Отдельные генетические полиморфизмы модифицируют влияние факторов окружающей среды на организм (курение, стрессы, качество и стиль питания, радиационный фон, загрязнение атмосферы, воды и другие), которые потенциально играют важную роль в смене генной экспрессии и соответственно унаследовании рисков [1-6]. Именно поэтому изучение генетики воспаления придатков у девочек пубертатного возраста приобретает важное медицинское значение сегодня.
Генетически обусловленная дисрегуляция воспалительного ответа в зоне поражения может быть последствием точечной мутации генов семейства интерлейкинов (IL) [7; 8].
Активность продукции IL-1 закодирована двумя отдельными генами: интерлейиін-1-альфа (IL-1α) и интерлейкин-1 бета (IL-1β), размещённых в локусе хромосомы 2q14 (q13-21), в кластере какого также имеется ген антагониста рецептора IL-1 (IL-1Ra) [9; 10]. Функцией последнего является антагонизм рецептора IL-1 и блокада биологических эффектов IL-1α и IL-1β соответственно. В такой способ гены цитокинов регулируют характер иммунного ответа и активность воспалительных реакций организма в ответ на эндогенные и экзогенные факторы. Наиболее выучены биаллельные полиморфизмы IL-1β в позициях -511, -31 и +3954, что есть однонуклеотидными транзициями [11].
Клинический интерес имеет точечная мутация в 511-й позиции промотора гена IL-1β . Доказано, что полиморфные варианты данного гена высокоактивны в отношении продукции одноименного цитокина. У гомо- и гетерозиготных лиц за мутантным аллелем гена IL-1β продуцируется соответственно в 4 и 2 раза больше данного цитокина, чем у гомозигот за «диким» аллелем этого гена [12], наличие Т-аллели ассоциирует с тяжелым протеканием эндометриоза [8], язвенной болезни и эффективностью терапии [13], хроническим обструктивным заболеванием легких [14], высоким риском почечной недостаточности [15], хроническим и гнойным протеканием синуситов у детей [12].
Поскольку -511С/Т-полиморфизм гена ІЛ-1β (id.: rs16944) имеет важную роль в работе иммунной системы и может быть одной из главных причин генетически обусловленной дисрегуляции воспалительного ответа и возможной чувствительности к антибактериальной терапии, посчитали за необходимость провести анализ -511С/Т-поліморфізму гена ІЛ-1β (id.: rs16944) в структуре больных на сальпингоофориты девочек раннего (12-14 лет) и позднего (15-18 лет) подросткового возраста и определить его влияние на развитие специфического или неспецифического воспаления придатков.
Цель исследования
Анализ связи полиморфизма гена 511C/T IL-1β с специфическими и неспецифическими сальпингоофоритами у девочек подростков (12-18лет).
Материалы и методы
В исследовании приняли участие 95 больных на обостренные хронические сальпингоофориты, девочки-подростки 12-18 лет, что проходили стационарное лечение в гинекологическом отделении родильного дома № 1 г. Черновцы в 2011-2013 годах. У родителей несовершеннолетних взято письменное согласие на участие детей в клиническом исследовании.
Отбор пациенток, постановка диагноза, распределение по группам проводили согласно критериям и классификациям отечественного, международных обществ акушерства и гинекологии (International Societies of Obstetrics&Gynecology, European Society of Gynecology), а также действующих приказов МОЗ Украины [16-18].
Этап скрининга прошли 88 девочек-подростков с обострением хронических сальпингоофоритов. Среди пациентов 59,1 % (52) - с специфичным сальпингоофоритом, 40,9 % (36) - с неспецифическим сальпингоофоритом, 34,1 % (30) девочки 12-14 лет, 65,9 % (58) девочек 15-18 лет. Контрольную группу составили здоровые девочки-подростки (n=31) соответственного возраста: 12-14 лет - 32,3 % (10) лиц, 15-18 лет - 67,7 % (21) лиц соответственно (р> 0,05).
