Цель работы – количественная оценка морфологических изменений дермы в острый период развития атопического дерматита и в период ремиссии.
Материал и методы исследования
Обследованы 22 больных обоих полов в возрасте18–45 лет в остром периоде и 10 в периоде ремиссии болезни, а также 10 здоровых добровольцев 17–24 лет (контроль). Диагноз атопического дерматита устанавливался на основании данных анамнеза, клинической картины, кожного аллерготестирования. Принимались во внимание критерии национальных и международных согласительных документов по данной патологии [1, 3]. При обследовании соблюдались принципы информированного согласия пациентов в соответствии с Хельсинской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» и «Правилами клинической практики в РФ от 19.06.2003 г. № 266». В период обострения атопического дерматита биоптат кожи передней поверхности предплечья иссекался у больных из очага воспалительного процесса (1-я группа), а также с внешне не измененного участка кожи (2-я группа). В период ремиссии основного заболевания забор материала производился с очага лихенизации (3-я группа больных) и внешне не измененного участка кожи (4-я группа). Процедура иссечения биопсийного материала проводилась в асептических условиях с применением местной анестезии 2%-ным раствором новокаина. Материал фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, обезвоживали в спиртах, заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, гематоксилином и пикрофуксином по ван Гизону, толуидиновым синим по Хессу и Холландеру. В окулярной рамке с известной площадью в 10 случайных полях зрения при увеличении светового микроскопа в 2015 раз (объектив ×90, окуляр ×15, дополнительное увеличение ×1,5) в каждом срезе определяли число тучных клеток, фибробластов, макрофагов и лимфоцитов в пересчете на 1 мм2. Оценку выраженности фиброза проводили при увеличении микроскопа в 600 раз (объектив ×40, окуляр ×10, дополнительное увеличение ×1,5), измеряли в баллах: 1 – нет фиброза; 2 – слабо выраженный фиброз вокруг отдельных сосудов; 3 – умеренно выраженный периваскулярный фиброз; 4 – сильно выраженные фиброзные изменения. Статистическая обработка данных осуществлялась с помощью пакета программ «SPSS». Для представления количественных данных использовались описательные статистики: Me (медиана), Q1 (1-й квартиль 25%) и Q3 (3-й квартиль 75%). Для всех имеющихся выборок данных применялись непараметрические критерии Краскал—Уолиса и Манна—Уитни. Различие двух сравниваемых величин считалось значимым с надежностью Р>0,95, если вероятность их тождества оказывалась меньше 5%.
Результаты исследования и их обсуждение
В остром периоде атопического дерматита в биоптатах больных в межклеточном веществе рыхлой соединительной ткани сосочкового слоя и плотной неоформленной соединительной ткани сетчатого слоя дермы наблюдаются явления отека, набухания, гомогенизации и дезагрегации части коллагеновых волокон, умеренно или слабо выраженные фиброзные изменения вблизи кровеносных сосудов. Возрастает число веретенообразных фибробластов с выростами эктоплазмы неправильной формы, ядрышками и мелкодисперсным хроматином в овоидном ядре, окруженном ободком базофильной эндоплазмы (рис. 1).
Рис. 1. Умеренно выраженный периваскулярный отек и фиброз в сетчатом слое дермы в очаге воспаления в остром периоде болезни: КП – коллагеновые пучки с явлениями гомогенизации, утолщения и дезагрегации фибрилл, Фб – фибробласты. Окраска гематоксилином и пикрофуксином по ван Гизону. Ув. 450
Отмечается инфильтрация соединительной ткани лимфоцитами и макрофагами. В лимфоцитарных инфильтратах близи кровеносных сосудов обнаруживаются плазмоциты, моноциты, дегранулирующие тучные клетки (рис. 2).
Рис. 2. Периваскулярный отек и клеточная инфильтрация в сосочковом слое дермы в участке внешне не измененной кожи в острый период атопического дерматита: Л – лимфоциты, М – моноциты, Пц – плазмоцит, ТК – тучная клетка с метахроматическими гранулами в цитоплазме и дегранулирующая тучная клетка, Фб – фибробласты, Эп – эпидермис. Окраска толуидиновым синим по Хессу и Холландеру. Ув. 450
В период ремиссии заболевания отек межклеточного вещества соединительной ткани в дерме выражен незначительно, снижается частота проявления умеренно или слабо выраженных вокруг отдельных кровеносных сосудов фиброзных изменений.
Количественный анализ распределения клеток в сосочковом и сетчатом слоях дермы при атопическом дерматите в сравнении со здоровыми лицами свидетельствует, что в остром периоде численная плотность фибробластов в очаге воспаления превышает аналогичный показатель здоровых лиц в 1,4 раза, во внешне не измененных участках передней поверхности предплечья – в 1,6 раза. Количество лимфоцитов в остром периоде во внешне не измененных участках увеличивается в 1,6 раза, макрофагов – в 1,8 раза.
