Дегенеративные заболевания сетчатки представляют собой одну из ведущих проблем офтальмологии. Возрастная макулярная дегенерация сетчатки является заболеванием, наиболее часто вызывающим потерю зрения у людей всех стран мира [1, 3]. Основным фактором риска при развитии данного заболевания служит возраст старше 60 лет [8]. В связи с ростом доли населения старшей возрастной группы в экономически развитых странах, проблема дегенеративных изменений сетчатки приобретает все большую актуальность [9]. Помимо основного фактора, существует множество других, опосредующих развитие возрастной макулярной дегенерации, в том числе и действие света видимого спектра [4, 10]. В связи с этим, интерес представляет вопрос модифицирующего влияния света видимого спектра на течение возрастной дегенерации сетчатки. Проблема световых повреждений органа зрения является несомненно актуальной в современном обществе. Показаны эффекты воздействия светового излучения высокой и низкой интенсивности на сетчатку и зрительный нерв интактных крыс [2, 5, 6, 7]. При этом отмечаются деструктивные изменения всех структурных компонентов сетчатки и зрительного нерва. В связи с этим, актуально изучение действие света на развитие и течение возрастной дегенерации сетчатки. Особый интерес представляет собой состояние нейросенсорных клеток при наличии хориоретинальной дистрофии и модифицирующее влияние света низкой интенсивности на течение данной патологии.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Установить характер модифицирующего влияния света низкой интенсивности на деструктивные изменения нейросенсорных клеток сетчатки при хориоретинальной дистрофии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперимент проведен на 20 белых крысах-самцах породы WISTAR. Животные были разделены на 4 группы. Животные из первой группы (n=5) в возрасте 18 мес. не подвергались световому воздействию (при наличии возрастных изменений сетчатки). Вторая группа (n=5) включала в себя животных в аналогичном возрасте, подвергавшихся в течение 7 сут. непрерывному световому воздействию с интенсивностью 200 лк. Третья группа (n=5) состояла из животных в возрасте 3 мес., подвергавшихся воздействию светом с такими же параметрами. В качестве контроля использовались интактные крысы (n=5) в возрасте 3 мес. Всех животных выводили из эксперимента посредством декапитации.
Глазные яблоки после энуклеации фиксировали в нейтральном формалине и заливали в парафин. Готовили отвесные срезы задней стенки глаза толщиной 5-7 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Для изучения ультраструктурных изменений нейросенсорных клеток сетчатки заднюю стенку глаза фиксировали в 2,5% растворе глютаральдегида на кокадилатном буфере (рН=7,4). Материал постфиксировали в 2% растворе четырехокиси осмия и заливали в эпон. На ультратоме готовили полутонкие и ультратонкие срезы. На полутонких срезах, окрашенных толуидиновым синим, производили подсчет нейросенсорных клеток с пикнозом ядра на 1000 фоторецепторов с каждой сетчатки и определяли количество слоев в наружном ядерном слое. Для оценки достоверности различий при сравнении средних величин использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Различия считались статистически значимыми при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
Через 7 суток после воздействия светом интенсивностью 200 лк у крыс обеих возрастных групп отмечались значительные изменения фоторецепторного слоя сетчатки. На светооптическом уровне наблюдалась фрагментация наружных сегментов, что проявлялось появлением мелко- и крупногранулярного компонента в субретинальном пространстве. На электронномикроскопическом уровне отмечались расслоение и фрагментация, а также, вакуольное перерождение мембран наружных сегментов (рис. 1). Со стороны наружной глиальной пограничной мембраны в субретинальное пространство проникало большое количество удлиненных микроворсинок радиальной глии. Внутренние сегменты у обеих групп крыс подвергались изменениям по светлому и темному типам.
Стоит отметить, что у крыс в возрасте 18 мес., без воздействия светом по вышеуказанной схеме, присутствовали изменения фотосенсорного и наружного ядерного слоев, носящие очаговый характер. Фотосенсорный слой в очагах характеризовался расслоением и неравномерным утолщением мембран наружных сегментов. Во внутренних сегментах наблюдалась деструкция митохондрий и вакуолизация цитоплазмы. Количество рядов ядер нейросенсорных клеток составляло 3-5, при контрольных значениях 18-20. Пикноз отмечается в 63,5 ± 1,31% нейронов, что достоверно выше (р<0,05) контрольных значений, составляющих 0,48 ± 0,04% (рис. 2). Вне очагов ядра располагались 8-10 слоев. Количество нейронов с явлениями кариопикноза составило 1,51± 0,09%.
У крыс в возрасте 18 мес. на фоне светового облучения наблюдалось наличие очагов, характеризующихся значительной деструкцией ядер нейросенсорных клеток. В таких очагах количество рядов ядер снижалось до 1-2 и были участки полного выпадения наружного ядерного. Внутренний ядерный слой при этом оказался приближен к пигментному эпителию. Большая часть ядер нейронов подвергались кариопикнозу (83,6 ± 1.48%) и были окружены многослойными глиальными пластинами (рис. 3). Значения этого показателя в контрольной группе животных составили 0,48 ± 0,04%. Вне очагов у крыс данной возрастной группы на фоне светового облучения клетки наружного ядерного слоя располагались в 5-7 рядов и количество нейронов, подвергшихся пикнозу, составило 38,56 ± 0,46%. Эти показатели являются достоверно более высокими (р<0,05) по сравнению с аналогичными в контрольной группе и группе животных, не подвергавшихся световому воздействию.
У крыс в возрасте 3 мес. на фоне аналогичного воздействия не отмечалось наличия очагового характера изменений. Ядра нейросенсорных клеток располагались в 7-8 рядов. Число нейронов с явлениями кариопикноза составило 31,58 ± 1,4%. Это достоверно выше контрольных значений, но ниже аналогичных показателей в группах животных с возрастом 18 мес. как на фоне воздействия низкоинтенсивным светом в течение 7 сут., так и без такового.
|
Рис. 1. Вакуольное перерождение (стрелка) мембран наружных сегментов на фоне воздействия светом низкой интенсивности в течение 7 сут. у крыс в возрасте 18 мес (ПЭ – пигментный эпителий). Ув. 7800.
Рис. 2. Содержание пикноморфных
ядер нейросенсорных клеток наружного ядерного слоя сетчатки при воздействии
светом низкой интенсивности на фоне хориоретинальной дистрофии (%). Достоверные
различия (р<0,05) обозначены: * - при сравнении с контрольной группой, # - при
сравнении с группой животных в возрасте 3 мес. после светового воздействия, + -
при сравнении с группой животных в возрасте 18 мес. без воздействия светом.
|
|
|
Рис. 3. Пикноморфные ядра (стрелки) нейросенсорных клеток (НК), окруженные многослойными глиальными пластинами (ГП), после воздействия светом низкой интенсивности в течение 7 сут. у крыс в возрасте 18 мес. Ув. 4200.
ВЫВОДЫ
Таким образом, длительное воздействие видимого света низкой интенсивности увеличивает выраженность возрастной хориоретинальной дистрофии. Это проявляется повышением деструкции фотосенсорного слоя сетчатки и увеличением количества нейросенсорных клеток с явлениями кариопикноза.
Рецензенты:Жданкина А.А., д.м.н., ассистент кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздрава России, г. Томск;
Мустафина Л.Р., д.м.н., профессор кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздрава России, г. Томск.