Персонифицированное лечение предусматривает контролирование применения лекарственных средств в режиме реального времени. Большинство современных методов, используемых в диагностике заболеваний и для дальнейшего контроля проводимой терапии, регистрируют изменения структуры и функций тканей и органов. В свою очередь, постоянство структуры и функции поддерживается системой регуляторных процессов. Процессы регуляции основываются на рецепторно-информационных взаимодействиях всех клеток организма, а также организма и окружающей среды. С этих позиций целесообразно использовать методы, позволяющие оценить данные процессы. К таким методам можно отнести акупунктурную диагностику. В этом случае регистрируется тот или иной показатель биологически активных точек (БАТ), что позволяет судить о функции канала, связанного с состоянием внутренних органов, отдельных функциональных систем и организма в целом. Перспективными представляются методики, позволяющие оценивать состояние внутренних органов по температурным параметрам БАТ. Одной из них является метод дифференциальной термометрии БАТ.
Цель исследования: оценить эффективность применения гомеопатического препарата Арники С6 и антигомотоксического препарата Плаценты композитум в лечении острой экспериментальной ишемии головного мозга с помощью метода дифференциальной термометрии БАТ.
Задачи исследования:
1. С помощью метода дифференциальной термометрии БАТ определить эффективность применения гомеопатического препарата Арники С6 при лечении острой экспериментальной ишемии головного мозга у животных.
2. Установить эффективность применения комплексного антигомотоксического препарата Плаценты композитум у животных с острой экспериментальной ишемией головного мозга на основе показателей дифференциальной термометрии БАТ.
3. Сравнить эффективность применения Арники С6 и Плаценты композитум при лечении острой ишемии головного мозга животных в эксперименте.
Материалы и методы
Исследования проводились на базе кафедры фармакологии ВГМУ им. Н. Н. Бурденко.
Объектами для экспериментов послужили 30 кроликов породы Шиншилла обоего пола массой 3,2–3,5 кг. Исследование проводили в соответствии с требованиями правил лабораторной практики по экспериментальному (доклиническому) исследованию в РФ [1, 2]. На момент проведения экспериментов животные были адаптированы к человеческому фактору, прошли акклиматизацию и были здоровы.
Изучение и фотофиксацию гистологических срезов препаратов лобных и теменных долей проводили на микроскопе OlympusCX21. В процессе изучения гистопрепаратов определялись признаки деструктивных изменений в головном мозге на фоне церебральной ишемии [3].
Искусственную ишемию головного мозга у животных вызывали перевязкой (лигированием) правой общей сонной артерии [4,7]. Искомую точку на ухе кролика находили, руководствуясь атласом аурикулярного представительства внутренних органов у кроликов [6]. Разность температур ΔТ БАТ оценивалась ежесекундно в течение 2 минут, фиксировалась в виде термограммы на экране компьютера и заносилась в формализованные карты.
Для проведения пунктурной термометрии в режиме реального времени было использовано оригинальное устройство (микропроцессорный регистратор разности температур между точками акупунктуры и интактной зоной кожи). Прибор разрешен для клинических испытаний региональным Научно-техническим медицинским советом [протокол №15 от 25 марта 1999 г], а также имеет сертификат соответствия гигиеническим нормативам в соответствии с «Требованиями к изделиям медицинского назначения и медицинской технике» [протокол лабораторных исследований № 2205 от 16 мая 2012 г.]; имеется патент на полезную модель № 134028 «Устройство регистрации биопотенциалов и температуры биологически активных точек». Нами был предложен ряд показателей, характеризующих динамику изменения термограммы, и компьютерная программа, позволяющая рассчитать 14 цифровых показателей, представляющих собой регуляторные характеристики термограмм БАТ, и зарегистрированная в Реестре программ для ЭВМ [Свидетельство № 2011611929 от 2.03.2011]. Анализировались следующие показатели:
1 – общее количество положительных (+) и отрицательных (-) флюктуаций температуры;
2 – количество положительных и отрицательных флюктуаций температуры в 1 минуту;
3 – количество положительных флюктуаций температуры в 1 минуту;
4 – количество отрицательных флюктуаций температуры в 1 минуту;
5 – соотношение положительных и отрицательных флюктуаций температуры в 1 минуту по частоте (разность показателей);
6 – продолжительность (сек) положительных флюктуаций температуры в 1 минуту;
7 – продолжительность (сек) отрицательных флюктуаций температуры в 1 минуту;
8 – соотношение положительных и отрицательных флюктуаций температуры в 1 минуту по длительности (разность показателей);
9 – индекс регуляции по частоте (отношение количества положительных флюктуаций температуры в 1 минуту к количеству отрицательных флюктуаций, т.е. п3/ п4);
10 – индекс регуляции по длительности (отношение длительности положительных флюктуаций температуры в 1 минуту к длительности отрицательных флюктуаций, т. е. п6/ п7);
11 – средняя величина амплитуды положительных переходов за 2 мин;
12 – средняя величина амплитуды отрицательных переходов за 2 мин;
13 – частота горизонтальных сегментов за 1 мин;
14 – длительность горизонтальных сегментов (отсутствие колебаний) за 1 мин.
