Дубильные вещества (танниды) – группа сложных по структуре растительных веществ полифенолов [10]. В основном различают два больших класса дубильных веществ. К первому классу – гидролизуемым дубильным веществам – относятся гликозиды галловой кислоты (галлотанины) и гликозиды эллаговой кислоты (эллаготанины). Второй класс – конденсированные дубильные вещества (так называемые проантоцианидины) – представлен полимерами флаван-3-ол мономерных субъединиц, таких как (+)-катехин, (-)-эпикатехин и их галлаты. В растениях гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества встречаются одновременно, с преобладанием одного класса. На накопление и состав дубильных веществ могут влиять возраст и фаза развития растения, климат, почвенные условия, высотный фактор, освещение, влажность, время сбора и способы сушки и т.п. [1].
В медицинской практике долгое время считалось, что основным фармакологическим эффектом всех дубильных веществ является проявление вяжущих свойств, в последнее время было доказано наличие антиоксидантной, ангиопротекторной, противоопухолевой и других видов активности, которая зависит от структурных особенностей молекул таннидов [10].
В связи с этим поиск новых представителей флоры, в составе биологически активных веществ которых дубильные вещества являются доминирующими компонентами, является актуальной задачей.
Aconogonon (Polygonum) divaricatum L (таран растопыренный, горец растопыренный) – многолетние травянистое растение, входит в состав семейства Polygonaceae, рода Aconongonon (Meissn.) Reichend. В естественных условиях произрастает в Забайкалье [6, 9].
Известно, что компонентный состав группы биологически активных веществ горца растопыренного представлен фенолкарбоновыми кислотами, флавоноидами, антоцианами, катехинами, сапонинами, витаминами [4]. В настоящее время проведено изучение компонентного состава первичных метаболитов и определено содержание витамина К в растении [2, 5].
Согласно литературным данным, содержание дубильных веществ в подземной части горца растопыренного составляет от 4,2 до 26 %, при этом максимальное содержание дубильных веществ наблюдается на 3–4-ый год во время бутонизации и цветения [7]. Следовательно, горец растопыренный можно рассматривать в качестве перспективного источника дубильных веществ и рекомендовать заготовку сырья от взрослых растений, начиная с четвертого года вегетации. Данные о количественном содержании и компонентом соотношении групп дубильных веществ по органам растения нуждаются в уточнении.
Целью данного исследования является количественное определение суммы дубильных, конденсированных и гидролизуемых веществ в надземных и подземных органах Aconogonon (Polygonum) divaricatum L.
Материалы и методы исследования
Объектами нашего исследования послужили подземная и надземная части горца растопыренного, собранного в период 2013–2015 гг. Сырье подвергалось сушке воздушно-теневым способом. Анализ содержания дубильных веществ в сырье проводили в период с июня по сентябрь 2015 г.
Количественное содержание дубильных веществ в растительном объекте определяли фармакопейной методикой перманганатометрического титрования [3], компонентный состав групп дубильных веществ определяли модифицированной фармакопейной методикой, как указано в работе [8].
Обработку результатов выполняли с использованием программы STATISTICA 8.0. Для описания полученных результатов для каждого объекта приводили значение среднего результата (Xср) трех измерений (n=3), доверительного интервала среднего (Dxср).
Результаты и их обсуждение
Предварительно, по результату реакции с раствором железа хлорида (III), было установлено, что в растении преобладает группа конденсируемых дубильных веществ.
Для определения количественного содержания суммы дубильных веществ высушенное сырье измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с размером ячеек 3х3 мм. Далее, 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу, соединяли с обратным холодильником и проводили экстракцию горячей водой (соотношение сырье:экстрагент - 2:250) на электрической плитке. Полученное извлечение охлаждали, процеживали и титровали по методике из ГФ XI издания: отбирали 25 мл из полученного извлечения, добавляли 500 мл воды и 25 мл раствора индигосульфокислоты. Полученный раствор титровали 0,02 моль/л раствором перманганата калия до появления золотисто-желтого окрашивания.
Параллельно проводили контрольный опыт. В коническую колбу вместимостью 1000 мл помещали 525 мл воды очищенной и 25 мл раствора индигосульфокислоты, титровали 0,02 моль/л раствором перманганата калия до появления золотисто-желтого окрашивания.
