Главным действующим механизмом в защите организма голубей от свободных радикалов (СР) является антиоксидантная защита (АОС), которая определяет гомеостаз и адаптацию к стресс-факторам и ограничивает процесс перекисного окисления липидов (ПОЛ) за счет работы неферментативных и ферментативных звеньев. Витамины Е, А, С, а также кальций, селен и другие элементы (Zn, Mn, Cu) являются экзогенными (неферментативными) частями линии антиоксидантной защиты живых организмов, в т.ч. и птиц [8,2]. Ферментативная (эндогенная) линия предопределяет возможность детоксикации потенциально опасных супероксиданиона и пероксида водорода (Н2О2) с участием таких энзимов, как супероксиддисмутаза (СОД) и, конечно, каталазы [3,4].
Целью работы явилось выяснение стационарного состояния уровня продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), антиоксидантной системы и гормональной характеристики голубей различных пород.
В литературе данных о эндокринной системе голубей очень мало. Однако, при всех случаях диагностики и терапии болезней голубей ветеринарным врачам крайне не хватает критериев физиологической нормы птиц, в т.ч. уровня АКТГ, тироксина и кортизола в организме и особенно у голубей мясных и дорогих пород (C.livia), хотя у них выявлено достаточно много инфекционных, инвазионных и незаразных болезней, в т.ч. зоонозного и эндогенного характера, которые необходимо профилактировать и лечить.
Данные о свободнорадикальном окислении, антиоксидантной и гормональной системе голубей в литературе встречаются очень редко, а в условиях региона Нижней Волги эти исследования вообще не проводились.
Материалы и методы
В качестве объектов исследования использовались голуби трех пород. Сизый дикий голубь – (Colombinae (liviaGm.), являющийся родоначальником двух других изучаемых пород: домашний почтовый голубь (Columbialiviasp.) и домашний мясной голубь – кинг.
Количество витамина Е в сыворотке крови определяли методом Эмери – Энгеля в реакции с зализодипиридиловым реактивном и с помощью жидкостной хроматографии на хроматографе «Минихром» со сканирующим УФ детектором, а витамина А – исследовали по цветной реакции Карра – Прайса с хлоридом сурьмы по И. П. Кондрахину [6]. Уровень диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови оценивали спектрометрически по УФ-спектрам [10], а малонового диальдегида (МДА) – исследовали по В. С. Бузлама и др. [1]. Активность каталазы – по М. А. Королюк [7], супероксиддисмутазы (СОД) – по ее способности конкурировать с нитросинимтетразолием за супероксидные анионы – по С. И. Чевари [11], глутатионпероксидазы (ГПО) – по R. Paglian Valentine [12]. Адренокортикостерон (АКТГ) и кортизол в крови определялись твердофазным иммуноферментным методом с помощью тестов «Biomerica. ACTHELISA» с помощью анализатора «ElisysQuatro» (ФРГ). Тироксин (Т4) в сыворотке крови голубей исследовали с помощью анализатора «Униплан», методом иммуноферментного анализа [9].
Результаты исследований обрабатывали статистически по Г. Ф. Лакину [8] с использованием компьютерных программ MicrosoftExcel 97 Pro, Statistica. Для определения степени достоверности средних величин изучаемых параметров физиологического состояния голубей использовали t-критерий Стьюдента, при уровне значимости Р<0,05.
Результаты и обсуждение
В месячном возрасте, когда родители кормят птенцов зобным молоком и постепенно подкармливают кормом, содержание антиоксидантных витаминов А и Е в крови (табл. 1) голубят разных пород мало отличается (Р˃0,5). В возрасте двух месяцев (55–60 дней) в крови голубей, перешедших на питание кормом голубей, уровень исследованных витаминов в крови резко снижается у голубей всех трех изучаемых пород, относительно количества витаминов Е и А в крови голубят в возрасте одного месяца. В крови кингов содержалось большое количество витамина А, а в возрасте 2-х лет и антиоксидантного витамина Е, относительно аналогичных показателей у почтовых и сизых голубей.
