Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Атеросклероз и связанная с ним ишемическая болезнь сердца занимают ведущее место среди инвалидности и смертности трудоспособной части населения. Создание лекарственных средств, обладающих антиатеросклеротическим действием, является актуальной проблемой.

С этой целью нами был разработан биокомпозит «Гепадип», действующим началом которого является очищенная сумма тритерпеновых гликозидов, выделенных из корней ворсянки лазоревой из семейства ворсянковых (Dipsacus azureus Schrenk, Dipsacaceae).

Ворсянка лазоревая - многолетнее травянистое растение с мощной корневой системой. Ворсянка лазоревая широко распространена по Кыргызскому, Ферганскому, Алайскому хребтам, по предгорьям, адырам в разнотравных степях южного типа [1]. Имеются литературные данные по запасам подземных и надземных органов ворсянки лазоревой по северному склону хребта Кыргызского Ала-Тоо, по северо-восточному склону Ферганского хребта в районе Кош-Тобе и предгорьям в западном склоне хребта Чаар-Таш на высоте 100-1800 м над ур. м. Запасы определяли по методике И.Л. Крыловой и др., 1970 [2]. По северному склону хребта Кыргызский Ала-Тоо общая площадь естественных зарослей составляет более 99 га, с общим запасом корня 353 тонны, а по Тянь-Шаню общая площадь составила 23 га [3]. После 40 лет мы провели сравнительную оценку запасов сырья ворсянки лазоревой по северному склону Кыргызского Ала-Тоо. За это время общая площадь естественных зарослей ворсянки составила до 66 га. Потом нами обнаружены новые, ранее не известные заросли в трех ущельях.

Фитохимические исследования показали, что корни ворсянки лазоревой содержат алкалоиды, флавоноиды, кумарины, смолы и др. Среди биологически активных соединений по количественному содержанию отличаются сапонины - до 30% в фазе отмирания.

Сумма тритерпеновых гликозидов ворсянки лазоревой понижает артериальное давление в крови и устойчивость организма животных к гипоксии. Экспериментальные исследования очищенной суммы сапонинов (препарат Дипсакозид) на лабораторных животных показали, что Дипсакозид обладает желчегонной и гепатопротекторной активностью [4]. При получении Дипсакозида автором использованы дорогостоящие ядовитые химические реактивы и бутанол. Как известно, в бутанол, кроме тритерпеновых гликозидов, переходят также полифенольные соединения. В связи с этим нами разработан усовершенствованный способ получения Дипсакозида.

Материалы и методы

С целью получения очищенной суммы сапонинов разработан усовершенствованный способ получения дипсакозида, для этого измельченные высушенные корни (1 кг) экстрагировали 96%-ным этанолом в аппарате непрерывного действия, или Сокслета. Полученный этанольный экстракт сгущали до сиропообразной массы, затем сапонины осаждали ацетоном. Осадок высушивали в сушильном шкафу под вакуумом, выход составляет 400 г.

С целью очищения от полифенольных и балластных веществ 50 г суммы сапонинов растворяли в небольшом количестве этилового спирта и вносили в колонку с 1000 г силикагеля. Сапонины элюировали системой хлороформ : этанол : вода 80:35:8, контроль фракции осуществляли на пластинках Sulifol в той же системе. Элюаты, содержащие дипсакозид, объединив, упаривали до сиропообразной массы. После охлаждения сапонины осаждали ацетоном. Затем препарат высушивали под вакуумом.

Выход составлял 24 г порошка, или 48% от неочищенной суммы сапонинов.

Дипсакозид, полученный предложенным способом - аморфный порошок белого цвета с желтоватым оттенком, хорошо растворяется в воде, образуя прозрачный раствор.

Сравнительные экспериментальные исследования на лабораторных животных показали, что препараты обоих дипсакозидов одинаково обладают гепатопротекторным свойством [4].

Результаты и обсуждение

Способ получения целебного биокомпозита «Гепадип» - гранулы. Препарат дипсакозид состоит лишь из очищенных тритерпеновых гликозидов, не содержит других биологически активных соединений, улучшающих целебный эффект созданного биокомпозита. В связи с этим в состав биокомпозита, кроме дипсакозида, ввели плоды облепихи, цветки бессмертника и плоды шиповника.

Плоды облепихи содержат комплекс витаминов, аскорбиновую кислоту, каротиноиды, токоферолы, тионин, рибофлавин, а также эфирные масла, органические кислоты и др. Плоды облепихи улучшают пищеварение, нормализуют обмен веществ, предохраняют от тромбообразования, способствуют задержке роста патологических тканей, Облепиховое масло проявляет ранозаживляющие свойства при химических и ожоговых травмах [4; 5].