Процентное содержание дубильных веществ определяли по формуле:
Х %= 
где V – объем 0,02 моль/л КМnО4, пошедшего на титрование, мл; V1 – объем 0,02 моль/л КМnО4, пошедшего на контрольный опыт, мл; К – коэффициент пересчета: для конденсированных дубильных веществ – 0,00582; m – масса навески сырья, г; W – влажность сырья, %.
На основании полученных расчетов нами была определена сумма всех дубильных веществ в сырье.
Содержание конденсированных дубильных веществ устанавливали следующим образом: к 25,0 мл водного извлечения добавляли 0,5 мл концентрированной хлористоводородной кислоты, оставляли на 20 часов. Осадок отделяли центрифугированием и тировали фильтрат 0,02 моль/л раствором калия перманганата. Разность между титрованием водного извлечения до и после удаления свободных полифенолов, фенолокислот соответствует содержанию конденсированных дубильных веществ. Гидролизуемые танниды определяли по разности суммы дубильных веществ и конденсированных дубильных веществ [8].
Результаты количественного определения дубильных веществ приведены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты количественного определения дубильных веществ в разных органах Aconogonon (Polygonum) divaricatum L. методом перманганатометрии
|
Часть растения |
год сбора* |
Содержание дубильных веществ, % (Xср±∆xср, n=3) |
||
|
сумма |
конденсир. |
гидролизуемых |
||
|
Подземная часть
|
2015 |
18,62±0,31 |
10,12±0,41 |
8,50±0,34 |
|
2014 |
14,57±0,50 |
9,43±0,37 |
5,14±0,18 |
|
|
2013 |
8,89±0,23 |
6,22±0,28 |
2,67±0,11 |
|
|
Стебли |
2015 |
2,72±0,09 |
1,93±0,06 |
0,79±0,01 |
|
2014 |
2,53±0,08 |
1,80±0,03 |
0,73±0,01 |
|
|
2013 |
2,42±0,10 |
1,71±0,03 |
0,71±0,02 |
|
|
Листья |
2015 |
11,46±0,46 |
8,35±0,31 |
3,11±0,12 |
|
2014 |
10,17±0,46 |
6,93±0,22 |
3,32±0,10 |
|
|
2013 |
9,38±0,32 |
5,31±0,20 |
4,07±0,14 |
|
|
Цветки |
2015 |
9,46±0,29 |
6,31±0,17 |
3,15±0,11 |
|
2014 |
9,01±0,25 |
5,98±0,27 |
3,03±0,09 |
|
|
2013 |
7,15±0,26 |
4,16±0,17 |
2,99±0,08 |
|
|
Плоды |
2015 |
4,75±0,21 |
2,69±0,11 |
2,06±0,02 |
|
2014 |
4,52±0,19 |
2,40±0,09 |
2,12±0,03 |
|
|
2013 |
4,36±0,18 |
2,19±0,09 |
2,17±0,08 |
|
*определение содержания дубильных веществ проводили в 2015 г.
Заключение
В результате проведенных исследований установлено, что в подземной и надземной частях Aconogonon (Polygonum) divaricatum L. присутствуют и конденсированные, и гидролизуемые дубильные вещества. Конденсированная группа составляет наибольшую часть из суммы дубильных веществ горца растопыренного. Наибольшее содержание суммы дубильных веществ установлено в подземной части растения, наименьшее – в стеблях. Динамика содержания суммы дубильных веществ показывает, что уменьшение их количества происходит в разных органах растения неравномерно и составляет 52, 9, 18, 24 и 8 процентов в подземной части, стеблях, листьях, цветках и плодах соответственно.
Следует отметить, что определение количественного содержания дубильных веществ перманганатометрическим титрованием может давать завышенный результат, так как перманганат калия взаимодействует не только с дубильными веществами, но и с другими соединениями, присутствующими в извлечении [1]. Поэтому для более точной оценки содержания дубильных веществ в подземной и надземной частях Aconogonon (Polygonum) divaricatum L. необходимо использовать более специфичные методы определения – гравиметрические, спектрофотометрические и хроматографические, используя результаты, полученные по фармакопейной методике, в качестве первичных данных о сумме окисляемых веществ в составе растения.
Рецензенты:
Гришин А.В., д.фарм.н., профессор, ректор Сибирской фармацевтической академии, г. Омск;
Пеньевская Н.А., д.м.н., профессор кафедры эпидемиологии ГБОУ ВПО Омского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Омск.