Высокая биологическая активность и низкая токсичность оксиметилурацила послужили предпосылкой для создания на его основе комплексных соединений с органическими кислотами, обладающими гепатопротекторной активностью. С учетом известных фармакологических свойств оксиметилурацила (антитоксическое и антиоксидантное действие) разработаны два новых комплексных соединения: «оксиметилурацил + глицирризиновая кислота» и «оксиметилурацил + аскорбиновая кислота» для коррекции процессов перекисного окисления липидов и нарушений метаболизма, эффективных при хронических повреждениях печени химической этиологии.

Известно, что печень крыс обладает высокой чувствительностью к повреждающему действию технической смеси полихлорированых бифенилов (ПХБ) - совтола-1 с высоким содержанием хлора [11], что явилось основанием для создания двух новых моделей патологии – токсической гепатопатии [8] и цирроза печени [8; 11]. Дальнейшие эксперименты позволили выявить патогенетическую значимость оксидативного стресса и нарушение механизмов эндогенной цитопротекции, что позволило обосновать новый подход к фармакологической коррекции выявленных нарушений.

Цель данного исследования – сравнительная оценка гепатопротекторной активности оксиметилурацила (в форме комплексных соединений с глицирризиновой кислотой и аскорбатом) и референтного гепатопротектора силимарина на модели поражения печени ПХБ-содержащим препаратом «Совтол-1» и этанолом.

Материалы и методы исследования

В ходе экспериментального исследования отобрана модель цирроза печени [11] для изучения сравнительной гепатопротекторной активности гепатопротектора силимарина и двух комплексных соединений для перорального применения: «оксиметилурацил + глицирризиновая кислота» и «оксиметилурацил + аскорбат». Крысы самцы (n=40) массой 200±20 г были разделены на 5 равных групп. Животным 1-й группы вводили 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела дважды в неделю в течение 4 недель. На протяжении опыта для питья животным давали 10%-ный раствор этанола. Крысам 2, 3 и 4-й групп, используя те же дозы, вводили токсиканты (ПХБ и этанол), однако во 2-й и 3-й группах животные дополнительно получали комплексы «оксиметилурацил + глицирризиновая кислота» и «оксиметилурацил + аскорбат». Препараты вводили перорально в течение 12 суток в дозе 50 мг/кг, начиная с 14-го дня эксперимента. В 4-й экспериментальной группе с целью коррекции использовали гепатопротектор силимарин в аналогичной дозе по вышеприведенной схеме. Интактным крысам (5-я группа) вводили растворитель в адекватном объеме. Все манипуляции выполнены в соответствии с международными нормативными документами, регламентирующими правила гуманного обращения с животными.

Проведена оценка показателей, характеризующих функциональное состояние печени: активность уроканиназы (Урн) [2], аланиновой аминотрансферазы (АлАТ), аспаргиновой аминотрансферазы (АсАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ) определяли по кинетическому методу Henry на биохимическом анализаторе согласно прилагаемым инструкциям, а также концентрацию SH-групп, билирубина, холестерина, триглицеридов и содержания в крови общего белка [6; 10]. Антирадикальную активность препаратов оценивали на специальной установке по величине константы K₇ – скорости реакции между молекулами изучаемого препарата (соединения) и перекисными радикалами этилбензола [13]. Состояние процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) исследовали методом прямой спектрофотометрии путем определения содержания в гомогенатах печени количества диеновых конъюгатов (ДК), триеновых конъюгатов (ТК) [3; 4]. Одновременно с процессами ПОЛ регистрировали активность супероксиддисмутазы (СОД) [12] и каталазы [5].

Результаты обрабатывали статистически. Оценку статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях проводили по двустороннему Т-критерию Стъюдента. Различия считали статистически достоверными при значениях Р<0,05. Комплексные соединения синтезированы в Институте химии Уфимского научного центра РАН кандидатом химических наук Гимадиевой А.Р.

Результаты и их обсуждение

Полученные результаты свидетельствуют о том, что токсическое поражение печени, вызванное введением совтола-1 и этанола, сопровождается нарушением белково-синтетической, детоксицирующей, липосинтезирующей функции печени, признаками цитолиза и холестаза, активацией процессов ПОЛ и подавлением антиокислительной системы. Эксперименты проведены в два этапа. На первом этапе исследовали активность процессов ПОЛ, систему антиоксидантной защиты и функционально-метаболическое состояние печени при сочетанном поражении ее совтолом и этанолом, на втором – сравнительную эффективность применения комплексных соединений «оксиметилурацил+ глицирризиновая кислота», «оксиметилурацил+аскорбиновая кислота» и референтного препарата силимарина. Как следует из данных, представленных в таблице 1, при развитии токсического процесса происходит накопление продуктов ПОЛ в ткани печени. Содержание ДК увеличивается почти в 2 раза, уровень ТК в 1,47 раза. Накопление продуктов ПОЛ сопровождается снижением активности антиоксидантных ферментов – каталазы и супероксиддисмутазы соответственно в 2 и 3,5 раза. Нарушения в системе ПОЛ-АОЗ протекают при одновременном снижении в печени общих тиоловых групп, которое достигает к 30 суткам 42,2% от показателей интактных животных, что может быть обусловлено неферментативной реакцией SH-групп со свободными радикалами липидов в результате активации ПОЛ.