Цифровые материалы представлены в расчетных единицах (р.е.).
Кролики были распределены на 3 группы. У животных первой группы (контроль, 10 кроликов), измерения разности температур точки канала сердца проводили без введения каких-либо лекарственных препаратов на 1-е, 7-е и 14-е сутки наблюдения. Животным второй группы (10 кроликов) внутримышечно ежедневно вводили антигомотоксический препарат Плацента композитум в виде раствора из расчета 0,1 мл/кг в 1 мл воды для инъекций в течение 2-х недель. Кролики третьей группы (10 животных) в течение 14 дней получали гомеопатический препарат Арника С6peros из расчета 5 крупинок в 100 граммов воды в свободном доступе.
Использование в нашей работе количественных показателей методик, характеризующих процессы восстановления функций ЦНС, делает необходимой математическую обработку данных [5,8]. Статистический анализ результатов исследований проводился с помощью программы Statistica 6.1.
Полученные результаты
В начале исследования были выявлены особенности изменений ∆Т БАТ у всех животных, принимавших участие в эксперименте, на первые сутки после моделирования ишемии головного мозга (таблица).
Динамика изменений ∆Т БАТ (р.е., M±m) у животных (n=30) с экспериментальной ишемией головного мозга без введения лекарственных препаратов
Сроки (сутки) |
|||
Показатели |
До операции |
1-е сутки |
|
1 |
40,6±1,45 |
44,2±1,52* |
|
2 |
20,2±0,65 |
21,7±0,72* |
|
3 |
10,6±0,30 |
11,2±0,38 |
|
4 |
9,47±0,44 |
10,5±0,31* |
|
5 |
1,10±0,12 |
0,78±0,12* |
|
6 |
13,1±0,64 |
13,3±0,62 |
|
7 |
10,9±0,55 |
11,9±0,61 |
|
8 |
2,21±0,09 |
1,41±0,11* |
|
9 |
1,11±0,03 |
1,06±0,02 |
|
10 |
1,20±0,08 |
1,11±0,03 |
|
11 |
1,72±0,11 |
1,93±0,32 |
|
12 |
-1,80±0,17 |
-1,98±0,18 |
|
13 |
12,3±0,51 |
12,7±0,71 |
|
14 |
33,7±1,02 |
30,7±0,72* |
* р< 0,05; р.е – расчётные единицы.
Как видно из таблицы, наиболее выраженными изменениями на 1-е сутки после моделирования ишемии головного мозга оказались показатели соотношения флюктуаций со знаком + и со знаком - в 1 минуту по частоте (п5) и длительности (п8), что указывает на снижение выраженности флюктуаций со знаком + и уменьшение их устойчивости, т.е. на снижение устойчивости регуляторных процессов. В дальнейшем мы будем описывать именно эти показатели.
Анализ результатов термограмм животных первой группы, не получавших никаких лекарственных препаратов, показал, что на 1-е сутки после операции показатели соотношения флюктуаций со знаком + и со знаком - в 1 минуту по частоте и длительности (п5 и п8) уменьшились на 2,9 % и 1,6 % соответственно, что свидетельствует о снижении выраженности флюктуаций со знаком +, и снижении устойчивости флюктуаций со знаком -. На 7 сутки после операции наблюдается снижение выраженности флюктуаций со знаком + (показатель 5) на 27,1 % (p<0,05) и снижение устойчивости флюктуаций со знаком - (показатель 8) на 11,5 % (p<0,05). Уменьшение разности температур на 14 сутки после операции указывает на снижение выраженности флюктуаций со знаком + (показатель 5) на 41,5 % (p<0,001) и уменьшение их устойчивости (показатель 8) на 13,9 % (p<0,05), соответствующим усугублению процессов дезрегуляции в организме животных. Эти данные свидетельствуют о стимуляции процессов регуляции в организме животных в ответ на острую ишемию тканей головного мозга на 1-е сутки после операции и истощение их без лечения на 7-е и 14-е сутки исследования.
