Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

В настоящее время при лечении колоректального рака прибегают к хирургическим вмешательствам. Сочетание злокачественного новообразования и хирургической травмы приводит к снижению адаптивных и функциональных возможностей организма больных с вызванной иммуносупрессией, что может привести к развитию послеоперационных осложнений и ухудшению прогноза [7].

У больных с онкологическими заболеваниями отмечаются нарушения различных звеньев иммунитета, играя важную роль в течение основного заболевания [4, 5, 6]. Вместе с тем ослабление противоопухолевого иммунологического контроля является одной из существенных составляющих канцерогенеза. Таким образом, ингибирование иммунной системы у прооперированных пациентов с онкологическими заболеваниями может влиять на частоту послеоперационных осложнений и дальнейшее течение заболевания. В настоящее время, помимо разработки различных иммуномодуляторов [11], совершенствуются методы хирургических подходов, позволяющих проводить более щадящие для гомеостатических систем организма операции, не теряя при этом радикальности. Несмотря на необходимость проведения при злокачественном росте обширных полостных операций, в некоторых случаях представляются возможными малоинвазивные лапароскопические вмешательства.

В последнее время для оценки иммунного статуса онкологических больных помимо стандартного набора лимфоцитарных субпопуляций используют расширенную панель, включающую лимфоциты с маркерами активации, памяти, функциональной активности и позволяющую получить более полную характеристику клеточного звена противоопухолевого иммунитета. В своей работе Абакушина Е.В. и соавт. (2015) утверждает, что изучение закономерностей функционирования механизмов активации и фенотипических маркеров субпопуляций лимфоцитов в организме опухоленосителей позволит дополнить представление о роли иммунной системы в канцерогенезе [1]. Другие авторы говорят о негативном воздействии на противоопухолевый иммунитет регуляторных Т-клеток (Тreg), способных угнетать все звенья иммунной системы, повышение уровня и активности которых способствует опухолевой прогрессии [3, 12]. Помимо этого, в ряде работ в качестве прогностического фактора рассматриваются различные субпопуляции лимфоцитов, включая минорные [1, 10].

В нашей работе проводилось одноэтапное удаление опухоли толстой кишки и ее метастазов в печень, способствуя уменьшению травматического воздействия, а, следовательно, стресса и медикаментозной нагрузки, а также более гладкому протеканию послеоперационного периода.

Цель исследования

Сравнить динамику клеточных факторов иммунитета у больных колоректальным раком, прооперированных с применением лапароскопического и открытого подхода.

Материалы и методы

В исследовании приняли участие 305 больных с метастатическим раком толстой кишки с резектабельными метастазами в печень. Все пациенты были разделены на 2 группы: основную (167 человек), в которой проводились лапароскопические операции, и контрольную с проведением традиционных открытых хирургических вмешательств (138 человек).

Для оценки иммунного статуса больных забор крови проводили до оперативного вмешательства при поступлении и перед выпиской из локтевой вены в объеме 5 мл в раствор полиглюкина с гепарином. Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови выполняли методом 6-цветной проточной цитофлюориметрии на анализаторе BD FACSCantoII с панелью антител ТВNК (CD3,СD4,СD8,CD16/56,CD19), клеток памяти (CD3,CD4,RA,RO), наивных клеток (CD3,CD4,RA,CD62L), T-хелперно-индукторных клеток (CD3,CD4,CD38,HLADR), активированных Т-клеток (CD3,CD4,CD8,CD69), Т-регуляторных клеток (CD3,CD4,CD25,CD127), протеолитическая активность Т-цитотоксических клеток (CD3,CD19,CD16/56,GrB,PerF,CD45) производства фирмы Becton Dickinson. Количественное содержание лимфоцитов выражали в процентах.

Результаты исследования и их обсуждение

На всем протяжении исследования, у больных, прооперированных с помощью открытого доступа, наблюдалось статистически значимое снижение абсолютного уровня лимфоцитов как по сравнению с исходными данными, так и по сравнению с результатами больных основной группы (Таблица 1).

Таблица 1

Динамика процентного содержания лимфоцитов и показатели фагоцитоза нейтрофилов и моноцитов у больных основной и контрольной групп, %

Примечание – * статистически достоверные отличия от показателя до операции (р<0,05).

После проведения лапароскопических операций процентное содержание СD3+ и DN-лимфоцитов Т-ряда статистически достоверно снижалось. Одновременно статистически значимо возрастали процентные уровни В-клеток, СD4+ и DP Т-лимфоцитов. Содержание Tregs не менялось. У больных контрольной группы отмечалось статистически достоверное снижение процентного содержания СD3+ и СD19+ клеток. Кроме того, в динамике наблюдалось уменьшение содержания основных Т-клеточных субпопуляций (Таблица 2).

Таблица 2

Динамика показателей основных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов после проведения лапароскопических и открытых операций, %

Примечание – * – статистически достоверные отличия от показателя до операции (р<0,05).

Между тем у больных основной группы происходило снижение процентного содержания NК-лимфоцитов (СD16/56+). Наблюдалось статистически достоверное повышение процентного уровня активированных NK-клеток (CD335) и NKT-клеток, экспрессирующих маркеры как натуральных киллеров, так и T-лимфоцитов (CD3+CD16/56+). В контрольной группе отмечалось снижение процентного содержания NК-лимфоцитов (СD16/56+), в том числе содержащих важнейшую протеазу, обеспечивающую их цитотоксичность – Granzyme B, а также абсолютного уровня NКТ-лимфоцитов, что в целом характеризует угнетение NK-клеточного звена после проведения открытых операций (Таблица 3).

Таблица 3

Динамика показателей NК-лимфоцитов после проведения лапароскопических и открытых операций, %

Примечание – * – статистически достоверные отличия от показателя до операции (р<0,05).

