Объектом нашего изучения служит хорошо известное и распространенное лекарственное растение-крапива двудомная, листья которой содержат богатый комплекс липофильных и водорастворимых соединений[6].
Конечной целью наших исследований является разработка состава и технологии геля на основе двух фитокомплексов из листьев крапивы двудомной. Максимально очищенный хлорофилл представляет липофильную фазу растения, а сок из свежесобранных листьев крапивы- комплекс водорастворимых веществ[2].
В процессе реализации поставленной цели первостепенная задача исследований состояла в определении оптимальной концентрации указанных фитокомплексов крапивы двудомной в составе геля.
Учитывая результаты предварительного изучения антимикробной активности растения, нами был использован в ходе эксперимента микробиологический метод.
Степень высвобождения фитокомплексов листьев крапивы исследовали способом « колодцев», основанным на оценке угнетения роста тест-культур путем измерения диаметра зон задержки роста микроорганизмов вокруг «колодцев», включая их диаметр. Тест -культурами служили Staphylococcus aureus (209) и Bacillus subtilis-42.
Были приготовлены 2 серии гелей, отличающихся концентрацией максимально очищенного хлорофилла и сока крапивы. В качестве модельной основы для них выбрана композиция следующего состава: ПЭО-400-50,0; ПЭО-1500-20,0; воды очищенной до 100,0.
На поверхность агара в чашках Петри наносили посев сплошным газоном стандартных взвесей используемых тест-культур. Стерильным сверлом диаметром 6 мм делали лунки на одинаковом расстоянии друг от друга, в которые помещали образцы гелей массой 0,5 г. Все чашки Петри оставляли в термостате (370С) на 18-20 часов строго горизонтально для получения круглых зон угнетения роста микрофлоры[1].
Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Результаты изучения влияния концентрации максимально - очищенного хлорофилла крапивы на антимикробную активность
|
Концентрация максимально очищенного хлорофилла крапивы, % |
Диаметр зон задержки роста тест-культур, мм |
|
|
Staphylococcus aureus(209) |
Bacillus subtilis-42 |
|
|
1 |
13 |
18 |
|
2 |
17 |
23 |
|
3 |
17 |
23 |
|
4 |
17 |
23 |
|
5 |
17 |
23 |
Таблица 2
Результаты изучения влияния концентрации сока крапивы на антимикробную активность
|
Концентрация сока крапивы, % |
Диаметр зон задержки роста тест-культур, мм |
|
|
Staphylococcus aureus(209) |
Bacillus subtilis-42 |
|
|
1 |
7 |
10 |
|
2 |
7 |
10 |
|
3 |
7 |
11 |
|
4 |
8 |
11 |
|
5 |
9 |
12 |
|
6 |
10 |
13 |
|
7 |
10 |
13 |
|
8 |
11 |
15 |
|
9 |
12 |
17 |
|
10 |
14 |
20 |
|
11 |
14 |
20 |
|
12 |
14 |
20 |
Из полученных данных можно заключить, что оптимальная концентрация максимально очищенного хлорофилла в составе геля составляет 2 %, а сока крапивы -10%.
При проведении последующих технологических исследований образцы гелей должны содержать фитокомплексы крапивы двудомной в концентрациях, установленных микробиологическим методом[3,5].
Для подтверждения полученных результатов нами были проведены биофармацевтические исследования [4]. Биофармацевтическую оценку гелей по степени высвобождения максимально очищенного хлорофилла проводили по методике, в которой в качестве модельной среды, характеризующей липофильно-гидрофильный баланс структур организма, применяли систему, состоящую из равных частей эмульсий прямого и обратного типа. Эмульсия №1 имела следующий состав: вазелина- 87 частей, эмульгаторы Т2-3 части, воды очищенной- 10 частей. Эмульсия №2 состояла из 85 частей вазелина, 5 частей желатозы, 10 частей воды очищенной. Готовую модельную среду вносили в конические пробирки Вассермана до верхнего деления. На поверхность модельной среды помещали равные навески различных образцов гелей, отличающихся концентрацией максимально очищенного хлорофилла. Изучение процесса высвобождения хлорофилла проводили в течение 72 часов, в термостате при температуре 37+- 0,5 С. По величине окрашенной хлорофиллом зоны модельной среды судили о степени высвобождения его из гелей с различной концентрацией фитокомплекса. Результаты исследований представлены в таблице 3.
Таблица 3
Результаты изучения влияния концентрации максимально очищенного хлорофилла на степень высвобождения гелей
|
Концентрация максимально очищенного хлорофилла, % |
Величина окрашенных зон, мм |
|||
|
18 часов |
36 часов |
54 часа |
72 часа |
|
|
1 |
4 |
9 |
12 |
16 |
|
2 |
7 |
12 |
14 |
21 |
|
3 |
7 |
12 |
14 |
21 |
|
4 |
7 |
12 |
14 |
21 |
|
5 |
7 |
12 |
15 |
21 |
Из полученных результатов следует, что оптимальная концентрация максимально очищенного хлорофилла в составе геля составляет 2%.
Степень высвобождения биологически активных веществ водорастворимых веществ сока крапивы из гелей изучали методом диффузии в желатиновый гель в опытах «in vitro». В приготовленный 5% желатиновый гель вводили индикатор на дубильные вещества- хлорид железа (III). Гель разливали в чашки Петри и после его формирования вырезали отверстия диаметром 6мм, в которые вносили навески образцов гелей по 1,0 г. Концентрация сока крапивы в исследуемых образцах составляла от 2 % до 12%. Дубильные вещества образовывали с хлоридом железа (III) фиолетовое окрашивание. По радиусу окрашенных зон судили о степени высвобождения дубильных соединений сока крапивы. Полученные в ходе эксперимента результаты приведены в таблице 4.
Таблица 4
Результаты изучения влияния концентрации сока крапивы на степень
высвобождения его БАВ из гелей
|
Концентрация сока крапивы, % |
Величина окрашенных зон, мм |
||
|
4 часа |
8 часов |
12 часов |
|
|
2 |
2 |
4 |
7 |
|
4 |
3 |
5 |
9 |
|
6 |
3 |
5 |
9 |
|
8 |
3 |
6 |
10 |
|
10 |
4 |
7 |
12 |
|
12 |
4 |
7 |
12 |
Анализ полученных результатов подтверждает оптимальную концентрацию сока крапивы 10%.
Таким образом, комплексные исследования по определению концентрации фитокомплексов в геле позволили установить оптимальный его состав с содержанием максимально очищенного хлорофилла в концентрации 2 % и сока крапивы в концентрации 10%.
Рецензенты:
Компанцев Д.В., д.фарм.н., заведующий кафедрой технологии лекарств ПМФИ-филиала ВолгГМУ, г. Пятигорск.
Хаджиева З.Д., д.фарм.н., профессор кафедры технологии лекарств ПМФИ-филиала ВолгГМУ, г. Пятигорск.