При изучении морфологической структуры срезов коры лобной и теменной долей больших полушарий головного мозга после 14-ти дневной ишемии выявлялось снижение количества нейронов с потерей радиальной исчерченности (рисунок).
Морфологическая характеристика фронтального среза лобной доли головного мозга кролика (14 сутки) при ишемии без введения лекарственных препаратов; окраска гематоксилин-эозином; Х 63
Отмечается значительное количество гиперхромных и сморщенных нервных клеток с извитыми апикальными отростками, а также укорочение дендритов и гибель отростков; перицеллюлярный и периваскулярный отеки; деструктивные нейроны без ядра (клетки – тени), а также клетки с набухшими распадающимися и крупными гиперхромными ядрами. Таким образом, результаты морфологического исследования подтверждают наличие ишемических и гипоксических изменений в тканях головного мозга животных.
У животных второй группы, получавших Плаценту композитум, получены несколько иные результаты. Так, на 1-е сутки исследования происходит снижение выраженности положительных флюктуаций (показатель 5) на 9,1 % (p<0,05) и уменьшение их устойчивости (показатель 8) на 6,7 % (p<0,05). На 7-е сутки исследования отмечается уменьшение выраженности отрицательных флюктуаций (показатель 5) на 10 % (p<0,05) и повышении устойчивости положительных флюктуаций (показатель 8) на 6 % (p<0,05), что указывает на значительную стимуляцию регуляторных процессов в середине курса восстановительного лечения. На 14-е сутки наблюдается снижение выраженности положительных флюктуаций (показатель 5) на 32,5 % (p<0,05) и увеличение устойчивости этих флюктуаций на 14-е сутки (показатель 8) 29,5 % (p<0,05), что свидетельствует о некотором ослаблении регуляторных процессов. Результаты морфологического исследования подтверждают эти выводы: среди сохранившихся нейронов обнаруживались гиперхромные нервные клетки; перицеллюлярный и периваскулярный отеки незначительно уменьшились; деструктивных нейронов без ядра (клеток – теней) стало меньше, ядра приобретают четкость контуров; в клетках стали прослеживаться ядерные структуры.
У животных третьей группы (10 кроликов), получавших гомеопатический препарат Арника С6, наблюдались следующие изменения разности температур: уменьшение выраженности положительных флюктуаций (показатель 5) на 20 % (p<0,05) и снижение их устойчивости (показатель 8) на 12,5 % (p<0,05) на 1-е сутки исследования. На 7-е сутки отмечается увеличение выраженности положительных флюктуаций (показатель 5) на 75 % (p<0,001) и снижение их устойчивости (показатель 8) на 12,9 % (p<0,05). На 14-е сутки результаты исследования указывают на снижение выраженности отрицательных флюктуаций (показатель 5) на 23,1 % (p<0,05) и увеличение устойчивости положительных флюктуаций (показатель 8) на 17 % (p<0,05), что свидетельствует о значительной стимуляции процессов регуляции при применении лекарственного средства малой интенсивности действия (Арники С6) и восстановлении их на 14-е сутки наблюдения. Морфологические исследования подтверждают сделанные выводы: апикальные отростки нейронов выравниваются, практически исчезли штопорообразно извитые дендриты, перицеллюлярный и периваскулярный отеки значительно уменьшились; деструктивных нейронов без ядра (клеток – теней) стало значительно меньше, ядра приобретают четкость контуров; в клетках ясно прослеживаются ядерные структуры. Значительно уменьшились вакуолизация цитоплазмы, явления нейрофагии и сателлитоза.
Вывод
В процессе острой ишемии головного мозга и терапии препаратами Плацента композитум и Арника С6 отмечаются достоверные изменения некоторых показателей термометрии БАТ, в частности показателей соотношения положительных и отрицательных флюктуаций по частоте и длительности (показатели 5 и 8). Динамика изменения этих показателей на 14-е сутки исследования свидетельствует о лучших результатах восстановления функций ЦНС при применении Арники С6, что подтверждается морфологическими исследованиями. Дальнейшее изучение метода дифференциальной термометрии БАТ может оказаться перспективным с точки зрения оценки состояния организма при ишемических поражениях головного мозга.