Таблица 1
Уровень ферментов и витаминов в сыворотке крови голубей у разных пород
Название пород |
Витамин Е, мкг/мл |
Витамин А, мг% |
Кальций, мг% |
Фосфор, мг% |
1 месяц |
||||
дикие сизые |
26,94±2,19 |
7,14±0,54 |
14,1±1,07 |
20,93±0,52* |
почтовые |
28,23±2,53 |
8,83±0,62 |
14,2±1,98 |
7,5±0,03 |
кинги |
28,34±1,96 |
9,41±0,88* |
13,2±1,57 |
8,4±1,07 |
2 месяца |
||||
дикие сизые |
15,79±1,26 |
4,01±0,26 |
12,2±1,52 |
11,7±1,98* |
почтовые |
16,38±1,09 |
3,82±0,59 |
14,0±2,04* |
10,9±1,41 |
кинги |
15,01±1,32 |
4,92±0,67* |
8,5±0,06 |
8,5±0,23 |
2 года |
||||
дикие сизые |
8,56±0,52 |
2,16±0,03 |
6,7±0,13 |
16,0±0,15* |
почтовые |
9,09±0,46 |
2,02±0,05 |
6,9±0,19 |
6,2±0,14 |
кинги |
11,36±1,14* |
2,69±0,03* |
7,2±0,28 |
5,6±0,13 |
* – Р<0,05 у различных пород голубей.
Уменьшение содержания витамина А в крови голубей в течение постнатального онтогенеза, видимо, является следствием взаимодействия витамина с активными формами кислорода (АФК) и пероксидными радикалами. Следует сказать, что между интенсивностью процессов пероксидации и обеспеченностью крови каротиноидами, существует тесная корреляционная зависимость. Токоферол (витамин Е) участвует в энергетическом метаболизме клетки, последовательно влияя на обмен коэнзима Q10 (убихинон), который регулирует энергетические процессы в клетках органов и тканей организма. Восстановленная форма убихинона – убихинол – является одним из активнейших эндогенных антиоксидантов антирадикального действия. Будучи жирорастворимым витамином, токоферол способен в липидной фазе мембран вступать в окислительно-восстановительные реакции и нарушать (разрушать) процессы свободно-радикального окисления [8]. Уровень кальция в крови голубей всех трех пород по мере их взросления снижается. При этом у диких сизарей в крови уровень фосфора выше, чем у домашних голубей, особенно мясного кинга, который не летает, как сизари и почтовые, и постоянно находится в клетке (Р˂0,05).
Таблица 2
Показатели ПОЛ и АОС в крови голубей различных пород в биогеохимических условиях Астраханской области (возраст – 1 месяц)
|
Породы голубей |
||
Показатели |
|
домашние |
|
дикий сизарь |
почтовый |
мясной (кинг) |
|
n=16 |
n=16 |
n=16 |
|
общие липиды, г/л |
6,59±0,22 |
7,41±0,06* |
6,99±0,07 |
диеновые конъюгаты, ед.опт.пл/мг липидов |
0,71±0,07 |
0,93±0,02* |
0,88±0,08* |
Малоновый диальдегид, мкмоль/л |
1,35±0,04 |
1,49±0,03* |
1,46±0,51* |
супероксиддисмутазы, ед/мин |
110±4,27 |
126±4,59* |
134±8,61* |
каталаза, мкмоль Н2О2 л/мин |
34,2±1,15 |
41,7±5,14* |
35,9±2,97 |
глутатионпероксидаза, мкмольG-SH л/мин |
8,73±0,29 |
9,21±0,06 |
10,55±0,33* |
*Р-<0,05 относительно аналогичного показателя у голубей других пород.
Сопоставляя показатели общих липидов в крови голубей разных пород в месячном возрасте, можно заключить, что уровень липидов у почтовых голубей достоверно выше аналогичных параметров у диких сизарей и мясного кинга (табл. 2). Продукты пероксидации липидов в крови голубят имели определенные межпородные отличия. У голубей почтовых и кингов к концу первого месяца жизни (24 день) количество диеновых конъюгатов (ДК) и малонового альдегида (МДА) – одного из конечных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), было достоверно больше, чем у диких сизых голубей, которые к концу первого месяца уже питались практически самостоятельно и начали вылетать из гнезда вместе с родителями. Супероксиддисмутаза (СОД) по своей активности оказалась у сизарей ниже (Р<0,05), чем у домашних голубей (почтовые и кинги). В то же время активность каталазы у почтовых голубей была определенно больше, чем у сизых и мясных кингов (Р<0,05). Уровень активности глутатионпероксидазы в крови месячных птиц у голубей всех трех изучаемых пород был практически одинаковым. В целом уровень ПОЛ и АОС у почтовых голубей, относительно сизых и кингов, был самым высоким.