Цветки бессмертника песчаного содержат флавоноиды, эфирные масла, скополетин, β-ситоберин, сторолин, органические кислоты, каротиноиды, горькие и дубильные вещества. Флавоноиды являются основным действующим веществом препарата «Фламин». Цветки бессмертника применяются главным образом при заболевании желчного пузыря, желчных путей печени (гепатиты), холециститах и желчнокаменной болезни.

Для приготовления 1 кг целебного биокомпозита «Гепадип» в виде гранул требовалось приготовление настоя из плодов шиповника и цветков бессмертника, а также получение сока с мякотью из плодов облепихи. Проводилось измельчение, настой плодов шиповника и цветков бессмертника, настаивание, очистка и выпаривание. На весах отвешивали в отдельности по 50 г измельченных плодов шиповника и цветков бессмертника.

В эмалированную тару загружали измельченные плоды шиповника, заливали 500 мл воды очищенной, нагревали на слабом огне и кипятили в течение 15 минут, затем настаивали в течение 40 минут при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Полученный настой процеживали через марлю в тару, отжимали сырье и полученный слив добавляли к настою, а затем помещали в ротационный испаритель. Выпаривали до получения густого экстракта объемом до 50 мл.

Измельченные цветки бессмертника заливали 500 мл воды очищенной, нагревали на электрической плитке до кипения и настаивали в течение 40 минут при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Полученный настой процеживали через марлю в тару, отжимали сырье и полученный слив добавляли к настою, а затем помещали в ротационный испаритель. Выпаривали до получения густого экстракта объемом до 50 мл. 250 г плодов облепихи, промытой холодной водой, пропускали через мясорубку, процеживали через марлю и отжимали. Таким образом полученный сок помещали в ротационный испаритель. Выпаривали до получения густого экстракта объемом в 50 мл.

Биокомпозит должен изготавливаться по рецептуре, указанной в табл. 1.

Таблица 1

Нормативные требования, разработанные нами для приготовления биокомпозита «Гепадип»

По органолептическим и физико-химическим показателям биокомпозит Гепадип должен соответствовать требованиям, указанным в табл. 2.

Таблица 2

Физико-химические и органолептические требования к Биокомпозиту «Гепадип»

Получение биокомпозита «Гепадип» состоит из трех технологических стадий: на весах отвешивали 10 г дипсакозида, растворяли в приготовленных густых объединенных экстрактах шиповника, цветков бессмертника и облепихи путем тщательного перемешивания с помощью деревянной лопатки. Подготовленное сырье тщательно перемешивали в таре до однородной пластичной массы. На весах в тарированную емкость отвешивали 890 г глюкозы. Влажную смесь в таре обсыпали глюкозой путем тщательного перемешивания до однородного состояния. Полученную смесь небольшими порциями гранулировали и высушивали.

Применяли методы испытаний для подлинности сапонинов: 5 г препарата растворяли в 25 мл дистиллированной воды. Из этого раствора сапонины исчерпывающе извлекали бутиловым спиртом в делительной воронке 3-4 раза. Полученное бутанольное извлечение упаривали на водяной бане досуха. Остаток растворяли в минимальном количестве этилового спирта. На линию старта хроматографической пластинки типа Silufol наносили по 20 мкл испытуемого раствора. Пластинку с нанесенными пробами сушили на воздухе до практически полного высыхания пятен, затем помещали в камеру со смесью растворителей н-бутанол : этанол : 25%-ный раствор аммиака в соотношении 7:2:5 и хроматографировали восходящим методом. Когда фронт растворителей проходил 10 см от линии старта, пластинку вынимали из камеры, сушили в токе холодного воздуха до практического отсутствия запаха растворителей и опрыскивали 25%-ным раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты. Требование: при 100-110 °С проявляются не менее четырех пятен розовато-лилового цвета (тритерпеновые гликозиды) [6].

Подлинность на флавоноиды: 5 г Гепадипа растворяли в 25 мл дистиллированной воды. Из этого раствора флавоноиды исчерпывающе извлекали этилацетатом в делительной воронке не менее 4 раз. Этилацетатные извлечения объединяли и упаривали на водяной бане досуха. Высушенный остаток растворяли в этаноле. На линию старта хроматографической пластинки типа Silufol наносили по 20 мкл испытуемого раствора. Пластинку с нанесенными пробами сушили на воздухе до практически полного высыхания пятен, затем помещали в камеру со смесью растворителей н-бутанол : этанол : 25%-ный раствор аммиака в соотношении 7:2:5 и хроматографировали восходящим методом. Требование: на пластинке обнаруживается одно четкое желтое пятно с хвостиком.

