 |
14,2±9,2 |
16,4±14,0 |
|
|
Норма |
10-23 |
10-28 |
10-45 |
|
Разница с нормой: *-р<0,05;**-р<0,01
При соматической патологии в отношении CD4-хелперов, уровень CD16 лимфоцитов был в основном ближе к нижней границе нормы, а при нейро-циркуляторной дистонии - ниже ее. То же выявлено по отношению к уровню CD25, но здесь добавился низкий уровень клеток этого типа при язвенной болезни. В отношении клеток CD95 выявлено сравнительное благополучие, за исключением группы с НЦД и чуть лучше-с язвенной болезнью желудка.
При инфекционной патологии, передающийся половым путем, во всех случаях показатели содержания участников апоптоза за пределы нормы не выходили. Однако, уровень CD16 предпочитал более высокое содержание при кандидозе и герпесе, CD25 - только при герпесе и предельно низкий при гарднерелезе, CD95 - высокий при герпесе, кандидозе, гарднерелезе.
Таким образом, обеспечение клеточным составов главных участников апоптоза было у обследованных женщин весьма благоприятным, что вселяет надежду и на своевременность очищения их организма от трансформированных и нежизнеспособных клеточных отходов, и на обновление клеточно-тканевого состава с его хорошей дифференцировкой.
Вместе с тем, как уже говорилось, апоптотический эффект зависит не только от самих исполнителей, но и от медиаторов межклеточного взаимодействия, в частности, цитокинов. В их числе нами были изучены ИЛ-1β, ИФНγ, ФНОα. Результаты исследования отражены в табл. 3.
Таблица 3. Уровень цитокинов-участников апоптоза у женщин разного возраста в ПМП с учетом временных параметров - возраста и длительности КС.
|
Показатели |
Уровень цитокинов в нг/мл |
||
|
ИЛ-1β |
ИФН-γ |
ФНО-α |
|
|
Возраст в годах |
|||
|
45 - 49 |
50,71±5,6* |
51,0±5,6**.. |
33,1±5,2***... |
|
50 - 55 |
33,6±5,3 |
34,76±5,2 |
41,2±5,5***... |
|
56 - 60 |
39,0±5,4 |
34,76±4,9 |
41,2±5,6***... |
|
61 и > |
9,15±3,1** |
43,3±5,1**. |
40,303±5,5***... |
|
Средний уровень |
33,2±4,85** |
40,955±5,2 |
38,95±5,45***... |
|
Длительность ПМП |
|||
|
1-5 лет |
29,2±5,4 |
32,9±5,6 |
20,91 ±4,0** |
|
6-10 лет |
23,0±5,4 |
52,6±5,9 |
31,66±5,8** |
|
>10 лет |
13,8±4,0* |
48,7±6,0** |
36,8±0,9** |
|
хирургическая менопауза |
27,2±5,3 |
44,0±5,2** |
41,7±5,0*** |
|
Средний уровень |
24,6±5,1** |
44,4±5,5* |
23,5±4,3 |
|
Норма |
11,67±1,9 |
32,64±3,51 |
6,89±0,25 |
Различия с нормой: *р<0,05, **р<0,01
Анализ проведенных наблюдений с учетом временных параметров (табл. 3) показал значительное превышение уровня нормы цитокина ИЛ- 1β, причем, как в разных возрастных группах, так и при неодинаковой продолжительности ПМП. Исключением явилось самая старшая, более 61 года, где их уровень составил всего 9,15±3,1 нг/мл против 11,67±1,9 нг/мл в норме, и больные с длительностью КС >10 лет (всего 13,8±5,4 нг/мг).
Интерферон ИФНγ по своему содержанию мало отличался от средней возрастной величины во все периоды КС, кроме начального (45-49 лет) и самого старшего (61 год и старше), когда оно было наибольшим при продолжительности более 10 лет (44,4±5,5 нг/мл против 32,64±3,51 нг/мл).