Всем больным проведен комплекс обследований: общеклинические, гинекологические, лабораторные, инструментальные (УЗИ органов малого таза).
Для исследования -511 (C/T)-полиморфизма гена IL-1β выделили ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови пациентов с помощью набора реагентов «ДНК-сорб-В» (Россия). ПЛР-реакцию проводили с использованием Taq-ДНК-полимеразы и специфических праймеров (прямого 5′-TGG CAT TGA TCT GGT TCA TC -3′ и обратного 5′- GTT TAG GAA TCT TCC CAC TT-3) [19].
Статистическую обработку проводили с помощью прикладных программ Statistica® 7.0 (StatSoftInc., США). Анализ качественных признаков проводили за критерием c2 (при частотах менше 5 - точный тест Фишера). Определяли соответствие распределения генотипов в популяции равновесия Харди - Вайнберга. Влияние факторов развития сальпигоофоритов оценивали за величиной относительного риска (RelR), отношение рисков (RR) и отношение шансов (OR) с 95 % доверительным интервалом [95 % CI] с учетом критерия c2(df = 1), использовали модель логистической регрессии. Разницу считали вероятной при р< 0,05.
Результаты
Распределение генотипов С-511Т - полиморфизма гена IL-1β свидетельствует вероятное преобладание благоприятного СС-генотипа у лиц контрольной группы у 2,04 раза (c2 = 5,49, p = 0,019) без существенных отличий в частоте наблюдения промежуточного генотипа (р> 0,05) (таблица 1). Мутантные ТТ-гомозиготы чаще определяли у лиц основной группы в 2,33 раза c2( = 6,59, p = 0,01). Относительная частота анализированных генотипов у лиц 12-14 и 15-18 лет, как в контрольной группе, так и в основной группе вероятно не отличалась. Но соотношение С:Т- аллелей у девочек-подростков, болеющих сальпингоофоритом, 15-18 лет преобладала в пользу мутантного Т-аллели 44:72 (c2 = 6,39, p = 0,041), при невероятной диспропорцийности у пациенток 12-14 лет - 22:38 (c2 = 4,95, p = 0,085). При этом ТТ-генотип у девочек 12-14 лет выявляли в 2,33 раза чаще, чем СС-генотип (c2 = 4,80, p = 0,028), аналогично у подростков 15-18 лет ТТ-генотип регистрировали в 2,16 раза чаще, чем СС-вариант (c2 = 7,67, p = 0,006) соответственно.
Таблица 1
Распределение генотипов С-511Т-полиморфизма гена IL-1β у девочек пубертатного возраста
|
№ |
Генотипыгена IL-1β |
Группы обследования, n (%) |
c2 Р |
||
|
Пациенты, n=88 (%) |
Контроль,n=31 (%) |
OR [95% CI] |
|||
|
1 |
СС-генотип, n=31 (%) |
18 (20,5) |
13 (41,9) |
0,36 [0,15-0,86] |
c2=5,49 p=0,019 |
|
2 |
ТС-генотип, n=42 (%) |
30 (34,1) |
12 (38,7) |
0,82 [0,35-1,91] |
c2<1,0 p>0,05 |
|
3 |
ТТ-генотип,n=46 (%) |
40 (45,4) |
6 (19,5) |
3,47 [1,30-9,30] |
c2=6,59 p=0,01 |
У больных подростков распределение частот генотипов за полиморфизмом С-511Т-вариантом гена IL-1β соответствует ожидаемому равновесию Hardy-Weinberg с невероятной тенденцией к гетерозиготному дефициту (F = 0,25-0,28, р> 0,05), что не повлияло на нормальность популяционного распределения в обследуемой популяции (таблица 2).
