Среди заболеваний, передающихся половым путем, одним из самых распространенных является папилломавирусная инфекция (ПВИ). Актуальность проблемы обусловлена тремя основными моментами. Во-первых, высокой частотой распространения вируса папилломы человека (ВПЧ) – число инфицированных в мире за последнее десятилетие увеличилось более чем в 10 раз [1, 5, 10]. Во-вторых, ПВИ сложна и дорога для диагностики и лечения – более 15 % женщин, не имеющих клинических симптомов ПВИ, являются носительницами ВПЧ и источниками передачи инфекции [3, 8, 9]. Кроме того, определенные трудности вызывает диагностика латентной формы инфекций, так как в данном случае заболевание не выявляется клинически и наличие вируса в инфицированной ткани не вызывает явных морфологических изменений [1, 6, 7]. В-третьих, ВПЧ рассматривается как этиологический фактор рака шейки матки [2, 4, 10]. Рак шейки матки стоит на втором месте среди злокачественных новообразований в мире у женщин после рака молочной железы [1]. В европейских странах рак шейки матки занимает пятое место в списке злокачественных опухолей, несмотря на наличие эффективных скрининговых программ [4, 7].
В патогенезе ПВИ большую роль играют иммунные механизмы, как на системном, так и на локальном уровне, которые позволяют вызывать активацию транскрипции ДНК ВПЧ, его интеграцию в клетку и последующей активации неопластических процессов. Кроме того, немаловажное значение имеет состояние микробиоценоза цервиковагинальной области. Учитывая клиническое течение ПВИ и различные степени поражения, особую значимость приобретает определение состояния адаптационных систем организма, особенно на ранних стадиях ВПЧ-поражения шейки матки, что позволит в дальнейшем разработать индивидуальную тактику менеджмента данного контингента больных.
Материалы и методы
У всех пациенток с цервикальным интраэпителиальным поражением легкой степени, включенных в исследование, проведена сравнительная оценка содержания ДНК основных цитокинов периферической крови. Сравнивали образцы ДНК, полученные от 120 женщин с LSIL, с группой клинико-лабораторного контроля (30 условно здоровых женщин). Пациенткам провели типирование следующих генетических полиморфизмов, ассоциированных с системой цитокинов - IL-1α-889С>Т, IL-1β3953С>Т, IL-1Rl:Pst11970, IL-1RN:11100msp1, IL-2:166G>T(Leu38Leu), IL-2-330G>T, IL-4-589С>Т, IL-4-1098Т>G, IL-4-33С>Т, IL-4R+1902А>G(Gln576Arg), IL-6-174G>C, IL-10-1082G>А, IL-10-592А>С, IL-10-819С>Т, IL-12β-1188С>А, IL-18-137G>C, IL-18-607С>А, IL-18-656А>С, TNF-308G>A.
Результаты и обсуждение
При анализе полученных данных выявлено, что у женщин с LSIL нет существенных различий по сравнению с группой клинико-лабораторного контроля в частоте встречаемости аллелей и генотипов следующих генов: IL-12β в локусе -1188(С>А), IL-10 в области -592А>С и в двух позициях гена СЭФР-А 936С>Т и -634G>C).Кроме того, определение полиморфизмов генов цитокинов, относящихся к членам семейства IL-1, не выявило их клинической значимости в отношении патологии шейки матки (рис. 1). При этом выявлены различия в полиморфизмах генов, кодирующих белки провоспалительных цитокинов - IL-6 и TNFα, в группах женщин с LSIL по сравнению с контрольной группой (рис. 2).
Отмечены характерные для пациенток с LSIL полиморфизмы генов провоспалительных цитокинов: полиморфной аллели С гена IL-6 (гаплотипы С/С и G/C) и гомозиготный вариант гена TNFα (G/G), была изучена взаимосвязь между ВПЧ-поражением шейки матки и наличием в генотипе пациенток сочетания этих гаплотипов. Обнаружено, что сочетание гаплотипов С/С и G/C гена IL-6 и G/G гена TNFα встречалось у 71,1 % пациенток с LSIL.
Рис.1. Аллели генов цитокинов IL-1β-31Т>С IL-12β-1188С>A в исследуемых группах
Рис.2. Аллели генов цитокинов IL-6-174G>C и TNF-308G>A в исследуемых группах
В ходе данного генетического скрининга не было обнаружено взаимосвязи между полиморфизмами генов противовоспалительных цитокинов IL-12β, IL-10, СЭФР-А, цитокинов, относящихся к членам семейства IL-1 и наличием поражения шейки матки. В то же время специфические закономерности выявлены при изучении точечных замен нуклеотидов в промоторной зоне генов IL-6 и TNFα. Определено, что обнаружение у пациенток основной группы аллели С гена IL-6 сопровождается двукратным повышением частоты ВПЧ-патологии шейки матки, тогда как гомозиготный генотип G/G был типичен для пациенток контрольной группы.
В контрольной группе замена нуклеотидов G>A в позиции -308 промотора гена TNFα выявлялась более часто. В то время как при LSIL в 94,9% были обнаружены гомозиготы по аллели G. Также, характерно дляLSIL сочетание в генотипе полиморфной аллели С гена IL-6 и генотипа G/G гена TNFα (шансы ВПЧ-поражения увеличиваются в 6,9 раза) (рис. 2).
