Артериальная гипертензия, по данным ВОЗ, является распространенным заболеванием. Согласно данным Росстата, на 2000 год было зарегистрировано 434 тыс. человек с болезнями, характеризующимися повышенным артериальным давлением, к 2012 году эта цифра увеличилась почти в два раза и составила уже 841 тыс. человек [1]. За I квартал 2015 года смертность населения России выросла на 5,2 % по сравнению с тем же периодом прошлого года. Выявили огромное число умерших в результате болезней кровообращения (5 % на каждые 100 тысяч человек), включая гипертоническую и ишемическую болезнь. Гипертоническая болезнь – это стойкое повышение артериального систолического и диастолического давления от 140/90 мм рт. ст. и выше. Около 65 % всех артериальных гипертензий составляет эссенциальная первичная гипертензия или гипертоническая болезнь. Длительное стойкое повышение АД негативно отражается на органах и тканях, затрагивая в первую очередь функционирование сердца и почек, являясь непосредственными фактором риска заболеваний этих органов. На этом фоне зачастую развиваются осложнения в виде ишемической болезни сердца (ИБС), стенокардии (СТ) и сердечной недостаточности (СН), приводящие к смертельным исходам. Несмотря на значительные достижения генетики и медицины последних лет, решить проблему распространенности ГБ и сопутствующих ей сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), а также снизить высокую смертность от этой патологии до сих пор не удается. Тот факт, что гипертония – мультифакориальное заболевание, является очевидным [2-4]. Безусловно и образ жизни, психо-эмоциональное состояние и биологические факторы влияют на развитие болезни, но без генетической составляющей риск развития заболевания гораздо ниже. Важную роль наследственного фактора в данной патологии показали множество исследований близнецов [4-6] и семей родственников с отягощенным ССЗ анамнезом [6,7]. Исследователи полагают, что порядка 15–60 % случаев повышения АД определяются наследственными факторами, однако точные механизмы этого процесса еще не установлены [4,10]. Большинство удачных исследований, с воспроизводимыми результатами, были проведены с распространенными мутациями в генах ренин-ангиотензиновой системы (РАС), как основного важного регулятора АД в организме. В частности, точечная замена в гене ангиотензиногена М235Т (AGTT704C) является достаточно распространенной. Ген кодирует белки ренин-ангиотензиновой системы. Мутации любой области гена, как транслируемой? так и не транслируемой могут повлиять либо на сам продукт, его функциональную активность, либо на его конечную концентрацию в случае активации или ингибирования его экспрессии. Однако помимо результатов, где ассоциация полиморфизмов, в частности ангиотензиногена, с гипертонической болезнью была подтверждена [4,10], есть сообщения, когда исследователи показали отсутствие взаимосвязи точечной замены с патологией [9], или вовсе продемонстрировали протекторную роль мутации AGTM235T [8]. Такие противоречия заставляют искать объяснения и новые доказательства для последующего применения знаний в клинической практике. Для выяснения причины противоречий мы провели исследование взаимосвязи полиморфизма гена ангиотензиногена М235Т (или AGT T704C) в разных группах пациентов с учетом ожирения, возраста и сопутствующих сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ).
Целью работы являлось оценить шансы развития ГБ у людей, имеющих мутацию гена ангиотензиногена М235Т при наличия или отсутствии ИБС в разных группах по весу и возрасту.
Материал и методы
Обследовано 272 человекa: 145 женщин в возрасте 56±0,8 лет и 127 мужчин в возрасте 54±0,8 лет (Табл. 2), из них 206 с диагнозом гипертонической болезни (ГБ) первой, второй и третьей стадии и ИБС и 66, не имеющих гипертонической болезни (Табл. 1). По полу исследуемые группы контроля и опыта не отличались (р=0,173). Для выявления взаимосвязи наличия мутации в гене ангиотензиногена М235Т провели анализ сопряженности полиморфизма с патологией путем сравнения контрольной и опытной групп и оценку шансов болезни под действием фактора. В контрольной группе обследуемые не имели гипертонической болезни и сопутствующих сердечно-сосудистых заболеваний, в опытной группе сравнения пациенты были с гипертонической болезнью, но также без сопутствующих сердечных патологий. Статистическую оценку достоверности отличий проводили путем построения таблиц сопряженности и анализа критерия χ2 Пирсона. В статистически значимых группах определяли отношение шансов для оценки шансов развития патологии при наличии мутантного аллеля. Статистическую обработку провели с использованием программного пакета SPSS 20.00. В качестве клинического материала использовался образец ДНК, выделенный из венозной крови пациента. Для забора крови использовали стерильные пробирки с добавлением антикоагулянта – EDTA. Для выделения геномной ДНК был использован стандартный фенол-хлороформный метод. Для проведения последующих этапов молекулярно-генетических исследований использовался специальный набор для идентификации одноточечных нуклеотидных полиморфизмов (ООО НПФ «ЛИТЕХ», ТУ 9398-902-17253567). Согласно инструкции последовательно проводили реакции амплификации, дефосфорелирования и минисеквенирования для дальнейшей идентификации полиморфизмов на время пролетном MALDI-TOF масс-спектрометре.