Анализ динамики количества лимфоцитов, экспрессирующих маркеры активации, продемонстрировал снижение процента Т-хелперно-индукторных клеток с маркером ранней (CD3+CD4+CD69+) и поздней (CD3+CD4+HLADR+) активации. У больных обеих групп отмечалось статистически значимое возрастание уровня активированных (CD3+CD8+CD38+) лимфоцитов. В отличие от открытых операций, проведение лапароскопических вмешательств повышало процентный уровень CD3+CD4+CD25+ и CD3+CD8+CD25+ лимфоцитов. После лапароскопических операций происходило увеличение количества CD8+ Т-клеток с иммунофенотипом «наивных». Проведения открытых операций ингибировало этот показатель, а также процентное содержание CD4+ лимфоцитов с фенотипом Т-клеток памяти.

Через 7 суток после операции снижался уровень CD3+ лимфоцитов на фоне возрастания обеих основных субпопуляций Т-клеток (CD3+CD4+ и CD3+CD8+). По всей видимости, такие изменения достигаются за счет значительного снижения процента DN Т-клеток, не экспрессирующих ни CD4, ни CD8. Наши исследования показали, что уменьшение количества таких клеток более существенно после лапароскопической операции; при этом у тех же больных происходит возрастание DР Т-лимфоцитов (CD3+CD4+CD8+), характеризующихся как незрелые Т-клетки с фенотипом, присущим поздним тимоцитам. К настоящему времени установлено, что CD4+CD8+ клетки в периферической крови являются высокодифференцированными клетками памяти [10]. Имеются сведения о повышении содержания дубль-позитивных Т-лимфоцитов при длительной антигенной стимуляции, при персистирующей патологии, в частности, при рассеянном склерозе, инфекционных заболеваниях, миастении и др., а также в старческом возрасте [2, 8]. Основываясь на работе Н.В. Балацкой и соавт. (2015), эта субпопуляция клеток, возрастающая при мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна – Барр, ВИЧ-инфекции, рассматривается в аспекте противоинфекционной защиты [2, 13].

По нашим данным, в обеих группах после операции наблюдалось снижение уровней СD69+, особенно среди субпопуляции СD3+СD4+ клеток. В отличие от CD69+ Т-лимфоцитов, уровень Т-клеток с рецептором CD38 после операции повышался, особенно среди субпопуляции CD3+CD8+. Полученное нами повышение процента CD3+CD8+CD38+ клеток у больных в динамике можно рассматривать как признак активации клеточных иммунных реакций, играющих важную роль в противоопухолевой защите.

После лапароскопической операции отмечалось возрастание уровня CD3+CD4+CD25 и CD3+CD8+CD25 клеток, что, на наш взгляд, является свидетельством активации Т-клеточного звена у больных основной группы.

Снижение уровня CD4+HLA-DR+ у больных обеих групп, по-видимому, свидетельствует о преобладании процессов ранней активации Т(CD4+)-лимфоцитов над поздней, тогда как количество CD8+HLA-DR+ лимфоцитов не отличалось ни в динамике, ни между группами. В послеоперационном периоде у больных контрольной группы уменьшался уровень CD4+ Т-лимфоцитов с фенотипом клеток памяти (CD3+CD4+CD45RO+CD45RA-), что при дальнейшем сохранении такой тенденции может оказаться неблагоприятным фактором. Полученное нами у больных основной группы повышение содержания CD8+ клеток с фенотипом «наивных» ассоциируется со стимуляцией цитотоксического Т-клеточного звена иммунной системы после лапароскопических операций [9].

При вмешательствах на богатых бактериальной микрофлорой органах особенно важно обнаруженное нами увеличение содержания В(CD19+)-лимфоцитов после лапароскопической операции, что может являться фактором положительного прогноза раннего послеоперационного периода, поскольку В-клеточный иммунитет во многом обеспечивает противоинфекционную защиту.

Итак, на основании проведенных исследований показателей иммунного статуса в динамике послеоперационного периода у больных генерализованным колоректальным раком после открытых и лапароскопических операций установлено более щадящее действие последних на основные звенья иммунной системы.

Заключение

В ходе исследования был отмечен ряд изменений изученных параметров в динамике оценки иммунного статуса после лапароскопических операций. Установлено статистически достоверное снижение процентного содержания СD3+, СD16/56+, DN и активированных СD4+клеток с маркерами наиболее ранней (CD69) и поздней (НLА-DR) активации. Также возрастают процентные уровни СD4+, в т.ч. экспрессирующие активационный маркер СD25+ лимфоцитов, однако, это не сопровождается повышением процента лимфоцитов с иммунофенотипом Tregs (CD4+CD25highCD127dim). Кроме того, наблюдается увеличение процента DP, наивных и активированных СD8+ клеток, а также В-лимфоцитов. Полученные данные в целом свидетельствуют о сохранности основных звеньев иммунной системы. Даже при наличии снижения процентного содержания NК-клеток, уровень NKT, а также активированных натуральных киллеров (СD335) повышается, по-видимому, компенсаторно, что говорит о сохранности функциональных резервов данного звена. Абсолютные показатели клеточного иммунитета демонстрируют подобную динамику, часть из которых возрастает у больных после лапароскопической операции (СD3+СD4+, DP), в отличие от больных после открытых операций, у которых происходит снижение абсолютного содержания СD3+СD4+, СD3+СD8+, СD19+, СD16/56+, в т.ч. гранзим-содержащих, а также NKT. Полученные результаты свидетельствуют о большей сохранности Т-, В- и NK-клеточного звеньев, обеспечивающих различные иммунные реакции организма, в т.ч. противоопухолевые, хотя, учитывая ранние сроки исследования после операции, описанные различия могут быть транзиторными.