У двухмесячных голубят в крови (табл. 3) содержание ДК и МДА у всех трех изучаемых пород птиц снизилось относительно аналогичного параметра ПОЛ в первый месяц жизни. Уровень МДА у сизых голубей выше, чем аналог у месячных голубят, а у почтовых и кингов, напротив, стал меньше. У мясных голубей количество МДА в 2-х месячном возрасте ниже, чем у птиц двух других пород. Уровень СОД и каталазы у двухмесячных диких (сизарь) и домашних (почтовых) голубят был ниже, чем у кинга (Р<0,05). Активность глутатионпероксидазы (ГПО) у мясных кингов была выше, чем у сизых и почтовых голубей (Р<0,05).
Таблица 3
Параметры ПОЛ и АОС у голубей в возрасте двух месяцев
Показатели |
Породы голубей |
||
дикий сизарь |
домашний почтовый |
мясной (кинг) |
|
n=16 |
n=16 |
n=16 |
|
общие липиды, г/л |
7,59±0,92 |
8,62±1,17 |
9,51±0,53 |
диеновые конъюгаты, ед.опт.пл/мг липидов |
0,52±0,07 |
0,54±0,03 |
0,48±0,04 |
малоновыйдиальдегид, мкмоль/л |
1,43±0,06 |
1,42±0,02 |
1,31±0,08 |
супероксиддисмутазы, ед/мин |
126±8,7 |
122±9,16 |
129±7,15* |
каталаза, мкмоль Н2О2 л/мин |
26,21±2,15 |
28,7±0,52* |
29,97±1,03* |
глутатионпероксидаза, мкмольG-SH л/мин |
10,84±0,61 |
9,57±0,52 |
11,97±1,03* |
* – Р<0,05 относительно других пород голубей.
В крови половозрелых диких сизых голубей (табл. 4) количество диеновых конъюгатов достоверно больше, чем ДК в крови у почтовых и мясных голубей. Уровень малонового диальдегида оказался выше у кингов, чем у сизарей и почтовых (Р<0,05). Активность СОД у сизарей на 67 % больше, чем у почтовых взрослых голубей (Р<0,05). А активность каталазы у годовалых кингов оказалась выше на 28 %, чем у сизарей, и на 19 % больше, чем у почтовых (Р<0,05). Уровень активности глутатионпероксидазы (ГПО) в крови всех трех исследуемых пород голубей был одинаковым (Р>0,5). Анализируя уровень антиоксидантных витаминов, ПОЛ и АОС в крови голубей трех пород, мы пришли к выводу, что полученные результаты являются показателями стационарной картины перекисного окисления и экзогенных и эндогенных звеньев антиоксидантной защиты в биогеохимических условиях региона Нижней Волги, который характеризуется низким уровнем Se, J и Со в среде и кормах (Воробьев, 2011, 2012) и могут быть использованы в качестве основы для разработки критериев физиологической нормы для голубей.
Таблица 4
Показатели перекисного окисления и эндогенной антиоксидантной защиты в крови годовалых голубей (n=16 каждой породы)
Показатели |
Породы голубей |
||
дикий сизарь |
домашний почтовый |
мясной (кинг) |
|
диеновые конъюгаты, ед. опт. пл/мг липидов |
0,82±0,07* |
0,79±0,09 |
0,57±0,09 |
малоновыйдиальдегид, мкмоль/л |
1,58±0,06 |
1,48±0,09 |
1,62±0,07* |
супероксиддисмутаза, ед/мин |
20,1±3,48 |
12,3±4,13 |
22,05±2,19* |
каталаза, мкмоль Н2О2 л/мин |
20,8±1,39 |
22,3±2,37 |
26,7±2,46* |
глутатионпероксидаза, мкмольG-SH л/мин |
7,52±0,08 |
8,14±0,11 |
6,45±0,09 |
общие липиды, г/л |
7,62±0,03 |
6,98±0,04 |
6,77±0,08 |
* – Р<0,05 относительно других пород голубей.
Между секрецией адренокортикотропного гормона гипофиза и выделением гормона надпочечников кортизола существует связь. В стрессорных ситуациях в гипоталамусе усиленно секретируется релизинг – гормон (кортикотропин – релизинг – фактор), активно влияющий на биосинтез АКТГ. Адренокортикотропный гормон гипофиза вызывает активную секрецию кортизола, ровно как и других активных веществ, выделяемых в кровь надпочечниками.