Массовую долю влаги определяли таким образом: брали 5 г гранул навески, сушили в сушильном шкафу при 80 °С в течение 1 часа и взвешивали. Испытание распадаемости гранул проводили с навеской 0,5 г, с использованием сетки с отверстиями 0,5 мм. Гранулы распадались в течение 15 минут. Определение золы по Государственной Фармакопее XI, определение экстрактивных веществ по Государственной Фармакопее X.

Определение экстрактивных веществ: около 1 г измельченного Гепадипа (точная навеска) помещали в коническую колбу вместимостью 200-250 мл, прибавляли 50 мл 40%-ного этилового спирта, колбу закрывали пробкой, взвешивали (с погрешностью 0,01 г) и оставляли на 1 час. Затем колбу соединяли с обратным холодильником, нагревали, поддерживая слабое кипение, в течение 2 часов. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывали той же пробкой, взвешивали и потерю в массе восполняли растворителем. Содержание колбы тщательно взбалтывали и фильтровали через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 мл, 25 мл фильтрата пипеткой переносили в предварительно высушенную при температуре 100-105 °С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7-9 см и выпаривали на водяной бане досуха. Чашку с остатком сушили при температуре 100-105 °С до постоянной массы, затем охлаждали в течение 30 минут в эксикаторе, на дне которого находится безводный хлорид кальция, и немедленно взвешивали. Содержание экстрактивных веществ в процентах (Х) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле:

           m*200*10

Х=      ml*(100-W)

где: m - масса сухого остатка в граммах, ml - масса сырья в граммах, W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Острая токсичность биокомпозита Гепадип была изучена на интактных белых мышах массой 18-20 г при однократном внутривенном введении водного раствора Гепадипа в соотношении 10/1 в дозах 25, 50, 100, 300, 500 и 600 мг/кг. Установлено, что препарат в дозах 25, 50 и 100 мг/кг не вызывает видимых токсических явлений в общем состоянии животных, увеличение дозы препарата привело к замедлению дыхания, саливации (животные принимали боковое положение) и гибели около десятой части животных.

Обработка полученных данных показала, что ЛД-50 Гепадипа составляет при внутривенном введении 740/485,9+416,84 мг/кг, при пероральном введении белым мышам в больших дозах (от 0,02-1,0 г на 1 особь) все животные выжили, оставаясь здоровыми в течение длительного периода наблюдения (3 месяца).

С целью определения малотоксичности Гепадипа было проведено изучение морфофункционального состояния органов кроветворения, нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем при воздействии биокомпозита Гепадип.

За это время было проведено исследование влияния Гепадипа на организм экспериментальных животных - половозрелых крыс (самцов) весом 140-160 г.

Нами проведено изучение гипохолестеринемических свойства Гепадипа.

Результаты первичного скрининга на предмет наличия у препарата Гепадип гипохолестеринемического эффекта показали, что биокомпозит Гепадип в дозах 200 и 500 мг/кг, при однократном пероральном введении крысам (17 особей) на фоне твина - 80 снижает концентрацию холестерина крови.

Гепадип в дозе 200 мг/кг при 4-дневном введении крысам (20 особей) «витаминной» моделью гиперхолестеринемии концентрацию холестерина снижает на 43,4% и триглицеридов крови – на 34% (Р<0,001) по сравнению с контрольными животными.

Заключение

1. Нами разработан целебный биокомпозит Гепадип в виде гранул, действующим началом которого является очищенная сумма тритерпеновых гликозидов - (дипсакозид), выделенных из корней ворсянки лазоревой, обладающей антиатеросклеротическим и гиполипидемическим действием. В состав Гепадипа, кроме дипсакозида, выделенного из корней ворсянки лазоревой (Dipsacus azureus Schrenk), входят плоды шиповника, используемые при холецистите, гепатитах, которые снижают содержание холестерина в крови; плоды облепихи, положительно влияющие на функции печени, снижающие содержание жира и холестерина; цветки бессмертника, применяемые при хронических холециститах и гепатитах, уменьшающие содержание билирубина и холестерина в крови.
2. Изучены органолептические и физико-химические показатели биокомпозита Гепадип.
3. Экспериментальные исследования на лабораторных животных показали, что Гепадип обладает антиатеросклеротическими, гепатопротекторными и желчегонными свойствами и может быть применён для профилактики атеросклероза, при гепатитах и холецистите.