Таблица 1
Характеристика исследуемых общих по возрасту групп пациентов с наличием или отсутствием гипертонической болезни, имеющих и не имеющих ИБС
Исследуемые группы |
ГБ |
||||
нет |
есть |
Итого в основной группе |
|||
Группы основного контроля и опыта |
контроль |
опыт |
|||
ИБС |
нет |
61 |
80 |
141 |
|
Группы условного контроля и опыта |
контроль |
опыт |
Итого в условной группе |
||
ИБС |
есть |
5 |
122 |
127 |
|
Итого |
66 |
206 |
272 |
||
Примечания: ИБС – ишемическая болезнь сердца, ГБ – гипертоническая болезнь.
В качестве условного контроля и опыта, те же процедуры анализа провели в группах людей, имеющих и не имеющих гипертоническую болезнь, но уже с ИБС.
Результаты
Ниже приведены таблицы с результатами анализа связи мутации AGT Т704С с гипертонической болезнью в группах: без ИБС (Табл. 3–5) и с ИБС (Табл. 6–8) с учетом ожирения, а также без учета сопутствующих патологий в зависимости от веса и возраста (Табл. 9, 10).
Частота мутантного генотипа обследуемой группы (Табл. 2) соответствовала литературным данным и равновесию Харди – Вайнберга как в общей группе, так и в группах по наличию гипертонической болезни.
Таблица 2
Распределение частот генотипов гена AGT Т704С в общей группе пациентов с ГБ без ГБ
Ген/мутация |
Общая выборка |
|||
Генотипы |
Частоты (%) |
Ожидаемые Частоты (%) |
Р |
|
AGTT704C |
TT TC CC |
22 49 29 |
21,81 49,78 28,41 |
0,72 |
В группе пациентов без ИБС наличие мутации в гене AGTM235T не сопрягалось с наличием заболевания (р=0,052). Частота мутантных аллелей составила 0,2 в группе без гипертонии и 0,4 при наличии заболевания (Табл. 3).
Таблица 3
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ у пациентов без ИБС, в общей группе по весу и возрасту
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGTT704C (%) |
χ2 |
р |
||
Т/Т |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
61 |
17 (27,8) |
32 (52,5) |
12 (19,7) |
5,9 |
0,052 |
есть |
80 |
25 (31,2) |
27 (33,8) |
28 (35) |
Примечание: Примечание: n- количество пациентов, χ2-хи квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп. Данные представлены в основных контрольной и опытной группе, то есть с ГБ и без.
Исследование мутации AGTT704C на группе людей, не страдающих сопутствующими сердечно-сосудистыми заболеваниями в общей по весу и возрасту группах, показал ОШ 1,69; 95% ДИ: 0,8-3,56, p>0,05 (Табл. 3).
Область распределения генотипов в группе без сопутствующих сердечных заболеваний, но с весом тела выше нормы (Табл. 4), не позволяет увидеть взаимосвязи с исследуемой патологией, как ранее в (Табл. 3). Несмотря на то, что частота мутантного аллеля в опытной группе с ГБ выше, чем в контроле, различия статистически не достоверны (р>0,05).
