Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Преэклампсия (ПЭ) осложняет от 5 до 8% беременностей в мире и является ведущей причиной материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [1]. В настоящее время существует концепция о ранней (начало заболевания до 34 недель) и поздней (манифестация в 34 недели беременности и позже) формах ПЭ. Этиологические и патогенетические факторы этих вариантов ПЭ кардинально различаются, что позволяет говорить о ранней и поздней ПЭ как о двух разных заболеваниях [2]. Ранняя ПЭ ассоциируется с выраженным нарушением кровотока в маточной артерии, выявляемым с помощью доплерометрии, задержкой роста плода, а также крайне неблагоприятными исходами для матери и плода. Напротив, поздняя ПЭ характеризуется нормальным кровотоком в маточной артерии или его незначительным снижением, меньшей частотой страдания плода, а также более благоприятными акушерскими и перинатальными исходами [3].

Локус rs1800629 гена фактора некроза опухолей – альфа (TNF-α) ассоциирован с риском ПЭ, т. к. в исследовании случай-контроль у беременных с генотипом AA риск этого осложнения гестации возрастал в четыре раза [4]. Вероятно, это связано с тем, что мутантный аллель А полиморфизма rs1800629 гена TNF-α увеличивает транскрипцию в промоторной области гена и концентрацию TNF-α [5]. Несмотря на изученную роль провоспалительного TNF-α в инициировании и прогрессировании ПЭ, ассоциация локуса rs1800629 гена TNF-α с гестационным повышением артериального давления (АД) опровергается [6].

Интерлейкин – 10 (IL-10) – противовоспалительный цитокин, его уровень в плазме крови и экспрессия гена в плаценте у пациенток с ПЭ снижается, что в свою очередь ассоциировано с носительством мутантного генотипа АА локуса rs1800896 гена IL-10 [7]. Таким образом, полиморфизм rs1800896 гена IL-10 ассоциирован с ПЭ [8]. Однако результаты метааналитического обзора указывают на отсутствие ассоциации локуса rs1800896 гена IL-10 с ПЭ [9]. Кроме того, на значительной выборке не установлено различий по полиморфизму rs1800896 гена IL-10 между группами пациенток с ПЭ и здоровыми беременными [10].

Таким образом, сведения об ассоциации полиморфизмов rs1800896 гена IL-10 и rs1800629 гена TNF-α с ПЭ противоречивы, а их связь со сроком возникновения заболевания не изучалась. В этой связи целью настоящего исследования явился анализ влияния указанных молекулярных вариантов генов IL-10 и TNF-α на формирование восприимчивости к ранней и поздней ПЭ.

Материалы и методы исследования

Для анализа ассоциаций в качестве «случаев» выделена группа из 246 беременных с ПЭ (основная группа). Критерии включения в группу: наличие артериальной гипертензии после 20-й недели беременности (систолическое АД ≥140 мм рт. ст. и/или диастолическое АД ≥90 мм рт. ст.) и клинически значимая протеинурия (наличие белка в моче ≥0,3 г/л в суточной пробе). В основной группе выделено 110 пациенток с ранней ПЭ и 136 пациенток с поздней ПЭ. В качестве «контролей» сформирована группа из 108 беременных без симптомов ПЭ (контрольная группа).

Выделение тотальной геномной ДНК пациенток из 100 мкл цельной венозной крови, стабилизированной этилендиаминтетрауксусной кислотой, проводили сорбентным методом с использованием набора «Diatom DNA Prep 100» (ООО «Лаборатория «Изоген», Россия) в соответствии с протоколом изготовителя. Однонуклеотидные полиморфизмы rs1800896 гена IL-10 и rs1800629 гена TNF-α типировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени с использованием набора праймеров и аллель-специфических гибридизационных зондов (Applied Biosystems, США). В качестве детектирующего амплификатора использовали систему регистрации ПЦР ДНК «ABI Prism» 7500 (Applied Biosystems, США).

При проведении сравнений независимых выборок применяли критерий c² и непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Тесты на соблюдение равновесия Харди–Вайнберга и выявление ассоциаций в исследованиях «случай – контроль» выполнялись по критерию c². Об ассоциации генотипов анализируемых полиморфных локусов генов IL-10 и TNF-α с ранней и поздней ПЭ судили по величине отношения шансов (odds ratio, OR) с 95% доверительным интервалом (95% CI).