Таблица 1

Влияние комплексных соединений с органическими кислотами «оксиметилурацил» и силимарина на активность процессов ПОЛ и антиоксидантной защиты в печени крыс при ее токсическом поражении (М±m)

Примечания: * р<0.05 между группами контроля;

** р<0.05 между группами, получавшими препараты, по сравнению с 1-й группой, получавшей только совтол-1 и этанол.

Таблица 2

Коррекция функционально-метаболических нарушений в печени на модели ее комбинированного повреждения совтолом-1 и этанолом (М±m)

Примечания:* сдвиг показателя (Δ) – разница между группами животных контроля, а также получавших комплексное соединение «оксиметилурацил+ глицирризиновая кислота», «оксиметилурацил+аскорбиновая кислота» и силимарин по сравнению с 1-й группой крыс, получавших только совтол-1 и этанол.

Токсическое поражение печени вызывает снижение концентрации белка, увеличение уровня билирубина, холестерина и триглицеридов (табл. 2). В крови животных значительно повышается активность печеночно-специфического фермента-уроканиназы, а также активность АлАТ, АсАТ и ШФ в 2.8, 2.4 и 1.9 раза соответственно.

Лечение отравленных крыс комплексными соединениями «оксиметилурацил + глицирризиновая кислота» и «оксиметилурацил + аскорбиновая кислота», так же как и гепатопротектором силимарином, благоприятно влияет на функционально-метаболическое состояние печени. Препараты оказывают гепатопротекторное действие: снижают гиперферментемию, частично нормализуют практически все нарушенные показатели, характеризующие метаболическое состояние печени (табл. 2). Комплекс оксиметилурацила с глицирризиновой кислотой менее эффективен, поскольку его введение крысам не изменяет концентрацию билирубина и холестерина, а также уровень АсАТ в крови отравленных крыс. В основе гепатозащитного действия комплексных соединений лежат их антиоксидантные свойства. Однако механизмы их антиоксидантного действия, по-видимому, различны: если комплексное соединение, содержащее аскорбат, проявляет прямую антирадикальную активность, то глицирризинат оксиметилурацила такой активностью не обладает (табл. 3).

Имеются данные о том, что глицирризиновая кислота не влияет на продукцию активных форм кислорода (АФК) активированными нейтрофилами, подавляет эту продукцию при инкубации с фагоцитами, активированными форболовым эфиром и лигандом специфических рецепторов на их мембране – хемотоксическим пептидом N-формил-Мет-Лей-Фен. На основании этих данных сделан вывод о том, что ограничивающее действие глицирризиновой кислоты на генерацию АФК связано либо с блокадой передачи рецепторного сигнала на НАДФН-оксидазу, либо с ингибирующим влиянием на протеинкиназу С [1].

Таблица 3

Константа скорости взаимодействия перекисных радикалов этилбензола с оксиметилурацилом, оксиметилурацилом-глицирризинатом, аскорбатом, глицирризиновой кислотой и ионолом (К ₇)

Примечание: * ионол (2-метол-2.6-дитретбутил-фенол) – референтный ингибитор свободно-радикального окисления.

Заключение

Гепатопротекторное действие силимарина и комплексных соединений «оксиметилурацил + глицирризиновая кислота» и «оксиметилурацил + аскорбиновая кислота» реализуется на метаболическом уровне. Метаболический эффект препаратов проявляется в снижении цитолиза, холестаза, а также в уменьшении интенсивности липопероксидации.

Антиоксидантные свойства комплексных соединений препаратов подтверждаются благоприятным влиянием препаратов на активность антиоксидантных ферментов – супероксиддисмутазу и каталазу. С точки зрения получения конечного результата силимарин и комплексное соединение «оксиметилурацил + аскорбиновая кислота» имеют некоторое преимущество перед комплексным соединением «оксиметилурацил + глицирризиновая кислота» в условиях модельной патологии, вызванной комбинацией совтола-1 и этанола. Возможно, при данном патологическом состоянии наиболее перспективными по механизму действия являются препараты с прямым антирадикальным действием, что требует дальнейшего экспериментального изучения.