Таблица 4
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ у пациентов общей группе по возрасту, без ИБС, с избыточным весом и ожирением
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGT Т704С (%) |
χ2 |
р |
||
T/T |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
20 |
5 (25,0) |
11 (55,0) |
4 (20,0) |
0,2 |
0,3 |
есть |
28 |
7 (25,0) |
10 (35,7) |
11 (39,3) |
Примечание: n- количество пациентов, χ2- хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
У пациентов без наличия сопутствующих заболеваний и с нормальной массой тела, исследуемая патология сопряжена с полиморфизмом M235T в гене AGT с высокой статистической достоверностью (р=0,001). Отношение шансов гипертонической болезни при наличии мутации составило ОШ 2,29; 95 % ДИ: 1,31-5,09, p<0,05 (Табл. 5). Эта группа пациентов показывает, что шанс развития заболевания при мутации в 2,3 раза выше.
Таблица 5
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ у пациентов в общей группе по возрасту, без ИБС, при нормальном весе
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGT Т704С (%) |
χ2 |
p |
||
T/T |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
31 |
11 (20,3) |
31 (57,4) |
12 (22,3) |
22,6 |
0,001 |
есть |
22 |
9 (40,9) |
0 (0) |
13 (59,1) |
Примечание: n – количество пациентов, χ2- хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
Распределение генотипов гена условного контроля и опыта, то есть у пациентов с ИБС помимо ГБ, достоверно не отличалось (табл. 6) и сопряженности с полиморфизмом не выявлено.
Таблица 6
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ у пациентов с ИБС, в общей по возрасту и весу группе
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGT Т704С (%) |
χ2 |
p |
||
T/T |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
5 |
0 (0) |
4 (80,0) |
1 (20,0) |
1,38 |
0,5 |
есть |
122 |
18 (14,8) |
68 (55,7) |
36 (29,5) |
Примечание: n – количество пациентов, χ2 – хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
У людей с ИБС различия групп опыта и контроля были не достоверны (Табл. 7, 8, 9).
Таблица 7
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ у пациентов с ИБС в нормальном весе, в общей по возрасту группе
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGT Т704С (%) |
χ2 |
p |
||
T/T |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
3 |
0 (0) |
2 (66,7) |
1 (33,3) |
0,34 |
0,8 |
есть |
61 |
6 (9,8) |
35 (57,4) |
20 (32,8) |
Примечание: n – количество пациентов, χ2 – хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
У людей с ИБС закономерности в наличии гипертонической болезни при мутации исследуемого гена выявить не удалось.
Таблица 8
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ у пациентов с ИБС в общей по возрасту группе, с массой тела выше нормы
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGT Т704С (%) |
χ2 |
p |
||
T/T |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
2 |
0 (0,0) |
2 (100,0) |
0 (0,0) |
1,28 |
0,5 |
есть |
30 |
6 (20,0) |
18 (60,0) |
6 (20,0) |
Примечание: n – количество пациентов, χ2 – хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
У людей разного возраста с нормальным весом, как с ишемической болезнью сердца, так и без нее распределение частот полиморфизмов достоверно отличалось и было сопряжено с гипертонической болезнью (Табл. 9).
Таблица 9
Распределение и сопряженность генотипов ангиотензиногена с ГБ в общей по возрасту группе пациентов с ИБС и без ИБС, с нормальным весом
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGT Т704С (%) |
χ2 |
p |
||
T/T |
Т/C |
C/C |
||||
нет
|
35 |
11 (31,4) |
20 (57,1) |
4 (11,5) |
9,5 |
0,009 |
есть |
83 |
15 (18,1) |
35 (42,2) |
33 (39,7) |
Примечание: n – количество пациентов, χ2 – хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
В данной группе отношение шансов составило 6,263; 95 %ДИ: 2,586-15,169, р<0,05 с высокой достоверностью (p=0,0001). Здесь, с высокой степенью достоверности шанс обнаружить заболевание у людей с AGTM235T в 6 раз выше, чем без нее.
Молодой возраст также был сопряжен с развитием гипертонии, что сочетается с литературными данными.
Таблица 10
Распределение частот генотипов полиморфизма AGTT704C и их сопряженность с ГБ у пациентов с ИБС и без ИБС в общей группе по весу, в возрасте от 41 до 49 лет
Гипертоническая болезнь |
n* |
Частоты генотипов AGTT704C (%) |
χ2 |
p |
||
T/T |
T/C |
C/C |
||||
нет
|
38 |
12 (31,6) |
19 (50) |
7 (18,4) |
6,77 |
0,034 |
есть |
49 |
10 (20,4) |
17 (34,7) |
22 (44,9) |
Примечание: n – количество пациентов, χ2 – хи-квадрат Пирсона, р-достоверность отличий исследуемых групп.