Результаты исследования и их обсуждение

Данные анализа клинических характеристик обследованных беременных в контрольной и основной группах суммированы в таблице 1.

Таблица 1

Клиническая характеристика беременных контрольной группы и пациенток с ранней и поздней преэклампсией (n (%), Me (Q1; Q3))

Примечание: различия значимы между группами: * - поздней ПЭ и контрольной; ** - ранней ПЭ и контрольной; # - ранней и поздней ПЭ (по критерию c² или U-критерию Манна-Уитни).

Индекс массы тела (ИМТ) у пациенток с поздней ПЭ значимо выше, чем в группе контроля (Z=2,01, р=0,044). Показатели клинического систолического АД в группах с ранней и поздней ПЭ превосходили значимо таковые в контроле (Z=2,03, р=0,042; Z=1,98, р=0,045 соответственно), а также аналогичный показатель по диастолическому АД (Z=2,02, р=0,042; Z=2,05, р=0,038 соответственно). Пациентки с ранней ПЭ значимо раньше родоразрешены не только при сравнении с группой контроля (Z=2,14, р=0,032), но и с группой поздней ПЭ (Z=2,08, р=0,041). Количество пациенток в группе с ранним началом ПЭ, родоразрешенных абдоминальным путем, было подавляющим, что обеспечило значимое различие по этому показателю с группой беременных с поздней ПЭ и контрольной (c²=20,22, p<0,01 и c²=163, 82, p<0,01). При сравнении по показателю «кесарево сечение - естественные роды» группы с поздней ПЭ и беременных с нормальным АД обнаружены значимые различия (c²=106,32, p<0,01) за счет высокой частоты абдоминальных родоразрешений у гипертензивных пациенток.

Частоты генотипов полиморфного локуса rs1800896 гена IL-10 распределились согласно ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга: в контрольной группе χ2=1,28, p=0,26, в группе беременных с ранней ПЭ χ2=1,16, p=0,28.

При изучении частоты встречаемости генотипов локуса rs1800896 гена IL-10 у пациенток с ранней ПЭ и в контрольной группе были получены следующие результаты (табл. 2).

Таблица 2

Результаты анализа ассоциации генотипов и аллелей полиморфизма rs1800896 гена IL-10 с ранней преэклампсией

Примечание: OR – отношение шансов; 95% CI – 95% доверительный интервал.

В группе пациенток с осложненным течением беременности значимо повышена частота встречаемости аллеля А и гетерозиготного GА генотипа сайта rs1800896 гена IL-10, что позволило выделить их как маркеры, ассоциированные с риском развития ранней ПЭ; так, присутствие их в генотипе увеличивает риск заболевания в 1,54 и 1,90 раза соответственно. Расчет доминантной модели наследования (генотип GG против генотипов GA+AA) показал ассоциацию генотипов с мутантным аллелем А с ранней ПЭ, т.к. риск данного осложнения беременности значимо увеличивается у носителей этих генотипов в 2,03 раза.

Результаты статистического анализа продемонстрировали, что информативными маркерами наследования защитных механизмов относительно ранней ПЭ является носительство аллеля G и генотипа GG. Данное положение основано на том, что в группе контроля указанные молекулярные варианты полиморфного сайта rs1800896гена IL-10 обнаруживались значимо чаще, чем у пациенток с ранней ПЭ (OR=0,49 и OR=0,65 соответственно).

Распределение генотипов полиморфного локуса rs1800629 гена TNF-α соответствовало закону равновесия Харди-Вайнберга. Показатели соответствия составили для группы контроля: χ2=1,70, p=0,19, в группе пациенток с ранней ПЭ - χ2=3,00, p=0,06.

Таблица 3

Результаты анализа ассоциации генотипов и аллелей полиморфизма rs1800629 гена TNF-α с ранней преэклампсией

Примечание: OR – отношение шансов; 95% CI – 95% доверительный интервал.

Частота генотипов и аллелей локуса rs1800629 гена TNF-α значимо не различалась между группой контроля и группой с ранней ПЭ, поэтому можно полагать, что указанный молекулярный вариант гена TNF-α не влияет на риск развития этого осложнения беременности (табл. 3).

Тяжелая ранняя ПЭ отмечена у 47 (42,7%) беременных из общей выборки в 110 пациенток. Риск тяжелого течения ранней ПЭ оказался повышенным у носителей минорных аллелей А в генотипах локуса rs1800896 гена IL-10. Выявленный генетический маркер увеличивает риск тяжелого течения ранней формы ПЭ в 2,33 раза (OR=2,33 95%CI [1,02-5,31]).