В зависимости от преобладания генома про- или противовоспалительных цитокинов в исследуемых клинических группах мы попытались выделить 3 генотипа: сбалансированный, провоспалительный и противовоспалительный.
Рис.3. Распределение генотипов в исследуемых группах
При этом нами выявлено, что в группе женщин с LSIL преобладают противовоспалительные генотипы (71,2 %), в группе клинико-лабораторного контроля намного чаще встречался сбалансированный генотип (63,3 %) (рис. 3). Количество сбалансированных генотипов статистически не отличалось во всех группах.
Был проведен генетический скрининг в исследуемых группах в зависимости от состояния микробиоценоза влагалища (рис. 4). Анализ частоты выявления полиморфизмов в системе гена IL-1 показал, что преобладающим генотипом полиморфизма IL-1α-889С>Т при абсолютном и условном нормоценозе был вариант СС - 61,3 % и 69,2 % соответственно, при дисбиотических состояниях влагалища данный вариант гена встречался. При этом у женщин с абсолютным нормоценозом выявляли только генотип СТ, а генотип ТТ не встречался (при условном нормоценозе и дисбиозе генотип ТТ встречался в 11,4 %). Генотипы СТ или ТТ гена IL-1β3953С>Т чаще выявляли у женщин с абсолютным нормоценозом, таким образом, наличие этого полиморфизма может расцениваться как благоприятный вариант генотипа в плане микробиоценоза. Генотип СТ гена IL-1Rl:Pst11970 в 2 раза чаще выявляли у женщин с абсолютным нормоценозом (р=0,049), в то время как генотип СС в два раза чаще имел место у женщин с условным нормоценозом и дисбиозом.
Примечание (здесь и далее):
* генотип ни - гомозигота по «дикому» (низкопродуцирующему) аллелю
** генотип пв - гетерозигота
*** генотип вв - гомозигота по полиморфному (высокопродуцирующему) аллелю
Рис.4. Частота выявления полиморфизмов в гене IL-1 у пациенток с нормоценозом и дисбиозом
Видимо именно носительство аллеля Т чаще присутствует у пациенток с абсолютным нормоценозом. Носительство полиморфизма IL-1RN11100msp1 ассоциировано с наличием условного нормоценоза, как в гетерозиготном, так и гомозиготном полиморфном варианте. При абсолютном нормоценозе не выявили ни одного случая носительство полиморфной гомозиготы, частота же выявления «дикого» гомозиготного генотипа у женщин с условным нормоценозом была в 2 раза ниже, при дисбиозе он вовсе не обнаруживался. Таким образом, полиморфизмы IL-1α-889С>Т и IL-1RN11100msp1 в гене IL-1 статистически значимо чаще выявляли у пациенток с условным нормоценозом и дисбиозом, а полиморфизмы IL-1β3953С>Т и IL-1RlPst11970, напротив, чаще встречалась при абсолютном нормоценозе.
При оценке частоты обнаружения полиморфных аллелей гена IL-4 получены следующие данные (рис. 5). Полиморфизмы IL-4-589С>Т, IL-4-1098Т>G и IL-4R+1902А>G(Gln576Arg) в гене IL-4 с равной частотой выявлялись у пациенток с нормоценозом (абсолютным и условным) и дисбиозом. Различия были выявлены в частоте выявления аллеля Т гена IL-4-33С>Т. Его во всех вариантах чаще выявляли при абсолютном нормоценозе (аллель Т выявлен у 79,7 %), в то время как у 42,8 % женщин с условным нормоценозом она отсутствовала. В связи с вышеперечисленным можно думать, что носительство данных полиморфизмов оказывает протективный эффект на состояние микробиоценоза влагалища.
Рис. 5. Частота выявления полиморфизмов в гене IL-4 у пациенток с нормоценозом и дисбиозом
Частота выявления полиморфизмов генов IL-2, IL-6, IL-18 и TNF практически не различалась между группами пациенток с нормоценозом (абсолютным и условным) и дисбиозом влагалища. Генотипы АС и СС гена IL-10-592А>С чаще выявляли при абсолютном нормоценозе влагалища (при условном нормоценозе и дисбиозе чаще присутствовал генотип АА (56,8 %).
Исследование геномных аллелей основных цитокинов позволяет выделить основные полиморфизмы в зависимости от наличия сохраненной нормальной микрофлоры влагалища. У пациенток с абсолютным нормоценозом в основном определялись следующие полиморфизмы: IL-10-592А>С, IL-4-33С>Т, IL-1β3953С>Т, IL-1RlPst11970. У пациенток с условным нормоценозом: IL-1α-889С>Т и IL-1RN11100msp1. При дисбиотических состояниях влагалищной микрофлоры наиболее часто выявлялся полиморфизм аллелей IL-1RN11100msp1, что ассоциировалось, в первую очередь, с анаэробным и смешанным дисбиозом, а также с персистенцией Ureaplasma spp. и Gardnerella vaginalis.
Рецензенты:
Куценко И.И., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой акушерства, гинекологии и перинатологии, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Краснодар;
Карахалис Л.Ю., д.м.н., профессор кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии ФПК и ППС, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Краснодар.