В возрастной группе 41–49 мы получили ОШ 3,87; 95 % ДИ 1,77-8,49, р<0,05 для мутантных генотипов гена ангиотензиногена. В то время как в других возрастных группах 50–58 (р=0,235), 59-68 (р=0,58) отличий не было.
Обсуждение
Так как по возрасту и индексу массы тела (ИМТ) различия были статистически значимы, дальнейший анализ полученных данных был проведен с учетом групп по возрасту и весу. Средний возраст в контрольной группе 48±0,8, в опытной 52±0,8 (р<0,05), ИМТ 25,5±0,5 и 28±0,5 соответственно (р<0.05). На выявление сопряженности мутации с гипертонической болезнью влияли вес, возраст и наличие ИБС у пациентов. У пациентов без ИБС в общей группе по весу, отношение шансов показало отсутствие связи гипертонической болезни с фактором наличия мутации (ОШ 1,69; 95% ДИ: 0,8-3,56, p>0,05). В этой же группе с избыточной массой тела и ожирением достоверных отличий так же не установлено. Однако, в группе с нормальным весом выявлено, что шанс развития болезни у людей с мутацией в гене ангиотензиногена в 2.3 раза выше, чем у людей без мутации (ОШ 2,29; 95% ДИ: 1,31-5,09, p<0,05). Такой же анализ, с учетом веса, проведенный с пациентами, имеющими сопутствующую гипертонической болезни ИБС, не дал возможность обнаружить взаимосвязь с патологией. Достоверность различий в группе общей по весу, с ожирением вместе с избыточным весом и группе нормального веса составила: р=0,5; 0,5 и 0,8 соответственно. Общая группа по сопутствующим сердечно-сосудистым патологиям, то есть с пациентами имеющими и не имеющими ИБС помимо ГБ, проанализированная по весу, показала значимую сопряженность гипертонической болезни с фактором наличия мутации у людей в нормальном весе. Группа с нормальным весом показала, что шанс развития болезни в 6 раз выше (ОШ: 6,263; 95%ДИ: 2,586-15,169, р=0,0001) при мутации, чем без нее, что было невозможно увидеть у людей с массой тела выше нормы, где отличия были статистически незначимы. Анализ общей выборки с сопутствующими заболеваниями, различным весом по возрастным группам, показал, что у пациентов от 41 до 49 лет, мы можем видеть взаимосвязанный процесс развития болезни у людей с мутацией AGT T704C, в то время как в возрастных группах 50–58, 59–68 и старше сопряженность увидеть не удалось. Отсутствие достоверных отличий в группах с сопутствующими сердечными патологиями, избытка веса и ожирением и наличие сопряжения без этих факторов свидетельствует о том, что у пациентов при ожирении и сопутствующих сердечных патологиях в проявлении гипертонической болезни участвует не генетические или не только генетические факторы. По результатам работы наглядно видно, что фактор избытка массы тела, сопутствующие патологии и особенности регуляции экспрессии гена в разные возрастные периоды маскируют патогенетическую роль мутации AGT T704C при гипертонической болезни.
Заключение
Таким образом, по результатам исследования можно сказать, что наличие мутации в исследуемом гене действительно способствует развитию гипертонической болезни. Мутации в гене AGT Т235М в 6 раз увеличивают вероятность развития патологии. В возрастной группе 41–49 лет показано четырехкратное увеличение риска патологии. Отсутствие достоверных отличий в группах с ИБС, ожирением, избытком веса, и наличие сопряжения без этих факторов свидетельствует о том, что у пациентов при весе выше нормы и сопутствующих сердечных патологиях в проявлении гипертонической болезни участвует не генетические или не только генетические факторы, маскируя закономерные связи патологии с мутацией ангиотензиногена. В свете имеющихся противоречий в литературных данных относительно изучаемого здесь вопроса можно заключить, что результаты во многом определяются сопутствующими факторами и действительно могут быть причиной разногласий, поскольку в общей группе обследуемых нами людей выявленные связи не были очевидны.