Наиболее выраженными оказались преобразования ФНОα. Во всех обследованных группах этот цитокин-фактор некроза опухолей - превышал норму в 6-7 раз.
Таблица 4. Панорамный уровень цитокинов у женщин разного возраста в ПМП с разными видами патологии
|
Показатели |
Уровень цитокинов в нг/мл |
||
|
ИЛ-1β |
ИФН-γ |
ФНО-α |
|
|
Соматическая патология |
|||
|
Гипертон. болезнь, гипертензия |
30,01±1,8 |
23,5±3,7 |
34,37±6,5 |
|
Нейро-циркуляторная дистония |
26,7±2,1 |
43,6±3,5 |
33,93±6,5 |
|
Узловатый зоб, тиреотоксикоз |
49,1±4,0 |
35,7±2,9 |
44,4±6,9 |
|
Хронический панкреатит |
32,3±1,7 |
41,7±3,5 |
25,7±3,5 |
|
Сахарный диабет |
39,5±2,4 |
61,3±6,8 |
31,1±6,5 |
|
ИБС |
9,15±1,3 |
55,7±8,0 |
39,2±6,6 |
|
Средний уровень |
23,3±5,4 |
85,9±13,0 |
62,0±9,0 |
|
Хламидиоз |
21,2±4,7 |
30,6±6,8 |
28,8±6,4 |
|
Кандидоз |
19,2±4,2 |
23,6±5,2 |
39,4±5,2 |
|
Уреаплазмоз |
24,3±5,4 |
49,9±11,1 |
14,4±3,4 |
|
Герпес |
30,5±6,8 |
45,0±10,0 |
29,2±6,5 |
|
Средний уровень |
23,8±5,32 |
37,2±8,3 |
28,2±6,3 |
|
Норма |
11,7±1,9 |
32,64±3,5 |
6,89±0,25 |
Особенности концентрации цитокиноа при соматической и инфекционной патологии у женщин в ПМП повторили тенденции, представленные выше. Их уровни были намного, но не однозначно выше нормы.
Так, уровень ИЛ-1β при разных инфекциях оказался больше нормы, зарегистрированной у здоровых от 2 до 3 раз, при соматических болезнях - до 4-5 раз (соответственно при сахарном диабете и узловом зобе).
Уровень ИФНγ был также больше нормы, но превышал ее в меньшей степени.
Особенно высоким оказался уровень ФНОα. Он был выше от 2 до 6 раз.
Таким образом, из отмеченных закономерностей следует подчеркнуть наибольшее участие в апоптозе последнего вида цитокина - фактора некроза опухолей, ФНОα. Второе место следует отдать ИЛ-1β и третье - ИФНγ. Но при этом следует отметить, что при некоторых нозоформах болезней эти закономерности меняются. Например, при общем повышенном уровне ИЛ-1β у больных ИБС имело место заметное понижение этого цитокина. Очевидно, в определенной степени уровень цитокинов зависит от общей реактивности организма и от особенностей патогенеза их патологии.
Заключение
Для постменопаузального периода, сопровождающего климактерическим синдром, весьма характерна хорошая подготовленность организма женщин к удалению нежизнеспособных клеток, так и их обновлению, замене, дифференцировке в процессе апоптотической реакции. Последняя хорошо обеспечена клетками-участниками CD16 (NK), CD25 - ИЛ2, CD95 и необходимыми цитокинами ИЛ-1β, ИФНγ, ФНОα.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- Маянский А.Н. Апоптоз. Начало будущего. // А.Н. Маянский, Н.А. Маянский, М.А. Абаджидн, М.И. Заславская/ Ж. микробиология, 1997, №2, с.88-94.
- Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунном процессе.// А.А. Ярилин./ Ж. иммунология, 1996, №6, с. 10-20.
- Ярилин А.А. Основы иммунологии. - Москва, «Медицина», с. 308-315.