В периоде ремиссии атопического дерматита значимых изменений численной плотности фибробластов не наблюдается, но среди них возрастает доля стареющих клеток. Численная плотность лимфоцитов в очаге лихенизации превышает показатель здоровых лиц в 3,5 раза, во внешне не измененных участках – в 3,4 раза, макрофагов соответственно в 2,6 и 2,4 раза больше, чем в контроле (табл. 1).
Таблица 1
Численная плотность клеток в дерме передней поверхности предплечья у здоровых лиц и больных атопическим дерматитом (Ме (Q1–Q3))
|
Исследуемые группы |
Фибробласты |
Лимфоциты |
Макрофаги |
Тучные клетки |
|
контроль, n=10 |
98 (87,5–120) |
26 (17,5–32,5) |
16 (5–21) |
21 (12–26) |
|
1-я группа, n=5 |
142* (123–210) |
43 (27–128) |
22 (15–60) |
28 (26–37) |
|
2-я группа, n=10 |
152* (121–162) |
41* (32,5–135) |
29* (21–53) |
21 (17–25) |
|
3-я группа, n=5 |
110 (85–140) |
91* (70–270) |
42* (35–70) |
24 (19–27) |
|
4-я группа, n=5 |
113 (102–129) |
88* (41,5–127) |
39* (31–66) |
20 (16–21) |
Примечание. Здесь и далее * – значимые различия с контролем (Р<0,05).
Количественный анализ фиброзных изменений дермы при атопическом дерматите в сравнении со здоровыми лицами показывает, что в остром периоде в очаге воспаления они проявляются в 20% случаев, что значимо не отличается от контроля. Во внешне не измененных участках кожи фиброзные изменения дермы в 27,3% случаев выражены умеренно и у такого же числа больных выражены слабо. В период ремиссии заболевания в очаге лихенизации они с одинаковой частотой выражены умеренно или слабо, составляя в общей сложности 36,4% случаев. Во внешне не измененных участках в период ремиссии заболевания фиброзные изменения выражены слабо и проявляются в 13,6% случаев (табл. 2).
Таблица 2
Наличие фиброзных изменений в дермы у больных атопическим дерматитом
в сравнении со здоровыми лицами (Ме (Q1–Q3))
|
Фиброзные изменения |
Исследуемые группы |
||||
|
контроль, n=10 |
1-я группа, n=10 |
2-я группа n=22 |
3-я группа n=22 |
4-я группа n=22 |
|
|
Не выражены, n |
10 |
8 |
10 |
14 |
19 |
|
Проявляются, n |
- |
2 |
12 * |
8* |
3* |
Результаты проведенного исследования инфильтрации соединительной ткани дермы и фиброзных изменений согласовываются с данными литературы [4, 5, 6, 7]. Ремоделирование представляет собой комплексный процесс, в котором принимают участие различные клетки. Тучные клетки, секретируя биогенные амины с запустеванием гранул в цитоплазме и выбрасывая их в составе метахроматических гранул в межклеточное вещество соединительной ткани, стимулируют расширение просвета кровеносных сосудов и повышение проницаемости их стенки, развитие локального отека, набухание, гомогенизацию и дезагрегацию коллагеновых фибрилл. Лимфоциты, выделяющие цитокины, обусловливают атопический характер процесса, стимулируют фибробласты, которые в остром периоде атопического дерматита включаются в процесс развития регенераторных проявлений, что приводит к формированию в дерме периваскулярных фиброзных изменений. Повышение в дерме содержания макрофагов является отражением стимуляции иммунного ответа на аллергены при эпикутанной сенсиблизации. Лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация и фиброз, регистрируемые в период ремиссии, являются типичными морфологическими признаками ремоделирования кожи при атипическом дерматите.
Заключение
Таким образом, количественная оценка морфологических изменений сосочкового и сетчатого слоев дермы при атопическом дерматите в остром периоде развития болезни проявляется на участках внешне не измененной кожи увеличением численной плотности фибробластов, лимфоцитов и макрофагов, в очаге воспаления – умеренным или слабо выраженным периваскулярным отеком соединительной ткани и фиброзными изменениями. В периоде ремиссии в очаге лихенизации отмечается высокая численная плотность лимфоцитов и макрофагов, слабо выраженный отек и фиброз соединительной ткани дермы, возрастает содержание стареющих форм фибробластов. Выявленные морфологические особенности ремоделирования кожи могут служить основанием для использования индивидуальных подходов к реабилитации болезни.
Рецензенты:Кологривова Е.Н., д.м.н., профессор кафедры иммунологии и аллергологии ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Томск;
Потапов А.В., д.м.н., профессор кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Томск.