Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Введение

В настоящее время во всем мире повышается потребность населения в седативных средствах. Эти препараты используют как в лечении пациентов с различными заболеваниями, так и у здоровых людей при стрессовых ситуациях. В нашей стране традиционно популярными являются фитотерапевтические средства, в том числе препараты валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного, мяты перечной, синюхи голубой, ландыша майского и другие. Растительные препараты отличает низкая токсичность, возможность длительного применения без существенных побочных эффектов, широкий спектр фармакологической активности, относительно низкая стоимость и простота производства.

Среди растительных препаратов имеются многокомпонентные лекарственные сборы, в том числе седативный сбор №3.  Сборы используют в виде водных извлечений. Эта лекарственная форма, наряду с рядом преимуществ, обладает и существенными недостатками, связанными с приготовлением водных извлечений в соответствующем режиме, невозможностью точного дозирования, достаточно быстрой микробной контаминацией и коротким сроком годности. Она не позволяет полностью использовать весь комплекс биологически активных веществ, содержащихся в исходном растительном сырье. Весьма актуальным является перевод лекарственного растительного сырья, используемого для приготовления настоев и отваров, в сухие экстракты, как наиболее перспективную и рациональную форму [1,6]. Сухой водорастворимый экстракт седативного сбора № 3 был получен на базе ОАО «Биохиммаш». В связи с тем, что экстракт сухой является новой лекарственной формой седативного сбора №3, в соответствии с правилами доклинических испытаний необходимым является оценка его фармакологической активности [5,7].

Целью настоящего исследования явилась сравнительная оценка влияния  раствора экстракта сухого и настоя седативного сбора №3 на ориентировочно-исследовательское поведение мышей.

Материалы и методы

Для исследования использовали седативный сбор №3 (ОАО Красногорсклексредства, Россия), в состав которого входит смесь измельченного растительного сырья: валерианы лекарственной корневища с корнями, донника лекарственного, тимьяна ползучего, душицы обыкновенной и пустырника пятилопастного травы. Экстракт сухой седативного сбора №3 получали в лабораторных условиях с использованием распылительной сушилки на базе ОАО «Биохиммаш». Показатели качества и технологические характеристики полученного экстракта сухого полностью соответствовали требованиям нормативной документации на данную лекарственную форму. Настой седативного сбора №3 изготавливали в соответствии с требованиями ГФ XI.

Эксперименты выполнены с использованием 30 белых беспородных мышей обоего пола массой 23,9±0,3 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария в соответствии с действующими Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Перед постановкой эксперимента грызуны проходили карантин в течение 10-14 дней.

До начала эксперимента (с интервалом в 4 дня) регистрировали исходные характеристики поведения мышей, после чего подопытные животные были разделены на 3 группы. Мыши первой группы получали раствор экстракта сухого седативного сбора №3 ежедневно три раза в день внутрижелудочно с помощью специального зонда в течение месяца в дозе равной 1/20 LD₅₀ (355 мг/кг). Подопытные животные второй серии опытов получали настой седативного сбора №3 в дозе 355 мг/кг в пересчете на сухое вещество по той же схеме; животные контрольной группы получали изотонический раствор натрия хлорида.

Влияние раствора экстракта сухого и настоя седативного сбора №3 на ориентировочно-исследовательскую активность мышей оценивали в тестах «открытое поле» и «норковый рефлекс» [2,3,4]. Исследование проводили на специальной площадке, ограниченной прозрачной стенкой и разбитой на окружности и сектора, расстояние между которыми соизмеримо с размерами мышей. За час до тестирования подопытных животных помещали в тихое, слабо освещенное помещение, в подготовительный период с мышами не проводили никаких манипуляций. Внутрь площадки подопытных мышей помещали вместе с боксом, где животные находились в подготовительный период. Грызуны сами выходили в освещенное пространство через открытую дверцу бокса. Тестирование подопытных животных проводили утром в одно и то же время до начала эксперимента и через час после внутрижелудочного введения препаратов седативного сбора, затем еженедельно в течение месяца.

Оценивали влияние препаратов седативного сбора на горизонтальную двигательную активность мышей (по числу выходов подопытных животных в центр площадки), на вертикальную двигательную активность (по числу «вертикальных стоек» -  вставаний мышей на задние лапки) и на  «норковый рефлекс» (по числу обследований подопытными животными отверстий, находящихся в полу площадки) [2,4].

Результаты исследования обработаны статистически с применением стандартного пакета программ Microsoft Office Excel 2003. Для ряда выборок вычисляли среднюю арифметическую и среднюю квадратическую ошибку. Определение нормальности распределения переменных проводили на основании гистограмм распределения, величины асимметрии и эксцесса. Для оценки достоверности различий выборок, имеющих нормальное распределение, применяли параметрический t-критерий Стьюдента (парный и непарный). За достоверное принимали различие при уровне вероятности 95 % и более (p <0,05).

Результаты и обсуждение

Анализ результатов экспериментального исследования показал, что при однократном внутрижелудочном введении препараты седативного сбора №3 достоверно не влияли на ориентировочно-исследовательское поведение подопытных мышей. Было выявлено, что выраженность «норкового» рефлекса, вертикальной и горизонтальной двигательной активности у подопытных мышей, получавших однократно как раствор экстракта сухого, так и настой седативного сбора №3, достоверно не отличались от их уровня до введения фитотерапевтических средств и значений соответствующих показателей у животных контрольной группы, получавших изотонический раствор натрия хлорида.

При длительном курсовом применении (в течение месяца) препаратов седативного сбора №3 в ориентировочно-исследовательском поведении подопытных мышей были отмечены существенные изменения. Так, например, было выявлено угнетение вертикальной двигательной активности подопытных животных, получавших экстракт сухой и настой седативного сбора №3 (таблица 1). 