Гормоны щитовидной железы у голубей практически не исследованы, хотя они активно воздействуют на функциональную активность органов и тканей, что необходимо для роста и развития птиц. Гормоны увеличивают сердечный выброс крови и нервную возбудимость. При этом увеличивается потребление кислорода тканями. Тироксин (Т4) регулирует механизмы терморегуляции птиц, центра дыхательной деятельности, стимулирует эмбриогенез и эритропоэз, увеличивает активность ряда гормонов и ферментов (Дедов, 2005).
Учитывая вышеизложенное, мы исследовали показатели гормональной активности гипофиза, щитовидной железы и надпочечников самок и самцов голубей.
Таблица 5
Характеристика эндокринной системы диких и домашних голубей в условиях Астраханской области
Наи-мено-вание гор-монов |
Дикие сизари |
Домашние голуби |
||||
самки (n=8) |
самцы (n=8) |
почтовые |
кинги |
|||
самки (n=8) |
самцы (n=8) |
самки (n=8) |
самцы (n=8) |
|||
АКТГ, нг/мл |
25,7±1,14* |
26,7±1,54* |
24,6±1,62 |
25,2±1,38 |
24,2±0,97 |
24,3±0,84 |
тиро-ксин (Т4), нмоль/л |
16,97±0,92* |
16,98±1,04* |
15,83±0,82 |
15,89±1,75 |
14,99±0,84 |
15,01±1,05 |
корти-зол, нмоль/л |
28,9±1,06* |
28,8±1,11* |
27,2±1,03 |
27,2±0,98 |
26,72±1,16 |
27,04±1,03 |
* – Р<0,05 относительно других пород голубей.
Сопоставляя уровень содержания гормонов в крови (табл. 5) у свободноживущих сизых голубей и двух пород домашних птиц, мы выяснили, что у самок и самцов диких сизарей уровень АКТГ определенно выше, чем у почтовых и мясных голубей. Тироксина в крови сизарей было также больше, чем у голубей почтовых и мясной пород. Аналогичная тенденция обнаружена при анализе уровня кортизола в крови самок и самцов голубей всех трех изучаемых пород (Р<0,05).
Отсутствие комплексных аналогичных данных у других авторов не позволяет нам более детально сравнить наши результаты по исследованию содержания в крови важнейших для организма гормонов с аналогичными результатами. Однако полученные нами результаты анализов ПОЛ, АОС и активности гормонов позволяют разработать в дальнейшем критерии оценки физиологического состояния голубей, которых на сегодняшний день крайне недостает физиологам и ветеринарным врачам, что затрудняет проведение лечебно-профилактических ветеринарных мероприятий при коррекции, особенно эндемических болезней голубей и других видов синантропных птиц.
Выводы
- Содержание антиоксидантных витаминов А (8,39±0,47 мг %) и Е (2,81±2,52 мкг/мл) в крови голубей в первые месяцы жизни выше, чем у взрослых особей – соответственно: 2,16±0,09 и 9,73±1,15 мкг/мл (Р<0,05). У кингов количество витаминов А и Е в крови больше, чем у сизых и почтовых голубей (Р<0,05).
- В различные периоды постнатального онтогенеза стационарный уровень СРО и АОС голубей был неодинаков. Уровень ДК и МДА в сыворотке крови 2-х месячных голубей ниже, чем у одномесячных. В годовалом возрасте количество ДК (0,82±0,07 ед. опт. пл/мг липидов) больше у сизых голубей, чем у почтовых на 3,7 % и кингов на 38,5 % (Р<0,05), а МДА у кингов больше, чем у почтовых на 6,8 % (Р<0,05). Активность СОД в месячном возрасте у почтовых голубей на 14 % и мясных на 21,8 % выше, чем у сизых (Р<0,05). У 2-х месячных и взрослых почтовых голубей и кингов СОД и каталаза активнее, чем у сизарей – соответственно: на 9,5 % и 14,8 % (Р<0,05). Активность ГПО у кинга в возрасте 1 и 2 месяца выше (Р<0,05), чем у почтовых, на 24,9 %, и сизых голубей, на 10,4 %, а у годовалых птиц изучаемых пород уровень ГПО был практически одинаковым (Р>0,5).
- У самок и самцов сизых голубей уровень в крови АКТГ, тироксина (Т4) и кортизола выше на 4,3–7,3 %, чем у почтовых и мясных кингов (Р<0,05). Различий в содержании гормонов в крови самцов и самок голубей не обнаружено (Р>0,5).