Таблица 2
Аллельное состояние С-511Т полиморфизма гена IL-1β и гетерозиготность у девочек пубертатного возраста
|
Группы |
Алели, n (%) |
РС |
РТ |
НО |
НЕ |
F |
c2 |
Р |
|
|
С |
Т |
||||||||
|
Основнаягруппа, n=176 |
66 (37,5) |
110 (62,5) |
0,38 |
0,62 |
0,34 |
0,47 |
0,27 |
3,51 |
0,06 |
|
Контрольнаягруппа, n=62 |
38 (61,3) |
24 (38,7) |
0,61 |
0,39 |
0,39 |
0,47 |
0,18 |
1,31 |
0,25 |
|
Всего, n=238 |
104 (43,7) |
134 (56,3) |
0,44 |
0,56 |
0,35 |
0,49 |
0,28 |
3,75 |
0,053 |
Примичание:
1. Рс - относительная частота Салеля; Рт - относительная частота Т алеля.
2. Н0 - фактическая гетерозиготность; НЕ - ожидаемая гетерозиготность; F - коэффициент инбридингу (относительное отклонение частот генотипов от панмиксии).
3. c2p - критерий справедливости «нулевой» гипотезы между фактической и ожидаемой гетерозиготностью.
4. n (%) - количество (процент) наблюдений.
Благоприятный СС-генотип наблюдали у каждого пятого подростка с сальпингоофоритами (20,5 %) и почти у каждого второго (41,9 %) группы контроля. Промежуточный гетерозиготный СТ-вариант регистрировали почти у каждой третьей девочки (34,7 % в основной группе, 38,7 % у здоровых). «Неблагоприятный» ТТ-генотип выявлен почти у половины лиц основной группы (45,4 %) и только у каждого пятого здорового подростка (19,4 %).
Распределение генотипов С-511Т полиморфизма гена IL-1β в приделах каждой возрастной группы с учетом специфичности воспалительного процесса наведены в таблицы 3. Вероятных различий в дистрибуции аллельных вариантов анализируемого гена IL-1β в возрасте девочек 12-14 лет не установлено. У пациенток 15-18 лет при специфичном воспалении также существенных изменений не выявлено, причём при неспецифическом воспалении преобладал мутантный Т-аллель - 32-й (72,7 %) над 12-м (27,3 %) С-аллелям (χ2 = 10,4, р = 0,006). СС-генотип часто наблюдался у подростков с неспецифическим сальпынгоофоритом 12-14 лет в 2,29 раза (χ2 = 5,94, р = 0,048), тогда как у девочек 15-18 лет наоборот: гомозиготный С-вариант чаще встречался при наличии специфического воспаления в 3,06 раза (χ2 = 7,11, р = 0,038) (табл. 3).
Специфичные сальпингоофориты чаще встречались у девочек-носителей СС-генотипа в возрасте 15-18 лет в 2,22 раза, чем у таких 12-14 лет (χ2 = 5,88, р = 0,049). Неспецифические сальпингоофориты, наоборот, встречались реже у владелец данного генотипа в возрасте 15-18 лет в 3,15 раза, чем у подростков из аналогичного генотипа 12-14 лет (χ2 = 7,22, р = 0,031).
Таблица 3
Дистрибуция генотипов С-511Т полиморфизма гена IL-1β у девочек пубертатного возраста больных сальпингоофоритом с учетом специфичности воспаления в зависимости от возраста обследуемых.