Таблица 1. Влияние раствора экстракта сухого и настоя седативного сбора №3 на вертикальную двигательную активность у мышей

Примечание: * - различия со значением исследуемого показателя в контроле (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05);

 ^# - различия со значением исследуемого показателя до опыта достоверны (р<0,05).

Вертикальная двигательная активность подопытных животных в тесте «открытое» поле характеризуется двумя видами «вертикальных стоек»: животные встают на задние лапы,  а передние лапы упираются в стенку площадки (сlimbing) или остаются на весу (rearing).  Известно, что по показателю «вертикальные стойки» оценивают мотивационную составляющую ориентировочно-исследовательского поведения подопытных животных [3,4]. Принимая вертикальное положение, грызуны пытаются войти в непрямой контакт с предметами, расположенными на расстоянии (принюхиваются). Было выявлено, что до начала эксперимента интактные мыши в тесте «открытое» поле совершали в среднем 13 «вертикальных стоек»  (13,3±1,3 раз). При тестировании подопытных животных, получавших препараты седативного сбора №3 ежедневно в течение месяца, было отмечено уменьшение числа «вертикальных стоек» у мышей в сериях опытов с введением экстракта седативного сбора в среднем в 2,1 раза (р<0,05), а в сериях опытов с применением настоя седативного сбора - в 2,4 раза (р<0,05) по сравнению с исходным уровнем. Достоверных отличий в эффективности экстракта сухого и настоя исследуемого сбора выявлено не было. Уменьшение числа «вертикальных стоек» у подопытных животных под влиянием  исследованных фитопрепаратов свидетельствует о наличии у них седативной активности.

Одной из характеристик ориентировочно-исследовательского поведения мышей в тесте «открытое» поле, позволяющих оценить горизонтальную двигательную активность, является выход подопытных животных в центр площадки. Попав в незнакомую обстановку, животные испытывают страх: при этом они стараются находиться и передвигаться вдоль стенки или сидят на периферии площадки. После оценки безопасности обстановки грызуны могут  выйти к центральным секторам. Увеличение числа выходов подопытных животных в центр площадки свидетельствует о стимуляции ориентировочно-исследовательского поведения и снижении уровня дистресса, тогда как уменьшение числа выходов в центр площадки говорит об угнетении ориентировочно-исследовательского поведения.

Достоверных изменений горизонтальной двигательной активности у подопытных мышей, получавших в течение месяца экстракт сухой  седативного сбора №3, выявлено не было (подопытные животные, как в группе наблюдения, так и в группе контроля, совершали в тесте «открытое» поле в среднем 3 выхода в центр площадки).  Следует отметить, что при использовании настоя седативного сбора горизонтальная двигательная активность подопытных животных несколько снизилась (подопытные мыши этой группы совершали в среднем 2 выхода в центр площадки) (таблица 2).

Таблица 2. Влияние раствора экстракта сухого и настоя седативного сбора №3 на горизонтальную двигательную активность у мышей

Примечание: * - различия со значением исследуемого показателя в контроле (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05);

 ^# - различия со значением исследуемого показателя до опыта достоверны (р<0,05).

Разновидностью ориентировочно-исследовательского поведения мышей является «норковый» рефлекс, который свидетельствует о способности животных исследовать открытое поле. Обследование отверстий (находящихся в полу площадки) представляет собой обнюхивание краев отверстий или засовывание головы внутрь отверстий "по глаза". Было выявлено, что применение препаратов седативного сбора приводило к снижению «норкового» рефлекса у подопытных животных. Так, у подопытных мышей, получавших ежедневно в течение месяца препараты седативного сбора, частота обследования отверстий, находящихся в полу площадки, снизилась в среднем в 1,5 раза (р<0,05) по сравнению с исходным уровнем. Достоверных различий в эффектах экстракта сухого и настоя сбора отмечено не было (таблица 3).

Таблица 3. Влияние раствора экстракта сухого и настоя седативного сбора №3 на 'норковый рефлекс' подопытных животных

Примечание: * - различия со значением исследуемого показателя в контроле (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05);

 ^# - различия со значением исследуемого показателя до опыта достоверны (р<0,05).

Таким образом, в экспериментах на мышах показано, что при однократном внутрижелудочном введении экстракт сухой (355 мг/кг) и настой (355 мг/кг в пересчете на сухое вещество)  седативного сбора №3 не влияли, а  при ежедневном длительном курсовом применении в течение месяца вызывали угнетение ориентировочно-исследовательского поведения подопытных животных. Это выразилось в достоверном уменьшении вертикальной двигательной активности подопытных мышей и снижении «норкового» рефлекса. Достоверное понижение уровня ориентировочно-исследовательского поведения подопытных животных, а также тревоги, страха, неуверенности под влиянием  исследованных фитопрепаратов свидетельствует о наличии у них седативной активности.

Выводы

1. Препараты седативного сбора №3 при однократном применении не влияли на ориентировочно-исследовательское поведение мышей.
2. При ежедневном внутрижелудочном введении в течение месяца экстракт сухой (355 мг/кг) и настой седативного сбора №3 (355 мг/кг в пересчете на сухое вещество) снижали вертикальную двигательную активность мышей соответственно в 2,1 раза (р<0,05) и 2,4 раза (р<0,05) и в среднем в 1,5 раза (р<0,05) уменьшали выраженность «норкового» рефлекса у мышей.

Рецензенты:

• Филиппова О.В., д.м.н., профессор кафедры фармации последипломного образования Воронежского государственного университета, г. Воронеж.
• Сернов Л.Н., профессор, д.м.н., заслуженный деятель науки Российской Федерации, генеральный директор ООО «Фарм-С».