Недостаточный рост плода в анализируемой выборке отмечен у 44 пациенток (40,0%). Генотипы GА+АА локуса rs1800629 гена TNF-α ассоциируются с развитием недостаточного роста плода у пациенток с ранней ПЭ, увеличивая риск этого осложнения беременности в 2,83 раза (OR=2,83 95%CI [1,18-6,77]).

Распределение частот генотипов полиморфного варианта rs1800896 гена IL-10 соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (для группы контроля - χ2=1,28, p=0,26, для группы беременных с поздней ПЭ - χ2=0,09, p=0,76).

Полиморфный локус rs1800896 гена IL-10 ассоциирован с поздней ПЭ, т. к. различие частот генотипов и аллелей между группами оказалось статистически значимым (табл. 4). Нарастание количества минорных аллелей А связано с увеличением риска поздней ПЭ; так, носительство гетерозиготного AG генотипа увеличивает в 1,72 раза вероятность возникновения этого осложнения гестации, а гомозиготный генотип АА в 2,3 раза.

Таблица 4

Результаты анализа ассоциации генотипов и аллелей полиморфизма rs1800896 гена IL-10 с поздней преэклампсией

Примечание: OR – отношение шансов; 95% CI – 95% доверительный интервал.

Аллель А повышает риск развития рассматриваемого заболевания в 1,7 раза. Расчет доминантной модели наследования для полиморфизма rs1800896 гена IL-10 (генотип GG против генотипов GA+AA) указывает, что вероятность поздней ПЭ увеличивается в присутствии минорных аллелей в генотипе в 2,13 раза.

Мажорный аллель G и гомозиготный генотип GG молекулярного варианта rs1800896 гена IL-10 обладает защитным эффектом с точки зрения ассоциации с поздней ПЭ (OR=0,59 и 0,43 соответственно).

Распределение генотипов полиморфного локуса rs1800629 гена TNF-α не отличалось от ожидаемого при равновесии Харди-Вайнберга. Показатели соответствия для группы контроля: χ2=1,70, p=0,19, для группы беременных с поздней ПЭ - χ2=3,60, p=0,06.

На основании результатов анализа ассоциации генотипов и аллелей локуса rs1800629 гена TNF-α с поздней ПЭ установлено, что указанный полиморфный маркер не влияет на риск этого осложнения беременности (табл. 5).

Таблица 5

Результаты анализа ассоциации генотипов и аллелей полиморфизма rs1800629 гена TNF-α с поздней преэклампсией

Примечание: OR – отношение шансов; 95% CI – 95% доверительный интервал.

Пациенток в анализируемой выборке с тяжелой поздней ПЭ было 48 (35,3%). Генетическими маркерами тяжелой поздней ПЭ оказались гомозиготный генотип АА локуса rs1800896 гена IL-10 (OR=2,91 95%CI [1,13-7,56]) и комбинация генотипов локуса rs1800629 гена TNF-α с мутантным аллелем А в сочетании с генотипом АА локуса rs1800896 гена IL-10 (OR=3,04 95%CI [1,07-8,61]). Как показано, эти маркеры увеличивали риск тяжелой поздней ПЭ в 2,91 и 3,04 раза соответственно.

Исследована ассоциация генетических маркеров с недостаточным ростом плода у беременных с поздней ПЭ (недостаточный рост плода диагностирован у 54 (39,7%) пациенток). Так, носительство генотипов GА и АА сайта rs1800629 гена TNF-α связано с увеличением риска недостаточного роста плода у беременных с поздней ПЭ в 3,06 раза (OR=3,06 95%CI [1,42-6,59]).

Заключение

Таким образом, ассоциированными с увеличением риска ранней и поздней ПЭ являются генотипы GA и AA полиморфизма rs1800896 гена IL-10, тогда как носительство аллеля дикого типа G и гомозиготного генотипа GG этого локуса гена IL-10 является протективной относительно этих осложнений беременности. Полиморфизм rs1800629 гена TNF-α не влияет на восприимчивость к обеим формам ПЭ.

Выявленные генетические маркеры из перечня протестированных молекулярных вариантов генов IL-10 и TNF-α ассоциируются с риском тяжелого течения ПЭ и вероятностью развития недостаточного роста плода в манере, зависящей от срока манифестации изучаемого гипертензивного расстройства у беременных.