|
Больные сальпингоофоритами |
№ |
Генотипы гена IL-1β, n (%) |
c2 р |
|||
|
СС, n=18 |
ТС, n=30 |
ТТ, n=40 |
||||
|
12-14 лет, n=30 (%) |
Специфичное воспаление, n=16 (%) |
1 |
2 (12,5) |
6 (37,5) |
8 (50,0) |
c2=5,25 р=0,072 |
|
Неспецифичное воспаление, n=14 (%) |
2 |
4 (28,6) |
4 (28,6) |
6 (42,9) |
c2<1,0 p>0,05 |
|
|
c2 р |
c2=5,94 р=0,048 |
c2<1,0 p>0,05 |
c2<1,0 p>0,05 |
- |
||
|
15-18 лет, n=58 (%) |
Специфичное воспаление, n=36 (%) |
1 |
10 (27,8) |
12 (33,3) |
14 (38,9) |
c2=1,0 р>0,05 |
|
Неспецифичное воспаление, n=22 (%) |
2 |
2 (9,09) |
8 (36,4) |
12 (54,5) |
c2=10,4 р=0,006 |
|
|
c2 р |
c2=7,11 p=0,038 |
c2<1,0 p>0,05 |
c2=1,35 p=0,24 |
- |
||
Эпидемиологический анализ риска появления сальпингоофоритов всех форм в зависимости от возраста свидетельствует, что Т-аллель и ТТ-генотип являются факторами риска воспаления придатков у девочек 15-18 лет [OR = 2,95-4,87, OR 95 % СІ = 1,29-18,4, р ≤ 0,013-0,006], влиятельней - неспецифического сальпингоофорита [OR = 4,80-7,20, OR 95 % СІ = 1,63-31,7, р ≤ 0,0012-0,006] и не влияют на появление данного воспаления в возрасте 12-14 лет независимо от его формы. С-аллель уменьшает шансы на появление сальпингоофоритов, но только в возрасте 15-18 лет [OR = 0,34, р = 0,003], особенно неспецифической формы воспаления придатков [OR = 0,21, р = 0,0006] и с наибольшим риском у обладательниц СС-генотипа [OR = 0,13, р = 0,011].
Высновки
У девочек-подростков, болеющих сальпингоофоритами, 15-18 лет преобладает мутантный Т-аллель гена IL-1β (id.: rs16944) над С-аллелям в соотношении 72:44 (р = 0,041), при невероятной диспропорционности у пациенток 12-14 лет - 38:22 (р > 0,05). Благоприятный СС-генотип наблюдали у каждого пятого подростка с сальпингоофоритами (20,5 %) и почти у каждого второго (41,9 %) группы контроля. Промежуточный гетерозиготный СТ-вариант регистрировали почти у каждой третьей девочки (34,7 % в основной группе, 38,7 % у здоровых). «Неблагоприятный» ТТ-генотип выявлен почти у половины лиц основной группы (45,4 %) и только у каждого пятого здорового подростка (19,4 %). Специфичные сальпингоофориты чаще встречались у девочек-носителей СС-генотипа в возрасте 15-18 лет в 2,22 раза, чем у таких 12-14 лет (χ2 = 5,88, р = 0,049). Неспецифические сальпингоофориты, наоборот, встречались реже у владелец данного генотипа в возрасте 15-18 лет в 3,15 раза, чем у подростков с аналогичным генотипом 12-14 лет (χ2 = 7,22, р = 0,031). Т-аллель и ТТ-генотип являются факторами риска воспаления придатков у девочек 15-18 лет [OR = 2,95-4,87, OR 95 % СІ = 1,29-18,4, р ≤ 0,013-0,006], влиятельней - неспецифического сальпингоофорита [OR = 4,80-7,20, OR 95 % СІ = 1,63-31,7, р ≤ 0,0012-0,006] и не влияют на появление данного воспаления в возрасте 12-14 лет независимо от его формы. С-аллель уменьшает шансы на появление сальпингоофоритов, но только в возрасте 15-18 лет [OR = 0,34, р = 0,003], особенно неспецифической формы воспаления придатков [OR = 0,21, р = 0,0006] и с наибольшим риском у обладательниц СС-генотипа [OR = 0,13, р = 0,011]. В перспективе планируется провести анализ ассоциации изменений гормонального зеркала из С-511Т - полиморфизма гена IL-1β у больных на сальпингоофорит девочек пубертатного возраста.
Рецензенты:
Сидорчук Л.П., д.м.н., профессор, зав. кафедрой семейной медицины, Буковинский государственный медицинский университет, г. Черновцы;
Юзько О.М., д.м.н., профессор, зав. кафедрой акушерства и гинекологии, Буковинский государственный медицинский университет, г. Черновцы.